组培室设计与管理（植物组织培养课件）

组培室设计与管理组培室设计组培室管理组培室管理【知识点】掌握常用消毒剂的配制方法。

技能点】能熟记组培常用器材的清洗要求及其步骤素质要求：具有服务“三农”意识、创新意识、环保意识、安全意识、

团队意识；具有任务执行力，规范操作、一丝不苟的工作态度。一、环境日常管理1.注重员工培训组培员工的素质高低直接决定了组培工作的效率与质量。

培训内容包括职业道德、无菌观念、团队精神、组培知识、操作规范、管理制度等。2、加强日常管理（1）实行岗位责任制，明确岗位职责。（2）建立组培室管理制度，加强员工的安全卫生教育，严格控制人员出入。（3）药品、器械等分类存放，严格药品使用登记制度。（4）设施设备维护与保养专人负责，安全使用，定期检修，发现安全隐患及时排除。（5）上下工序交接记录填写认真、规范。（6）定期进行空间消毒灭菌，培养室分区、分类摆放瓶苗，标识清晰，污染的瓶苗及时清除。（7）要求员工注意个人卫生，规范操作，监督互查，相互配合，协同一致，诚实守信。3.空间消毒（1）药液喷雾。植物组织培养中常用70%酒精对接种室、培养室空间及墙壁进行喷雾消毒。用一些药剂涂擦、喷雾灭菌物体表面，如台面、桌面、墙面、双手、植物材料表面等。70%的酒精，0.25-1%的新洁尔灭（苯扎溴铵/溴化苯烷铵）喷洒培养室、接种室或其他实验室，可有效杀死空气中的杂菌，同时可降尘。（2）药剂熏蒸。可采用冰醋酸加热对实验室空间进行熏蒸消毒。冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。（3）射线消毒。常用的射线为紫外线,紫外线可损伤皮肤和角膜，应注意防护。（4）空气污染检验①平板检验法。②斜面检验法。二、组培常用器械消毒1.高压灭菌锅的使用①检查仪器仪表（压力表为0）。②检查灭菌锅安全水位。若水位不足往外锅加水至安全水位。湿热灭菌方法③关闭上排气阀，在内锅内放入待灭菌物品，盖上锅盖，打开放气阀，对角拧紧锅盖螺帽后关闭放气阀。④接通电源打开开关，设置灭菌温度和灭菌时间分别为121℃,20min。待压力上升至0.05MPa时缓慢打开上排气阀，将冷空气排尽为0时，关闭排气阀。⑤继续加热待温度上升至121℃、0.1MPa时间维持20min后关闭电源，打开上排气阀，待压力表为0MPa后，打开放气阀，依次打开锅盖，取出物品水平放。灭菌注意：灭菌方法与药剂要根据不同材料不同目的适当选用，湿热灭菌培养基要在制备后24h内完成灭菌工序。2.真空泵用以辅助过滤除菌。常用于植物生长调节物质和抗生素。一般利用孔径为0.22μm微孔滤膜来进行除菌。过滤灭菌方法液体过滤液体量大时，使用抽滤装置或者真空泵；液量小时，用注射器等小型器具。微孔过滤由醋酸纤维素和硝酸纤维素混合制成。滤膜有吸附作用，在过滤灭菌液体较多时，应勤换滤膜。空气过滤组培车间要求严格规模较大，可采用空气过滤系统对整个空气过滤灭菌，但投入较高。无菌操作环境（超净工作台）采用空气过滤灭菌，创造局部的无菌环境。3.烘箱在烘箱内加热烘烤至160～170℃，维持2h可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，适用于耐高温的玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器、接种器械、工作服等）。干热灭菌方法——干热灭菌的物品要预先洗净并妥善包扎，放入箱内，以免灭菌后取用时重新污染。——干热灭菌后，待充分冷凉，才能打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂，防止强烈的冷热对流使冷空气被吸入包扎层内引起污染。注意：1、玻璃器皿等在灭菌前必须正确包裹和封口，以保证玻璃器皿灭菌后不被外界杂菌所污染。2、物品放入干燥烘箱内，不能摆放过密，以免妨碍空气流通，不得使器皿与烘箱内层底板直接接触。