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第第页酸性土壤速效磷试剂盒说明书酸性土壤速效磷试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义：速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一、测定原理：用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，用钼锑抗比色法测定。自备实验用品及仪器：天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体6mL×1支，4℃保存。试剂二：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水溶解。用不完的试剂4℃保存。试剂三：粉剂×3支，4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解。现配现用。样本处理：新鲜土样风干，过3050目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g土样，加入1mL提取液），振荡提取30min，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。测定步骤：1、取试剂三一支，加入1mL蒸馏水充分溶解待用。2、显色液的配制（可测50个样）：取EP管一支，加入660μL试剂一，再加入100μL试剂二，充分混匀后，再加入240μL试剂三，充分混匀待用；配好的显色液应为黄色，若变蓝则为磷污染；显色液必须现配现用；若一次性测不了50个样，可按比例缩小各试剂体积。3、操作表空白管测定管样本（μL）40提取液（μL）40显色液（μL）2020H2O（μL）140140充分混匀，25℃静置30min于微量石英比色皿/96孔板中，蒸馏水调零，测定660nm处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管A空白管。空白管只要做一管。计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.1252x0.0041，R2=0.9957，x为标准品浓度（mg/L），y为吸光值。速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷0.1252×V样÷（W×V样÷V样总）=7.987×（△A+0.0041）÷WV样：样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，约0.1gb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0626x0.0041，R2=0.9957，x为标准品浓度（mg/L），y为吸光值。速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷0.0626×V样÷（W×V样÷V样总）=15.97×（△A+0.0041）÷WV样：样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，约0.1g注意事项：1.配好的显色液

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