药品检测技术-鉴别技术（药物质量检验课件）

光谱鉴别法紫外-可见分光光度法：该光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁。含有共轭体系的有机药物在紫外-可见光区（200-760nm波长）有特征吸收。基态激发态分子的能级及电子在能级间的跃迁

v’3J‘

v’2J‘

电子

v1’激发态

v’oJ

v3

v2J

电子

v1J

基态

v0J

电子振动转动能级能级能级

红外光光度法：有机化合物分子受到中红外线的照射后，产生振动能级跃迁，同时伴随转动能级的跃迁，形成振-转光谱，也叫红外光谱。紫外-可见光分光光度法朗伯－比尔（Beer-Lambert）定律当入射光波长一定时（单色光），溶液吸光度A只与溶液中有色物质浓度和比色皿厚度有关，成正比，即A∝LCA＝kLC式中：k－比例常数－系吸系数L－比色皿厚度C－溶液浓度当C为摩尔浓度，令k＝ε，称为摩尔吸光系数当C为百分浓度，令k＝E，称为百分吸光系数

I0I

←L→

ACA与C成线性关系紫外-可见光分光光度法λ1λ2峰峰谷谷010203

比较吸收光谱特性的一致性比测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收用于鉴别常用方法紫外-可见光分光光度法①比测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长紫外-可见光分光光度法

例：乙胺嘧啶供试品在0.1mol/L盐酸介质中的紫外吸收在272nm处为峰,216nm处为谷。紫外-可见光分光光度法

紫外-可见光分光光度法③比较吸收光谱特性的一致性有些药物的吸收峰虽较多，但各峰对应的吸光度的比值是一定的。紫外-可见光分光光度法③比较吸收光谱特性的一致性利用药物本身或其反应产物有吸收特性，进行鉴别。紫外-可见光分光光度法④与对照品比较,对比吸收光谱的一致性己稀雌酚注射液用供试品溶液250-450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别。对照品供试品紫外-可见光分光光度法USP采用对照品法供试药与其对照品按同一方法处理，在同样条件下紫外光谱图一致。在200~400nm波长范围内扫描两溶液,要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的范围内.BP规定一定波长范围内，仅有一个最大或最小吸收JP与ChP相似

SCI文献各国紫外鉴别法比较紫外-可见光分光光度法紫外-可见光分光光度法此法简单易行，应用范围广，使用频率高但因为吸收光谱比较简单，吸收曲线形状变化不大，缺乏精细结构，所以紫外分光光度法鉴别出的相同物质，不一定是同一种物质用作鉴别的专属性不如红外分光光度法红外分光光度法IR色谱法是有机药物分子的振动-转动光谱，能反映药物分子的结构特点，分子中每个基团一般都由相应的吸收峰，且特征性强，（除光学异构体及长链烷烃同系物外）几乎没有两种化合物具有完全相同的红外吸收光谱。因此，红外吸收光谱具有“指纹性”，被广泛地应用于化合物的鉴别。

特点

专属性强、准确度高的特点，应用广（固、液、气）

主要用于组分单一、结构明确的原料药以及结构相近的同类物质。用途原料药同类药（其他方法不易区分的）磺胺类、甾体激素类、半合成抗生素

标准图谱法：Ch.P要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。

对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。红外分光光度法试样的制备方法压片法供试品（约1mg)+干燥KBr/KCl(约200mg)

研磨均匀（玛瑙研钵）

置压膜中真空加压至0.8-1GPa2-3min均匀透明片无明显颗粒供试片同法制空白KBr/KCl片，做空白校正，扣除背景干扰红外分光光度法糊法供试品（约5mg）,滴加少量液体石蜡或其他液体制成糊状物玛瑙研钵

取适量夹于两个KBr片（150mg/片）之间供试片KBr（约300mg）制成空白片，作背景校正红外分光光度法试样的制备方法

膜法

供试品多为高分子聚合物，可做成液膜铺展于适宜的盐片上。

溶液法

液体供试品（或溶于适宜的溶剂内），制成1%-10%的溶液，置于0.1-0.5mm厚的液体池中，即可测得。红外分光光度法20特征区指纹区红外分光光度法标准图谱法：Ch.P要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱，与《药品红外光谱集》中的相应标准图谱对比，如果峰位、峰形、相对强度都一致时，即为同一种药物。

对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不同仪器和操作条件造成的误差。红外分光光度法

各国红外光谱法比较Ch.P采用标准图谱对照法USP采用对照品法BP采用标准图谱对照法、对照品法JP规定条件下测定一定波长处特征吸收峰。红外分光光度法化学鉴别法鉴别方法化学鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法显微鉴别法生物学法

根据药物与化学试剂，在一定条件下发生化学反应所产生的颜色、沉淀、气体、荧光等现象，鉴别药物真伪的方法。

特点

操作简便、反应快速、现象明显、实验成本低，应用范围广；

化学鉴别法是药物鉴别中最常用的一种方法。

化学鉴别法显色反应鉴别法

沉淀反应鉴别法荧光反应鉴别法气体生成反应鉴别法化学鉴别法化学鉴别法显色反应鉴别法向供试品溶液中加入适当试剂，在一定条件下发生化学反应，生成易于观测的有色产物。

①三氯化铁呈色反应——含酚羟基或水解后产生酚羟基的药物显色反应鉴别法6+4FeCl3

+12HCl紫色配位化合物中性或弱酸性条件②重氮化偶合呈色反应——含芳伯氨基或能产生芳伯氨基结构的药物显色反应鉴别法N2+Cl-.+NaNO2+2HCl+NaCl+2H2ON2+Cl-.++NaOH+NaCl+2H2O芳香第一胺粉红色到猩红色重氮盐③Vitali呈色反应——托烷生物碱类药物，具有莨菪酸结构KOH(C2H5OH)KOH深紫色水解莨菪酸3HNO3黄色残渣显色反应鉴别法④茜素氟蓝法——有机氟化物显色反应鉴别法有机氟无机氟离子