使用对象金属器械如镊子、剪子、解剖刀（针）等。灼烧灭菌方法4.杀菌器金属器械与材料直接接触的部分，需在酒精灯外焰部分灼烧充分，直至尖端部分烧红为止。高温灭菌器，温度达200-300℃，灭菌时间30秒以上。；冷却后使用。灼烧灭菌方法注意问题在无菌操作时，把镊子、剪刀等浸入70%的酒精广口瓶中，使用前取出在酒精灯火焰中灼烧。三、组培常用器具洗涤与灭菌1.清洗目的：防止油污、重金属离子、酸碱等有害物质残留在器皿内，影响培养物生长。2.清洗方法：1）新玻璃器皿：用1%左右的稀盐酸将可溶性无机物除去，也可用洗涤剂洗涤。2）用后玻璃器皿：需立即浸入水中（如有污染，应先用70%的酒精浸泡灭菌），再选择碱洗法/酸洗法洗涤。3）有微生物污染的器皿：必须先煮沸或高温高压杀菌，否则会产生孢子飞扬，污染环境。温热的洗衣粉溶液清洗，再用60-70℃的热水清洗，自来水冲洗干净后，再用蒸馏水漂洗两遍。当玻璃器皿上粘有蛋白质或其他有机物时，用稀盐酸将玻璃器皿浸泡4h或较长时间（最好过夜），将可溶性的有机物除去，再用水清洗。酸洗法碱洗法洗液的配置肥皂液洗衣粉水重铬酸钾溶液称40g工业用重铬酸钾加入少量水中，加热溶化，待冷却后再慢慢往上述水溶液中加入工业用浓硫酸，边加边搅拌，最后定容到1000ml，加盖备用。重铬酸钾洗液可以重复使用，直至溶液变为绿色（因腐蚀性危险，现很少用）。3.玻璃器皿的洗涤对新购或使用过但未污染的玻璃器皿采用酸洗法或碱洗法进行清洗。新购玻璃器皿或使用过未污染的洗涤方法1%稀盐酸或洗液浸泡4h以上自来水清洗10%-20%温热洗衣粉液刷洗蒸馏水冲洗或改用洗涤剂洗涤酸洗法60%-70%热水或自来水清洗倒扣在晾干架或工作台上晾干或烘干无尘柜中保存碱洗法污染物洗涤前的处理：曾装有污染组织或培养基的器皿，不打开瓶盖，先把它们放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，减少污染微生物。或用70%的酒精（稀酸稀碱）滴入覆盖污染物表面几分钟。丢弃污染的一次性消耗品，应先高压蒸汽灭菌，以降低污染源。使用过的玻璃器皿有污染的洗涤方法自然水浸泡去除残余培养基或残渣蒸馏水冲洗1次后晾干或烘干洗涤剂或洗衣粉水溶液浸泡并刷洗自来水冲洗或清水漂洗干净无尘柜中保存自来水冲洗1次玻璃器皿的存放将洗干净的器皿置于烘箱内在75℃下干燥或常温下晾干，然后放于防尘柜中。在加热干燥或常温晾干时，各种玻璃容器都应口朝下放，以便使里面的水能很快流尽。透明锃亮内外壁水膜均一不挂水珠无油污和有机物残留洗涤标准案例移液管、量筒和容量瓶的洗涤方法操作步骤：洗涤液中浸泡2h以上→取出在流水中冲洗半小时→蒸馏水冲淋1次。4.吸管等难洗的用具：可以在洗液中浸泡后再洗。5.金属用品：用酒精擦干并保持干燥。6.胶皮塞、胶皮管：用合成洗涤液洗涤，因其吸附力较强，需多次清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。7.常用药剂的配制1)酒精稀释。酒精稀释的原理是稀释前后纯酒精量相等。即原酒精浓度×取用体积=稀释后浓度×稀释后体积。比如：原酒精浓度为95%，欲配成70%酒精配制方法为：取95%酒精70ml，加蒸馏水至95ml，摇匀，即为70%的酒精。这里原酒精浓度为95%，取用体积为Xml，稀释后浓度为70%，稀释后体积为95ml，代入上述公式，95%×X=70%×95，计算可得X=70。2.1mol/L氢氧化钠的配制。（NaOH摩尔质量=分子克数=40）解答：称40gNaOH加蒸馏水1000ml，即为1mol/LNaOH。3.1mol/L盐酸（HCl）的配制。具体配制盐酸的浓度时，应考虑原浓酸的比重浓度。如配制1mol/LHCl100ml，比重为1.19，质量百分比38%。1.日常洗涤方法2.玻璃器皿洗涤标准3.配制70%酒精3.配制1mol/L氢氧化钠小结

