生物一轮复习 11 生物技术实践 第31讲 微生物的利用教学案 新人教版

第31讲微生物的利用

知识内容考试要求知识内容考试要求

1.大肠杆菌的培养和实验与探究能力2.分离以尿素为氮源实验与探究能力

分离的微生物

考点1细菌的培养与分离

目明自主航理.研教材，克基固本•

1.微生物：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物,如酵

母、细菌、蓝细菌和病毒等。绝大多数微生物与传染病无关，90%以上的微生物对人类有利。

2.培养基

含义微生物生存的环境和营养物质

①水、无机盐、碳源和氮源,还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及

成分氧气的要求

②LB培养基：蛋白豚、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂（固体培养基）

LB①蛋白陈、酵母提取物：为细菌生长提供碳源和氮源；

培养②氯化钠：维持一定的渗透压;

基的③琼脂：凝固剂，不易分解，一般不作为营养物质。其在96℃时融化成液体，

作用冷却到45℃以下即重新凝固

①按物理状态分，包括固体培养基、半固体培养基、液体培养基;

②按特殊用途分，包括基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基;

种类

③按培养不同微生物分，包括细菌培养基（pH呈中性偏碱，添加有机物如蛋白陈、

酵母提取物）、霉菌培养基（pH呈中性偏酸，添加无机物或者添加蔗糖的豆芽汁）

3.细菌的培养和分离

细菌分离

细菌培养

划线分离法涂布分离法

用接种环在

先将培养的菌液稀释,通常稀

细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。在固体培养基

释〜10,倍。取0.1mL稀

培养细菌时，一般用接种环将已有细菌的培表面连续划

释度不同的菌液,加在培养皿

养物转移到新的培养基中。在液体培养基中，线的操作。由

的固体培养基上，用玻璃刮刀

培养8h,每毫升培养基中有几亿个细菌。接于划线过程

涂布在培养基平面上，然后进

种于固体培养基10〜20h后，一个细菌细胞中，接种环上

行培养，得到相互分开的菌

会繁殖成许多个细菌细胞，聚集在一起，形的菌液逐渐

落。通常以每个培养皿有20

成菌落减少，因此划

个以内的单菌落最为合适

线最后部分

的细菌间距

离加大。培养

一段时间后，

每一个细菌

细胞产生一

个菌落。再将

每个菌落分

别接种到这

管斜面上,从

而除去杂菌

单菌落更易分开，但操作复杂

方法简单

些

单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，

也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之

4.灭菌操作

项目灼烧灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌

适用

接种环、接种针或其培养基、培养皿、试尿素等加热会分解的

材料

他金属用具管等玻璃器具等物质

或用具

续表

项目灼烧灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌

LB培养基：121℃（1

kg/cm，压力）、15min

含葡萄糖的培养基：

灭菌在酒精灯火焰上充分观℃以上

G6玻璃砂漏斗

条件灼烧，直至烧红，冷（500g/cm?压力）、

过滤

及时间却后备用30min

玻璃器皿：高压蒸汽

灭菌后放入60~

80℃的烘箱中烘干

5.超净工作台

提前50min左右开启超净工作台，先打开紫外灯灭菌30min,然后关闭紫外灯开启过

滤风,运行20min,之后超净台可以开始使用。

［基础诊断］

(D培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(J)

(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(X)

(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(J)

(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(X)

