(高清版)GBT 40193-2021 长芒苋检疫鉴定方法

GB/T40193—2021DetectionandidentificationofAmaranthuspalmeriS.Watson国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T40193—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国银川海关、中华人民共和国中华人民共和国青岛海关、中华人民共和国宁波海关、中华人民共和国无锡海关、中国环境科学研究院。1GB/T40193—2021长芒苋检疫鉴定方法本文件描述了长芒苋的形态学和ITS序列检疫鉴定方法。本文件适用于长芒苋的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文本文件。GB19489—2008实验室生物安全通用要求GB/T27402—2008实验室质量控制规范植物检疫3.1.1雌雄异株dioecious注：单性花是一朵花中只有雄蕊或只有雌蕊的花，与两性花相对。3.1.23.1.3在花或花序基部的退化的叶或叶状结构。3.1.4花冠和花萼的合称。注：苋属植物的花无花冠和花萼之分。下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)ITS:核糖体DNA内转录间隔区1和内转录间隔区2,以及5.8S核糖体基因(internaltranscribedspacers1and2andtheintervening5.8Srim:中着丝粒染色体(metacentricchromosome)GB/T40193—2021PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)sm:亚中着丝粒染色体(submetacentricchromosome)st:近端着丝粒染色体(subtelocentricchromosome)TAE:Tris-乙酸电泳缓冲液(Trisacetate-EDTAbuffer)t:端着丝粒染色体(telocentricchromosome)4长芒苋分类信息分类地位：植物界(Plantae),被子植物门(Angiospermae),双子叶植物纲(Magnoliopsida),石竹目(Caryophyllales),苋科(AmaranthaceaeJussieu),苋属(AmaranthusL.),异株苋亚属[Amaranthussubgen.Acnida(L.)AellenexK.R.Robertson]。其他基本信息见附录A。4.2.1整体形状：——斜升(inclined):茎或其分枝等以平缓的角度上升。——匍匐(creeping):茎及其分枝延地表或紧靠地面生长。长宽比在3:1到10:1之间的卵形叶。——倒披针形(oblanceolate):长宽比在3:1到10:1之间的倒卵形叶。——线形(linear):长宽比大于或等于10:1。4.2.2边缘形状：——外卷的(revolute):先端向外反折或外翘。4.2.3顶端形状：——急尖(acute):整个叶、苞片、花被片等靠近顶点的——圆形(rounded):顶端边缘呈圆弧状。中脉从先端伸出成芒刺状的结构。3GB/T40193—2021——钻状(subulate):锥形或锥钻状结构。4.2.5表面特征：——皱纹(rugose):皱缩的。——洼点(punctate):种子表面的小洼点。——革质(coriaceous):具有皮革般的质地。4.2.7花序形状：5方法原理辅助手段。6器具和试剂分子量标准物质等。4GB/T40193—20217现场和实验室检疫在检疫现场采集植株鉴定用样品，要求植株完整，形态学特征完好。花部鉴定用样品，要求处于果将现场检疫抽取的送检样品充分混匀，制成平均样品。采用四分法，视样品多少取平均样品的二分之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品，称取其质量并记录，每份试验样品不少于1kg,剩余的平均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足1kg的全部检测。