茜素氟蓝硝酸亚铈F-+Ce3++

pH4.3碱液吸收蓝紫色氧瓶燃烧法⑤茚三酮呈色反应——含脂肪氨基、类似氨基酸结构的药物显色反应鉴别法茚三酮蓝紫色⑥异羟肟酸铁呈色反应——含芳酸及其酯类和酰胺类结构的药物显色反应鉴别法红色向供试品溶液中加入适当试剂，在一定条件下发生化学反应，生成不同颜色、或具有特殊性状的沉淀物。

沉淀反应鉴别法①丙二酰脲类的硝酸银反应+2AgNO3+2HNO3沉淀反应鉴别法——巴比妥类药物白色沉淀R-Cl-+Ag+AgCl②氯化物的银盐沉淀沉淀反应鉴别法白色沉淀——盐酸盐类药物③苯甲酸盐类的三氯化铁反应+3FeCl3+OH-+7NaCl+2Cl-赭色沉淀沉淀反应鉴别法——苯甲酸盐类药物④还原性基团的银镜反应异烟肼+AgNO3+NH3·H2OAg沉淀反应鉴别法HO—C—COONH4HO—C—COONH4+2Ag+2NH3+2H2OHO—CH—COOHHO—CH—COOH+2Ag(NH3)2OH

水浴中⑤与重金属离子反应沉淀反应鉴别法2+CoCl2H+亮绿色细小钴盐沉淀利多卡因向供试品溶液中加入适当试剂，在一定条件下发生化学反应，生成气体。

气体生成反应鉴别法①胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理生成氨气气体生成反应鉴别法红色石蕊试纸变蓝硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色②化学结构含硫药物，可经强酸处理后加热产生硫化氢气体硫鸟嘌呤●7H2O强酸∆H2S气体生成反应鉴别法（臭鸡蛋气味）醋酸铅试纸变黑③含碘有机药物经直火加热可生成紫色碘蒸汽气体生成反应鉴别法∆I2紫色④含醋酸酯和乙酰胺类的药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。气体生成反应鉴别法硫酸乙醇有香味如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光荧光反应鉴别法①药物本身在可见光下发射荧光如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿色荧光反应鉴别法②药物与适当试剂反应后发射荧光色谱鉴别法色谱法是以试样组分在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法。加入石油醚分层胡萝卜素叶黄素叶绿素A、B原理:基于物质在不同相之间具有不同的分配系数引起的分离1906，俄国植物学家茨维特固定相（stationaryphase）：色谱法中，填入柱管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。流动相(mobilephase)：携带样品流过固定相的流体（一般是气体或液体）称为流动相。色谱柱(chromatographycolumn)：装有固定相的管子称为色谱柱。流动相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）样品（溶解于流动相中的溶质）分离是一个物理的过程

任何色谱法都存在两个相，即流动相和固定相；流动相可以是气体或液体，固定相为固体或涂渍在固体表面的高沸点液体；流动相对固定相作相对运动，它携带样品通过固定相；被分离样品中各组分与色谱两相间具有不同的作用力，这种作用力一般表现为吸附力或溶解能力，正是这种作用力的差异导致通过各组分通过固定相时达到彼此分离。色谱法的共同特点色谱鉴别法是利用药物在一定的色谱条件下，产生特征色谱行为，利用其特征参数（比移值或保留时间）进行鉴别。比较药物的色谱行为及特征参数的检验结果是否与药品质量标准要求的一致，以此来验证药物真伪的方法。

柱色谱法平面色谱法高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography（HPLC）气相色谱法gaschromatography（GC）色谱鉴别法薄层色谱法thin-layerchromatography(TLC)纸色谱法paperchromatography（PC）薄层色谱鉴别法色谱鉴别法是将供试品及规定的对照品按相同的方法，控制相同的条件点样与同一薄层板上，经展开、检视所得的色谱斑点做对比，进行药物的鉴别。一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对照品主斑点的颜色与位置应一致。一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物质在相同的条件下可有不同的Rf值。因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件下比较Rf值可提供定性依据。薄层色谱鉴别法常用的鉴别法①同等条件下，供试品与对照品在同一块薄层板比较②供试品与对照品等体积混合在同一块薄层板比较③供试品与和其化学结构相似对照品比较④将③下两溶液等体积混合点样、比较对照品样品混合薄层色谱鉴别法常用的鉴别法对照品样品混合①同等条件下，供试品与对照品在同一块薄层板比较——供试品所显的主斑点颜色（或荧光）与位置（Rf）应与对照品所显的主斑点一致，而且主斑点大小与颜色深浅也应大致相同；②供试品与对照品等体积混合在同一块薄层板比较——应显单一、紧致的斑点；③供试品与和其化学结构相似对照品比较——主斑点应显两个不同（Rf）的斑点薄层色谱鉴别法色谱鉴别法薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法高效液相色谱、气相色谱法色谱鉴别法高效液相色谱法是特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。气相色谱法是特指一种用气体为流动相的色谱分离分析方法。

在色谱条件及操作条件一定的情况下，被测物质（药物）在色谱柱上的保留值（保留时间或保留体积）是一定的，要求与对照品的一致。流动相

泵色谱柱检测器

泵输液分离

检测

记录AEGBCDF进样阀进样液相色谱组成溶剂真