回冒精讲练透

1.选择培养基的制作方法

(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗

性，在培养基中加入该物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，如

培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而

可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到

酵母菌和霉菌。

(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离

自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异

养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的C0,制造有机物生存。

(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能

利用石油的微生物生长，使能够利用石油的微生物生长，从而分离出能消除石油污染的微生

物。

(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高

时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中

因酶失活而无法生存。

2.消毒与灭菌的辨析

项目条件结果常用方法应用范围

煮沸消毒

日常用品

法

巴氏消毒不耐高温的液

较为温和的物理或仅杀死物体表面或内部的部

消毒法体

化学方法分对人体有害的微生物

用酒精擦拭双

化学药剂

手，用氯气消毒

消毒法

水源

杀死物体内外所有的微生物，灼烧灭菌

灭菌强烈的理化因素接种工具

包括芽抱和抱子法

干热灭菌玻璃器皿、金属

法工具

高压蒸汽

培养基及容器

灭菌法

3.细菌的两种分离方法的比较

项目划线分离法涂布分离法

工具接种环玻璃刮刀

将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将

通过接种环在琼脂固体培养基表面连

不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固

续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释

体培养基的表面，进行培养。在稀释度

原理分散到培养基表面。在数次划线后培

足够高的菌液里，聚集在一起的微生物

养,可以分离到由一个细菌细胞繁殖而

将被分散成单个细菌细胞,从而能在培

来的肉眼可见的细胞群体，即菌落

养基表面形成单个的菌落

特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂

目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体一一菌落

［题组冲关］

1.做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()

A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中的菌落时，应标记在皿底上

解析：选D„高压灭菌结束后应自然冷却，等灭菌锅压力与大气压相同时打开锅盖，A

项错误；倒平板时，不能将皿盖放在一边，B项错误；接种环经火焰灭菌应冷却后挑取菌落,

C项错误；标记培养皿中的菌落时，记号笔应标记在皿底上，D项正确。

2.(2020•宁波模拟)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的

细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1)该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后

的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是。

(2)该小组采用划线分离法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过灭菌，在

第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是

(3)示意图A和B中，表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。

AR

(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分

进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：

振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高

____________的利用率。

解析：(1)在涂布接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，目的是

检测培养基平板灭菌是否合格，不能留有杂菌。(2)用划线分离法分离水样中的细菌，操作

时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后的划线时，从上一次划线末端开始划线，目的是

将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)涂布分离法接种培养后得到的结果应为图B。

(4)振荡可以使细菌分散，更有利于细菌利用培养液中的营养物质，并且可以使培养液中的

溶解氧增多。

答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格

(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

(3)B(4)溶解氧营养物质

考点2大肠杆菌的培养和分离

基础自主觥理研教材，克基固本•

1.大肠杆菌

(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌,在肠道中一般对

人无害，但若进入人的泌尿系统,就会对人体产生危害。

(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。

2.大肠杆菌的培养和分离实验

(1)实验内容:将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,

培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离,随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。

(2)实验步骤

培养基灭菌50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌

将培养基分别倒至4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面

倒平板在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌,培养12h

3用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上

接种连续划线,盖好培养皿

3培养皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培养箱中培养12〜24h后，可看到

划线分离划线的末端出现不连续的单个菌落

3

培养观察

(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高

表达量菌株的最简便方法之一。

［基础诊断］

(1)大肠杆菌是革兰氏阳性菌，既能进行需氧呼吸又能进行厌氧呼吸(X)

(2)利用LB液体培养基和LB固体培养基分别进行分离培养和扩大培养微生物(X)

(3)单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是筛选高表达菌株的简便方法(J)

(4)常用的微生物分离方法有划线分离法和涂布分离法(V)

(5)划线分离法的原理是利用接种环挑去一个菌种，接种到固体培养基上，经培养后得

到单菌落(X)

(6)划线分离操作简便，但涂布分离更容易得到单菌落(J)

(7)高压蒸汽灭菌法是进行各种无菌操作都需要进行的灭菌方法(X)

(8)划线分离时，接种环只蘸取一次菌液，每次划线前均需灼烧接种环(J)

(9)进行菌种扩大培养和分离培养需要将培养基倒置放在恒温培养箱中(X)

