动物血液基因组DNA的提取专家讲座

动物基因组DNA提取

常祖明动物血液基因组DNA的提取第1页背景知识动物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？与植物细胞差异？动物血液基因组DNA的提取第2页背景知识DNA存在形式动物血液基因组DNA的提取第3页背景知识DNA存在形式动物血液基因组DNA的提取第4页背景知识DNA存在形式动物血液基因组DNA的提取第5页背景知识DNA存在形式核苷酸双螺旋结构一级结构-核小体二级机构-螺线管三级结构-超螺旋管四级机构-染色体+组蛋白动物血液基因组DNA的提取第6页DNA为白色类似石棉样纤维状物，大都呈酸味。DNA是极性化合物，普通都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。DNA理化性质动物血液基因组DNA的提取第7页试验目标掌握CTAB法提取植物DNA原理掌握CTAB法提取植物DNA试验方法注意：此方法会把少许RNA提取出来，故后面通称核酸提取。动物血液基因组DNA的提取第8页试验原理

哺乳动物成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类血细胞则能够。禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整细胞核、大量染色体。且材料易得、经济。用鸡血细胞做试验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作试验材料经常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。动物血液基因组DNA的提取第9页试验原理固定血样采集抗凝血裂解细胞蛋白质降解蛋白质变性沉淀DNA洗涤去杂质动物血液基因组DNA的提取第10页普通家鸡无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)、1MTris-HCl(PH8.0)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)

、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿(三氯甲烷)、异戊醇 试验材料实验仪器取血针及管离心机：3台/12管离心管：水浴锅：65℃移液枪（包含枪头）动物血液基因组DNA的提取第11页试验试剂1.75%乙醇2.ACD抗凝剂100ml（共需48ml，每管0.8ml）3.禽血裂解液100ml（共需51ml，每管1.7ml）4.氯仿-异戊醇（24:1）共需54ml，每管1.8ml5.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）共需60ml，每管2ml6.TE缓冲液PH8.050ml动物血液基因组DNA的提取第12页试验步骤75%乙醇20ml翅下取血5ml5ml离心管800ulACD抗凝剂800ulACD抗凝剂8000转离心1分钟弃上清液8000转离心1分钟弃上清液取680ul8000转离心1分钟55℃水浴过夜1700ul裂解液10ul蛋白酶K动物血液基因组DNA的提取第13页试验步骤2ml饱和酚摇匀至无块状1转离心10分钟DNA酚蛋白层5ml离心管取上层透明DNA溶液2ml酚-氯仿-异戊醇1转离心10分钟5ml离心管取上层DNA液1.8ml氯仿-异戊醇1转离心10分钟5ml离心管取上层DNA液无水乙醇75%无水乙醇1000ulTE缓冲液晾干-20℃保留动物血液基因组DNA的提取第14页在整个试验过程中应严格执行无菌操作；部分药品有毒，操作中应注意安全防护；刚投入水浴时能够稍快速晃动，之后晃动一定要轻柔！

再每一次加入药剂后，都要轻轻晃动离心管，使之混匀。

注意事项动物血液基因组DNA的提取第15页思索题本试验中用到各种试剂作用是什么？本试验中进行了几次离心操作，每次目标？动物血液基因组DNA的提取第16页试验安排按照学号分组进行试验，每6人一组，一组做3管，用一个研钵。每3组共用1台离心机同时进行离心操作。6人一组动物血液基因组DNA的提取第17页级生物技术专业分子生物学试验汇报姓名：学