7.2实验室根据样品个体的直径确定套筛的规格，从大到小依次套上不同孔径的规格筛并加上底筛，将适量样品倒入规格筛的上层内，盖上筛盖，用回旋法过筛(或用电动筛振荡),使样品充分分离，把过筛的筛上物和筛下物分别倒入白瓷盘内，用镊子挑取杂草籽实，放于培养皿内。混杂于植物原粮和种子中的苋属胞果或种子，一般在孔径为5mm筛下物中获得。当样品量少时，也可将全部样品放入白瓷盘中进行人工挑检。在解剖镜或放大镜下镜检。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时，辅以解剖刀、解剖针等8鉴定方法8.1形态学鉴定状花序、聚伞圆锥花序或球状花序，顶生花序通常具退化的叶，每个二歧聚伞花序单元具苞片。花单性，雌雄同株或异株，腋生或顶生，聚生成单一或圆锥状穗状花序；每花有1苞片及2小苞片，干膜质；花被片0～5,大小相等或不等，绿色或着色，薄膜质，直立或向外反折，在果期直立，间或在花期后变硬或基部加厚；雄蕊5,少数1～4,花丝钻状或丝状，基部离生，花药2室；无退化雄蕊；子房具1直生胚珠，花柱有时具不明显点状或网状。胚环形。x=16,17。GB/T40193—2021附录B。序较短，短圆柱状或球状。雌株花序在花果期增厚，苞片及最外侧花被片向外舒展先端变硬直。见附录C。雄花苞片长4mm,等长或长于外侧花被片，先端具长渐尖。头2(-3)。见附录C。被片长3.5mm～4mm,具突出外延成硬尖的中脉，先端长渐尖或小短尖；雄蕊5,短于内侧花被片。种子近圆形至阔卵形、阔椭圆形，长0.90mm～1.12mm,深红褐色至褐色，有光泽。常见苋属种子形态特征见附录C、附录D和附录E。56GB/T40193—20212n=34,2n=4m+2sm+5st+6t。见附录C。8.2.1DNA提取及浓度测定使用常见商品化试剂盒提取植物基因组DNA。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品化试剂盒使用说明。用紫外分光光度计或核酸浓度测定仪检测所提取核酸浓度，浓度以达到8.2.2步骤中使用的商品化PCR试剂盒中要求的DNA模板用量为准。ITS序列扩增及测序的信息见附录F。9结果判定参照8.1及附录B、附录C、附录D和附录E所述种子或叶片等部分组织形态特征，并与附录G所列ITS参考序列一致性在99.70%以上时，可判定为长芒苋。标本的保存方法应符合GB/T27402—2008中4.5标本的要求。无害化处理应符合GB19489—2008中7.19废物处置。7GB/T40193—2021(资料性)长芒苋其他基本信息A.1地理分布苋属在全世界约74种，根据花部形态及雌雄异株等特性分为苋亚属(Amaranthussubgen.Ama-ranthus),约13种，白苋亚属[Amaranthussubgen.Albersia(Kunth)Gren.&.Godr.],约52种，和异株苋亚属[Amaranthussubgen.Acnida(L.)AellenexK.R.Robertson],约9种。我国有20余种。长芒苋原产北美洲墨西哥西北部、美国加利福尼亚州南部至新墨西哥州和得克萨斯州。西印度群岛(古巴、A.2经济危害几乎可以为害热带、亚热带地区种植的所有重要作物。与作物争夺生长空间和资源，导致作物严重的经济损失难以评估。A.3生物学特性条件有较好的抗逆生长。一年四季均可开花，主要花期在夏季。雌株每株生产种子20万至60万粒，在土壤中可存活数年。种子在5℃~35℃时均能发芽，在全光照时，生长速率可达每天5cm,有效地与作A.4传播途径种子易混杂在植物及植物产品中，如大豆、玉米等，远距离传播。还可通过农业灌溉体系和其他水流，或借助鸟类、牲畜、农机具等自然传播。此外，长芒苋还是风媒传粉植物，其花粉最远可传播至46km以外地区，可授粉远处雌株。8GB/T40193—2021(资料性) 绿纹苋Amaranthusacanthochiton 22.花被片缺失或不规则宿存或败育(短于1mm且不具明显中脉) 32.