周昌精讲练透

1.菌液划线分离的方法

2.划线分离操作中的相关问题

在划线操作的第一步以及之后每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束后，还需

要灼烧接种环。

之后每次划

项目第一次灼烧划线结束后灼烧

线前灼烧

杀死接种环上残留的菌

避免接种环上可能存在杀死上次划线结束后残

目的种，避免其污染环境或

的微生物污染培养物留在接种环上的菌种

感染操作者

①在灼烧接种环后，要待其冷却后才能伸入菌液，以免接种环温度太高杀死

注意菌种；

事项②第二次及以后的划线要从上一次划线的末端开始；

③划线时用力大小要适当，防止用力过大划破培养基

3.进行恒温培养时，要将培养皿倒置

如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿中已

形成菌落，则菌落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离

的目的。因此恒温培养时，培养皿必须倒置。

4.保存菌种

用接种环取出单个菌落，用划线分离法接种在斜面培养基上，37℃培养24h后，置

于4℃冰箱中保存。

［题组冲关］

1.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（）

A.培养基分装到培养皿后进行灭菌

B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养

D.培养过程中每隔一周观察一次

解析：选B。培养基灭菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后

再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿需放在恒温箱中进行培养，一般每隔

12h或24h观察一次。

2.（2020•浙江温岭选考模拟）下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请

回答下列问题：

C.扩大培D.划线分离

A.配制|E.菌种|

B.灭菌养（液体和培养（固

培养基I保存|

培养基）体培养基）

（DA过程配制培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以

维持。对培养基酸碱度的调节,应该在B过程的（填“前面”或“后面”兀

（2）D过程与C过程相比，培养基中另外需添加的物质是。E过程所需的温度是

⑶与微生物培养不同，植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的

⑷植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是

A.接种环和镜子B.三角瓶和广口瓶

C.发芽培养基和生根培养基D.用于培养的幼茎和幼芽

解析：（1）氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭

菌后再调节酸碱度，会产生新的污染。（2）在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成

固体培养基。菌种应置于4℃冰箱中保存。（3）植物组织培养培养基中需加入一定比例的植

物激素。（4）高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽只

能进行消毒，不能进行灭菌操作，否则会导致细胞死亡。

答案：(1)渗透压前面

⑵琼脂4℃

⑶植物激素

(4)D

考点3分离以尿素为氮源的微生物

自主觥理

1.实验原理：利用尿素的细菌含有服酶,通过降解尿素作为其生长的氮遮。其反应式

为(NH，C=0+H20^^2NH3+C02,生成的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是

培养基中的酚红由红黄色变成红色。

2.实验步骤

培养基的配制和除菌一注意：尿素经过G6玻璃砂漏斗过滤后

|加入

倒T板，制备土壤稀释液

接■全营养LB固体培养基(对照组)】玻璃刮刀涂布

I1尿素固体培养基(实验组)----「分离

培养一倒置，37七恒温培养箱，24~48h

L对照组：菌落数量和种类多而杂

观I察T

L实验组：菌落少、单一，菌落周围出现红色区域

3.预测本实验的结果：LB全营养固体培养基上的菌落多而杂；尿素固体培养基上的菌

落少而纯；一定时间内，菌落周围出现纽鱼区域。用浓度为ICT”和IO-土壤稀释液接种，

更容易形成单菌落的是Q土壤稀释液。

［基础诊断］

(1)尿素培养基配制时各种成分均需要过滤灭菌(x)

(2)胭酶分解尿素为氨气，酚红指示剂遇氨气(碱性)变红色(V)

(3)涂布分离后不能倒置培养皿，防止涂布的菌液流出(X)

(4)分离以尿素为唯一氮源的微生物时，尿素培养基中加入琼脂作为凝固剂(X)

(5)制备土壤悬液时，在无菌条件下，将土样与无菌水混合摇匀后尽量吸取土样，以增

加微生物的数量(义)

(6)涂布分离法分离细菌，一般采用移液器吸取0.1mL样液加到含有相应培养基中(J)

(7)涂布分离法能够计数菌落数，采用该方法统计出的细菌数通常偏少(J)

(8)尿素培养基上的微生物数量比全营养培养基上微生物数量多(X)

