新生儿溶血病血清学检查标准操作规程

临床输血质量管理体系技术性规程文件名称：新生儿溶血病血清学检查标准操作规程文件编号：HZYY-CBT/SOP001持有部门：输血科医务科护理部妇产科儿科制订者：××××××审核者：×××核准者：×××制订日期：××年××月××日审核日期：××年××月××日核准日期：××年××月××日执行日期：××年××月××日版本/修改状态：A/0文件页数:共6页文件性质：□普通□限制（仅限本院范围，未经授权）新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性及有效性。适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。职责输血科(血库)技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。原理通过检测新生儿血浆中是否存在来自母体并与新生儿红细胞血型抗原不相容的IgG类红细胞血型抗体，直接抗人球蛋白试验证实新生儿红细胞是否被致敏，放散试验证实新生儿红细胞是否能解离出来自母体的红细胞血型抗体，根据以上三项试验结果综合诊断新生儿溶血病。设备与材料材料单克隆抗-A、抗-B、抗-D定型试剂、多特异性抗球蛋白试剂或微柱凝胶抗球蛋白卡、A、B、O型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、小试管、滴管、小玻棒、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本。设备普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、普通显微镜。检测环境室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。操作步骤血标本采集及处理采集患儿父母的血标本采集患儿父母的血标本各3～5ml，分离出血清，配制3%～5%红细胞盐水悬液。采集患儿血标本采集患儿静脉血3-4ml，EDTA-K2抗凝，离心分离出血浆及红细胞，取压积红细胞30-50μl，加生理盐水1ml配制成3%-5%的红细胞悬液。如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球，把血块倒在棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下的红细胞悬液。患儿血标本血型鉴定具体操作执行《ABO和Rh（D）血型鉴定标准操作规程》。ABO血型测定一般只做正定型。直接抗球蛋白试验具体操作执行《抗球蛋白试验标准操作规程》中的直接抗球蛋白试验部分。游离抗体检查：取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，每管加患儿血清2滴，再分别加入3%～5%的A、B、O反定型试剂红细胞悬液1滴。37℃致敏1h后取出，若已发生凝集，不必继续往下做。若不凝集，用盐水充分洗涤3次反应物后加入抗人球蛋白溶液1滴。1300g离心15s，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。按表1分析结果。或从以上已加入受检血浆（或放散液）和相应试剂红细胞，并混匀的反应试管中各取50μl分别加入已标记的微柱凝胶抗球蛋白卡各微孔中，采用微柱凝胶抗人球蛋白卡间接抗球蛋白试验，具体操作执行《微柱凝胶试验标准操作规程》。表1患儿血清中游离抗体检查结果意义指示红细胞意义AcBcOc+--游离的抗-A-+-游离的抗-B++-游离的抗-A、抗-B或者抗-AB±±+游离的ABO系统以外抗体---无游离抗体放散试验依据结果，采用合适的放散方法进行放散试验，取患儿压积红细胞1-2ml，用生理盐水洗涤4次（最后1次洗液转入另一试管中留作对照，用以确认是否洗涤彻底），用洗涤后的压积红细胞做热放散试验，具体操作执行《放散试验标准操作规程》，放散试验结果判断见表2。表2患儿红细胞抗体释放试验意义指示红细胞AcBcOc意义+--放散出IgG抗-A-+-放散出IgG抗-B++-放散出抗-AB，或同时放散出IgG抗-A或抗-B±±+放散出ABO血型以外的抗体---没有放散出抗体患儿母亲血标本血型鉴定（执行《ABO和Rh（D）血型鉴定标准操作规程》）：IgG抗-A（B）效价测定具体操作执行《IgG抗-A（B）效价测定标准操作规程》。抗体筛选、鉴定试验具体操作执行《红细胞血型不规则抗体筛选及鉴定标准操作规程》。患儿父亲血标本ABO和Rh（D）血型鉴定。具体操作执行《ABO和Rh（D）血型鉴定标准操作规程》。根据表3，分析结果。表3新生儿溶血病检测结果判断直抗试验游离试验释放试验结论---不能证实为血型免疫抗体引起的新生儿溶血病+--可疑为新生儿溶血病-+-可疑为新生儿溶血病--+可以证实为血型免疫抗体引起的新生儿溶血病+-+同上++-同上-++同上+++同上注意事项新生儿血标本要求比较高，要求采集血液3～4ml，分为大约相等的两份，一份不抗凝，另一份采用EDTA抗凝。如果只有不抗凝血标本，不宜在试管中用竹签挤压血块。当母亲患有IgG抗体自身免疫性疾病时，IgG抗体可进入胎儿体内引起贫血，患儿DAT也可为阳性，检测母亲DAT为阳性有助于鉴别。鉴定患儿血型时，应注意“遮断现象”影响鉴定结果，如患儿为RhD阳性且红细胞D抗原已完全被来自母体的IgG抗D饱和，DAT呈强阳性，用IgM抗-D鉴定RhD血型可出现假阴性，此时可用温和的热洗脱法解决RhD血型鉴定困难问题。传统的观点认为，对ABO血型不合HDN的检测宜用热放散法，对Rh血型不合HDN宜用乙醚放散法，但近几年文献报道表明，热放散对多种抗体（包括部分IgG）致敏红细胞的放散效果均较好，即使是Rh系统抗体致敏的红细胞，热放散效果与乙醚放散效果差异也不明显。乙醚放散试验操作较为复杂，且放散液中含血红蛋白浓度高，不适于用微柱凝胶技术检测其中的抗体，故本规程只推荐采用热放散法。脐血标本不宜作为检测标本，尤其对ABO新生儿溶血病，容易出现无临床意义的阳性指标。具有阳性指标的患儿常常并不出现明显的溶血表现。一旦怀疑为新生儿溶血病时，宜尽早采集血标本送检。5天以后采集的血标本，检出阳性指标的机会很少。但也有部分新生儿溶血病患儿出生2周后仍可检出阳性结果。母亲IgG抗-A（B）效价高低具有参考价值说法不一，有的说在64以上有参考价值（见刘达庄主编《免疫血液学》，2002年，上海科学技术出版社，P137），有的说效价在256以上有参考价值（见王培华主编《输血技术学》，2002年，P233）；512以上出现明显临床症状的较多。Rh（D）溶血病抗-D效价大于32有意义。采集患儿父亲的血标本主要目的是，当新生儿血型鉴定困难时，可以根据夫妻双方的血型推断新生儿血型。新生儿溶血病换血时的血液选择：ABO新生儿溶血病选择Rh血型与患儿相同，ABO血型应与母亲相配合的红细胞及AB型血浆。目前多采用O型洗涤红细胞(与母亲血清相配合)及AB型血浆。Rh系统新生儿溶血病选择Rh血型与母亲同型，ABO血型与患儿同型，且交叉配血相合的血液；或Rh（D）阴性O型洗涤红细胞及AB型血浆，用患儿母亲血清进行交叉配血。相关文件《中国输血技术操作规程》（血站部分）.天津：天津科学技术出版社，1997《输血技术学》（第二版）.北京：人民卫生出版社，2002相关记录《血型血清学试验报告单》《产前免疫性抗体及新生儿溶血病检查原始记录