组培室设计与管理组培室设计组培室管理组培室设计【知识点】组培室的构成及其功能【技能点】能熟记常用仪器的使用方法、注意事项和保养方法

素质要求：具有服务“三农”意识、创新意识、环保意识、安全意识、

团队意识；具有任务执行力，规范操作、一丝不苟的工作态度。一、组培室的基本组成

1、设计原则1）根据培养目的、培养规模、资金能力以及现有条件等来确定工厂（实验室）的大小，体现适用性原则。2）根据生产工艺流程和操作步骤来确定实验室布局，体现合理性原则。3）防止污染，体现环保型原则。4）降低成本，体现经济实用性原则。2、环境要求选址空气清新、光线充足、通风良好、环境清洁、水电齐备、交通便利的地方。分室名称功能贮藏室主要用于存放各种化学药品、仪器设备、玻璃器皿等洗涤室培养容器和实验用具等洗涤、干燥和贮存；培养材料的预处理；组培苗出瓶、清洗与整理等配制室母液和培养基的配制；培养材料的预处理灭菌室培养基、接种工具与用品的消毒灭菌接种室离体植物材料的表面灭菌、接种；培养物的转接等无菌操作。培养室培养离体材料缓冲室以防止带菌空气直接进入接种室和工作人员进出接种室时带进杂菌表1组培室各分室的功能实验室设计案例(讨论)二、组培常用基本器械

天平、显微镜、酸度计、电磁炉、超净工作台、干燥箱、培养架、蒸馏水发生器、冰箱、空调、加热器、高压灭菌、恒温箱等。1.天平：分析天平，电子天平称量微量元素、维生素、激素等称量大量元素、糖、琼脂等2.显微镜：解剖镜、生物显微镜等生物显微镜3.酸度计、pH试纸用于校正培养基的pH。4.电磁炉5.无菌超净工作台6.培养基灌装机及洗瓶机8.除湿机7.空调机9.冰箱10.纯水机与蒸馏水发生器11.灭菌设备干热消毒的普通柜（烘箱）用于干燥洗净后的玻璃器皿，用80℃的温度烘干组织培养植物材料以测定干物质。高压灭菌锅

用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。工作原理：在密闭的蒸锅内，0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。12.培养设备光照培养架照度计13.恒温箱又称培养箱14.摇床与转床表2组培室主要仪器设备类别仪器设备名称贮藏设备药品柜、橱柜、医用小平推车等洗涤设备干燥箱、超声波清洗器、洗瓶机、蒸馏水发生器、工作台、医用小平推车等培养基配制设备普通冰箱、低温冰箱、电子天平、托盘天平、工作台、药品柜、医用小平推车等灭菌设备高压灭菌锅、液体过滤灭菌装置、干热消毒柜、烘箱、微波炉、喷雾消毒器、工作台等接种设备超净工作台、普通解剖镜、接种器具杀菌器、配电盘、医用小平推车等培养设备空调机、加湿器、除湿机、人工气候箱或光照培养箱、摇床、转床、振荡器、光照时控器、照度仪、换气扇、配电盘等观察与生化鉴定设备普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、普通解剖镜、低温冰箱、培养箱、切片机、水浴锅、低温高速离心机、电子分析天平、细胞计数器、PCR仪、酶联免疫检测仪、分子成像仪、液相色谱仪、电激仪、毛管电泳仪、图像拍摄处理设备、电脑、工作台等表3组培室常用玻璃器皿与器械用品类别玻璃器皿与器械用品名称贮藏用品化学试剂瓶、化学药剂、各种玻璃器皿等洗涤用品晾干架、洗液缸、水槽、试管刷、周转箱培养基配制用品电炉、试管、培养瓶、试剂瓶、烧杯、培养皿、移液管、移液枪、移液管架、注射器、吸管、滴瓶、量筒、容量瓶、分液漏斗、不锈钢锅、磁力搅拌器、周转箱、玻璃棒、打火机或火柴、记号笔、计算器、标签纸、蒸馏水桶、尼龙绳、聚丙烯塑料封口膜、棉塞、牛皮纸、纱布等接种与灭菌用品酒精灯、喷壶、紫外光灯（40W）、钻孔器、接种工具架、不锈钢筛网、接种针和接种钩、手术剪（12cm、15cm、18cm）、解剖刀（4号刀柄、21-23号刀片）、手术镊（扁头镊子20-25cm、钝头镊子20-25cm、尖头镊子16-25cm、枪形镊子等20-25cm）、培养皿（∮6cm、∮9cm、∮12cm）、打火机或火柴、记号笔、标签纸、周转箱、无菌服、口罩、实验帽等培养用品培养瓶、光照培养架、荧光灯、LED灯等观察与生化鉴定用具载玻片、盖玻片、染色片、滴瓶、烧杯、试管、玻璃试剂瓶等三、组培常用器皿与用具1.器皿1)培养器皿2)