回冒精讲练透

1.培养基中观测指标的分析

(1)培养基中的酚红指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在版酶水解尿素的作用，从

而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表版酶活性的强弱和含量的多少。

红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。

(2)与全营养培养基上的菌落数比较，尿素培养基上只有少数菌落，这一现象表明能利

用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少部分。

2.微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用

对照组作用现象结论

未接种的培养皿中无

未接种培养基有无杂菌污染的判断未被杂菌污染

菌落生长

LB全营养培养基上的

接种的LB全营养培选择培养基筛选作用选择培养基具有筛选

菌落数大于选择培养

养基的确认作用

基上的数目

3.样品稀释的原因和标准

(1)稀释原因：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数。在适当的稀释度下，培养

基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统

计菌落数的关键。

(2)稀释标准：选用一定范围的样品稀释液进行培养，为了保证结果准确，一般选择菌

落数在30〜300的平板计数。

［题组冲关］

1.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下列实

验结束后的做法错误的是()

A.对接种环进行灼烧处理

B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉

C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉

D.接种后双手必须用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭

解析：选C。金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接

种后双手用肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也

可以杀灭细菌，防止污染环境；高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只

对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，因为此菌的耐高温能力很强，会污染环境。

2.(2020•浙江台州高三模拟)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程,

请回答下列问题：

|取土样口1盔土壤悬液

TD.涂布分离H观察培养|

■配制固体培养基HB.灭菌卜崔卜

(1)该实验培养基不能含有o

A.尿素B.氯化钠

C.葡萄糖D.琼脂

(2)尿素溶液可用使之无菌。若要检查B过程灭菌是否彻底，可以采用的

方法是___________________________________________________________________________

⑶图中步骤C为。相对于划线分离法，过程D涂布分离法的优点是

(4)如果菌落周围出现___________色环带，说明该菌落能分泌胭酶。

答案：(1)D(2)G6玻璃砂漏斗过滤将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间，观

察有无菌落出现(3)倒平板单菌落更易分开(4)红

J■■■随堂达标反馈■■■口

1.下列关于微生物的培养和分离的叙述，错误的是()

A.通过消毒不能杀死物体内所有的微生物

B.利用划线分离法可以统计样品中活菌的数目

C.划线分离法和涂布分离法常用于微生物的接种

D.微生物所用的培养基成分和植物组织培养用的培养基成分不同

解析：选B。消毒是指杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽抱的方法。统计样品中

活菌的数目要用涂布分离法，划线分离法办不到。微生物接种最常见的方法是划线分离法和

涂布分离法。不同的培养对象，所需的营养成分不同，培养基中加入的物质也就不同。

2.下图是利用牛肉膏蛋白陈培养基培养和纯化X细菌的部分操作步骤。有关叙述正确

的是()

①②③④

A.步骤①中，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上污染培养物

B.步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液

C.步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数

D.步骤④是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落

答案：B

3.(2016•浙江10月选考)请回答从土壤中分离产版酶细菌和版酶固定化实验的有关问

题：

(1)LB固体培养基：取适量的蛋白腺、酵母提取物、Nad,加入一定量的蒸储水溶解，

再加,灭菌备用。

(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用灭菌过的G6玻璃砂漏斗过

滤，因为G6玻璃砂漏斗，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加

入已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。

(3)取适量含产胭酶细菌的10一两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基

和尿素固体培养基上，培养48h,推测固体培养基上生长的菌落数最少的是(A.10-

稀释液+尿素固体培养基B.IO』稀释液+LB固体培养基C.10-4稀释液+尿素固体培

养基

D.ICT"稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产版酶细菌菌落周围出现

，其原因是细菌产生的服酶催化尿素分解产生________所致。

(4)制备固定化麻酶时，用石英砂吸附麻酶、装柱。再用蒸储水洗涤固定化酶柱，其作

用是O

答案：(1)琼脂糖

(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过

(3)A红色环氨(或NHs)

(4)除去游离的厥酶

4.请结合图示，回答下列有关大肠杆菌分离与纯化的问题:

培养接斜面

划线或涂布

大肠杆菌分离操作流程图

(1)稀释

用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入盛有9mL的大试管中，充

分混匀，稀释倍；按照同样的方法依次进行稀释制成ICT；io-、10.3、io-、J。

t、IO-'系列稀释度的大肠杆菌稀释液。

(2)划线或涂布

①划线分离法

a.操作：在________旁，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上

划线。

b.划线方法:划线和划线。

C.平行划线时，第一次划线及每次划线之间都要灼烧接种环，划线结束后也要灼烧接

种环，目的分别是什么？

②涂布分离法

a.操作：取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布

在培养基平面上，然后进行培养。

(3)培养：将接种的平板于培养箱或温室中37℃培养12〜24ho

答案：(1)无菌水10

(2)a.酒精灯火焰b.平行连续

C.