花被片宿存且发育完好(至少1mm长且具明显中脉) 53.种子长2mm～3mm;胞果长2.5mm～4mm;叶片狭披针形至线形 大麻苋A.cannabinus3.种子长约1mm;胞果不长于2mm;叶片阔披针形 4 南方苋A.australis4.胞果光滑或具不规则瘤突；苞片短于1.5mm,具纤细且伸出的中脉 5.花被片1或2,披针形至线形 65.花被片5,至少内花被片匙形 7 佛罗里达苋A.floridanus 7.胞果周裂，约1.5mm长；叶片薄膜质 8 葛氏苋A.greggii8.最长(最外侧)花被片急尖或渐尖具伸出成硬尖的中脉；苞片和最外侧花被片明显长于内侧花被片 长芒苋A.palmeri 9 瓦氏苋A.watsoni9.苞片具十分深重的中脉，中脉不伸出；花柱分支3 B.2雄株检索表 2 52.苞片短于1mm,中脉几乎不伸出 大麻苋A.cannabinus2.苞片长于1mm,或如果短于1mm时中脉明显伸出 3 43.叶片常线形，宽少于1cm;叶片上面的花序不分支 佛罗里达苋A.floridanus 南方苋A.australis4.苞片具纤细中脉；外侧花被片中脉不伸出 6 76.苞片约2mm长，长于外侧花被片 6.苞片约4mm长，等长于外侧花被片 长芒苋A.palmeri7.苞片等长于花被片，被明显柔毛 瓦氏苋A.watsoni 898.叶片边缘光滑 98.叶片边缘具圆齿 绿纹苋A.acanthochiton9.叶片薄膜质 葛氏苋A.greggiiGB/T40193—2021(资料性)长芒苋形态特征C.1长芒苋植株长芒苋植株形态特征见图C.1。图C.1长芒苋植株C.2长芒苋花序长芒苋花序形态见图C.2。C.3长芒苋花长芒苋花部形态特征见图C.3。图C.3长芒苋花部形态特征长芒苋种子形态特征见图C.4和图C.5。GB/T40193—2021宽顶端环状边种脐基端图C.4种子形态示意图(正面观和侧面观)图C.5长芒苋种子C.5长芒苋染色体及核型长芒苋染色体形态见图C.6,核型分析见图C.7。图C.6长芒苋染色体形态(2n=34)(图中标尺为2μm)GB/T40193—2021图C.7长芒苋染色体核型分析(2n=4m+2sm+5st+6t)GB/T40193—2021(资料性)口岸常见苋属种子形态特征比对口岸常见苋属种子形态特征比对见表D.1。表D.1口岸常见苋属种子形态特征比对表中文名形状颜色长/mm宽/mm环状边长芒苋阔卵形红褐色、褐色、深褐色明显糙果苋阔卵形、近圆形红褐色、褐色不明显白苋近圆形褐色、深褐色明显凹头苋近圆形红褐色、褐色、深褐色、黑色明显或不明显，种脐基部下凹布氏苋阔卵形褐色、深褐色明显绿穗苋阔卵形、近圆形褐色、深褐色、黑色明显刺苋阔卵形、近圆形红褐色、褐色、深褐色明显假刺苋阔卵形、近圆形红褐色、褐色明显反枝苋阔卵形褐色、深褐色、黑色明显苋阔卵形、近圆形褐色、深褐色、黑色明显合被苋阔卵形褐色明显，种脐基部下凹菱叶苋阔卵形褐色、深褐色明显，种脐基部下凹皱果苋近圆形黑色明显或不明显地中海苋近圆形黑色、深褐色明显，种脐基部下凹南非苋近圆形黑色明显北美苋近圆形黑色明显GB/T40193—2021(资料性)常见苋属种子特征图c)白苋A.albusL.d)凹头苋A.blitumL.图E.1常见苋属种子GB/T40193—2021g)刺苋A.spinosusL.j)苋A.tricolorL.图E.1常见苋属种子(续)GB/T40193—2021p)北美苋A.blitoidesS.Watson图E.1常见苋属种子(续)GB/T40193—2021(资料性)ITS序列扩增及测序信息ITS4:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'ITS5:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3F.2扩增体系及程序模板DNA含量约20ng或以所采用的商品化PCR试剂盒说明书为准。扩增程序中，ITS序列退火温度推荐为52℃~55℃。其余参数参照所采用商品化PCR试剂盒说ITS序列测序引物为ITS4及ITS5。GB/T40193