液相色谱使用中样品预处理需要注意的环节 液相色谱解决方案

第第页液相色谱使用中样品预处理需要注意的环节液相色谱解决方案液相色谱具有分别效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分别分析。目前液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中紧要的分别技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分别课题必不可少的工具之一、虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。1样品预处理方法样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要:①过滤；②萃取；③衍生化（柱前衍生）；④液相色谱（低压柱层析）。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、加添检测器灵敏度（富集）、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避开色谱分别故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外汲取或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分别度（质量变化）。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。用于液相色谱分析的样品溶液必需均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并堵塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015m以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分别出被分析的组分,或者削减损坏柱的物质（如蛋白质等）和干扰物。一般采纳有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样加添了样品浓度,提高了灵敏度,同时避开了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解本领。除了脂溶性和水溶性组特别,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下:1.1水溶性样品（1）酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2流下吹干,用适当的溶剂解后进样。（2）碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。（3）中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。1.2脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样,或在N2流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。2分析中的污染一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。2.1环境污染仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染,影响检测结果,这种污染很难校正。因此,仪器室与其他试验室应隔离,保持清洁,仪器室内应安装空调,注意防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70%为宜。2.2容器试验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等,在进行分析时,应依照待则样品的要求来选则器皿,不管使用哪种器皿,容器的洗条清洁都是很紧要的,也是取得好的检测结果的基本保证。2.3试剂在液相色谱分析中,所选用的试剂必需是色谱纯、优级纯或分析纯,假如用含量有杂质的试剂,则会显现杂峰而影响测定结果。3标准溶液的配置在配置标准溶液时,先要配置现定浓度的内标溶液,在标准溶液和样品溶液中好使用同一批次配制的内标溶液以削减误差。（1）配制标准溶液的物质应当是色谱纯的、性质稳定。（2）常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保存。（3）在配制维生素类标准品时,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。4样品预处理过程中的重要故障与解决方法（1）色谱图中显现无关的峰,原因有可能是样品过滤器带来污染,解决方法如下:①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验；②更改过滤器类型；③采纳交替清洗技术。（2）一些或全部化合物的峰比预期的小,尤其是低浓度的样品,原因可能是样品过滤器表面吸附下降,解决方法如下:①更改过滤器类型；②严格按相同条件处理所用样品；③采纳交替清洗技术。（3）回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解决方法如下:①加添萃取时间,使用热溶剂；②修改清洗方法。（4）色谱峰变宽,柱寿命缩短,原因可能是样品带来的干扰与污染,应改进清洗方法。（5）精度差,原因可能是回收不完全,解决方法如下:①改进或替换衍生化、分别、萃取或其他条件；②用自动化处理装置提高精度。总之,对分析仪器来说,避开故障的重要的做法是正确的操作和调整,切忌盲目操作,对核心部位如离子室、微电流放大器等削减震动和碰撞,保证绝缘,并削减各种系统误差要注意以上要点,但还要注意日常的仪器保养,色谱柱子的维护,仪器室保持清洁,这样才能使液相色谱处于佳工作状态,在分析中发挥其紧要的作用。高效液相色谱仪之高压输液系统高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分别系统、检测系统、记录系统等五大部分构成。分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分别，分别后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度变化成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高处与低处的依据。高压输液系统高压输液系统由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等构成。（1）溶剂贮存器。溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1～2L，用来贮存充足数量、符合要求的流动相。（2）高压输液泵。高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分别过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过色谱柱，就需要高压泵注入流动相。对泵的要求：输出压力高、流量范围大、