第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束时灼烧

杀死上次划线后接种环上

残留的菌种，使下次划线杀死接种环上残存的菌

杀死接种环上原有的微生

目的的菌种直接来源于上次划种，避免细菌污染环境和

物

线的末端，使每次划线后感染操作者

菌种数目减少

(3)倒置

■■■预测高效提升■■■

1.(2020•杭州模拟)如表为某微生物培养基的配方，请回答下列问题:

成分含量成分含量

NaN033gFeSOd0.01g

K2HPO41gC6H12。630g

琼脂15gH201000mL

MgS04•7H2O0.5g青霉素0.1万单位

(1)依物理性质，该培养基属于培养基。依用途划分，则属于培

养基。

(2)根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是。

(3)该培养基中的碳源是。不论何种培养基，在各成分都融化后分装前，要

进行的是O

（4）若用该培养基培养纤维素分解菌，应除去的物质是,应加入的物

质是。

（5）细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是o（填编号）

A.环境条件B.基因重组

C.基因突变D.染色体畸变

解析：（1）该培养基中含有凝固剂琼脂，属于固体培养基。该培养基含有抗生素（青霉素），

属于选择培养基。（2）该培养基含有有机碳源一一C6HM6,可见所培养的微生物是异养型生物。

（3）不论何种培养基，在各成分都融化后分装前，要先进行pH调整。（4）若用该培养基培养

纤维素分解菌，应除去青霉素和C6Hl加入纤维素粉。（5）细菌是原核生物，没有染色体,

不会发生染色体畸变；细菌不能进行有性生殖，不会发生基因重组，所以细菌可遗传的变异

只有基因突变。

答案：（1）固体选择（2）异养型（3）C6H1206

调整pH（4）青霉素和C6HlB纤维素粉（5）C

2.请回答下列有关微生物培养基的问题：

（1）微生物的培养都需要培养基，一般培养基都含有的成分有；

配制固体培养基还需要加入凝固剂=

（2）制备牛肉膏蛋白膝固体培养基的一般流程包括：

计算f称量—融化-A—B

上述流程中A代表,实验室中这个步骤常用的方法有；

流程中B代表,该步骤进行的适宜温度是°C左右。

（3）鉴定分解尿素的细菌的方法是向以为唯一氮源的培养基中加入

—指示剂，培养某种细菌，如果pH升高，指示剂将变红，说明该种细菌能分解尿

素。

（4）与全营养培养基中的菌落相比，选择培养基中菌落数（）

A.多B.少

C.相等D.几乎为零

解析：（1）一般培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源四种成分。（2）制备牛肉膏蛋

白陈固体培养基的流程包括：计算一称量一融化一灭菌一倒平板；灼烧灭菌、干热灭菌和高

压蒸汽灭菌是实验室中常用的灭菌方法。（4）选择培养基上只能生长特定的微生物，因此该

培养基上长出的菌落数目比全营养培养基上长出的菌落数少。

答案：（1）水、碳源、氮源和无机盐琼脂

（2）灭菌灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌倒平板60（3）尿素酚红（4）B

3.（2020•浙江五校高三联考）某村庄有一条小溪，近几年由于上游几家乳胶厂不断向

其中排放废水，小溪变得不再清澈。某同学想测定该溪水中的细菌含量情况。回答下列问题:

(D先根据所学知识制备LB培养基。制备该培养基的步骤是：计算一称量一融化一灭菌

一倒平板。下列关于制备LB培养基的叙述，错误的是。

A.培养基应先调pH再进行灭菌

B.培养基应先灭菌再分装到培养皿中

C.融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦

D.灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121℃,500g/cm2压力下灭菌15分钟

(2)该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌数量，他所选择的分离方法应是

;该同学在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样

做的目的是O接种在超净工作台上进行，实验前一段时间需

打开工作台上的紫外灯和过滤风，实验中需关闭的是(A.酒精灯B.照明灯

C.紫外灯D.过滤风)。

(3)值得注意的是，他所选择的这种方法统计的结果往往比实际细菌的数目要低，这是

因为①;②___________________________________________

(不考虑实验操作原因引起的细菌数目的变化)

(4)该同学欲将所分离出的某种细菌临时保藏,应接种到试管的培养基上,

等菌落长成后，放入冰箱低温保藏。

解析：培养基应先调pH再进行灭菌，A正确；培养基应先灭菌再分装到培养皿中，B

正确；融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦，C正确；灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在

121℃,1000g/cm?压力下灭菌15分钟，D错误。

答案：(1)D(2)(稀释)涂布分离法检查平板灭菌是否彻底C

(3)①该方法只能统计样品中活菌的数目，死菌无法统计②当两个或多个细菌连在

一起时，平板上观察到的只是一个菌落(4)斜面

4.(2020•杭州模拟)从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示，请回答

下列问题：

±w]一।土壤浸出液]一gg-[gg一।培养、观察一

(1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用进行一系列的梯度稀释，

同一浓度的土壤稀释液至少涂布个平板。

(2)在培养基中加入尿素(唯一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培

养基在功能上属于。

A.选择培养基B.固体培养基

C.液体培养基D.半固体培养基

(3)接种后的培养皿放于37℃的恒温箱中培养。在能利用尿素的细菌菌落周

围，有红色环带出现的原因是________________________________________________________

(4)为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。水培某

植物时，为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用技术。

解析：(1)稀释时，为减少杂菌干扰，需要用无菌水稀释。为排除偶然因素，每个稀释

度需要涂布3个平板。(2)以尿素为唯一氮源的培养基在功能上属于选择培养基。(3)培养时，

为防止培养皿盖上的冷凝水滴落冲散细菌，需要将培养皿倒置。能利用尿素的细菌可分泌胭

酶，胭酶能将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂酚红呈红色。(4)固定化酶技术使酶

可以回收，从而提高了酶的利用率。

答案：(1)无菌水3(2)A(3)倒置能利用尿素的细菌可分泌)R酶，胭酶能将培养

基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色(4)固定化酶

5.已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三

种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。

I号培养基：在牛肉膏蛋白陈培养基中加入X(5g/L)o

II号培养基:氯化钠(5g/L),硝酸镀(3g/L),其他无机盐(适量)，X(15g/L)o

III号培养基:氯化钠(5g/L),硝酸镂(3g/L),其他无机盐(适量),X(45g/L)o

回答下列问题：

(1)在I号培养基中，为微生物提供氮源的是。II、III号培养基中为微生物提

供碳源的有机物是O

(2)若将土壤悬浮液接种在H号培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会

,其原因是________________________________________________________

___________________________________________________________________________O

(3)II号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对

菌落进行计数，接种时，应采用的方法是o

(4)假设从III号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则

在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供和=

解析：(1)牛肉膏蛋白腺培养基中，牛肉膏、蛋白陈为微生物提供了氮源，而II号、m

号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因为

II号培养基中碳源只有X,相当于选择培养基，只有能降解X的细菌才能增殖，而不能降解

X的细菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要对菌落进行计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。

(4)在有氧条件下，丙酮酸参与细菌的需氧呼吸，可以为该菌的生长提供能量和合成其他物

质的原料。

答案：(1)牛肉膏、蛋白陈X

(2)下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖

（3）稀释涂布平板法

⑷能量合成其他物质的原料

6.（2020•宁波一模）某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。

研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化

合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题:

电杰普2振荡培养若干天后，测定接种

污用样品各瓶中化合物的含量产•

A固体

初选=户榕种培养基

接种弋......八避