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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法实时荧光PCR法第7部分：荔枝和龙眼I 第6部分：龙眼：本部分为SN/T4848的第7部分。1实时荧光PCR法GB14963—2011食品安全国家标准蜂蜜2引物/探针序列(5′→32长度靶基因内参照F:GCTGAAGCAGCTACTTTCGAR:AGGAGCCGTGTGAGATGAP:FAM-TGGAGTGGGAGAGTCAGAGTCGAAAAGAP:FAM-TTACACAAAGATTCTATCAACTTTCTGGG36.4体积分数为70%的乙醇。8.1.1.5转移上层清液至2mL离心管中；加入0.7倍体积的三氯甲烷，剧烈震荡混匀，室温下48.1.2蜂蜜上清DNA提取将上清分装到2个50mL离心管中，每管20mL,参照附录B步骤进行核酸DNA提取，DNA存放使用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计分别检测260nm和280nm处的吸光值Az6o和A280。c=A×N×50/1000……A——260nm处的吸光值；N——核酸稀释倍数。8.3实时荧光PCR扩增8.3.1实时荧光PCR反应体系实时荧光PCR反应体系的反应条件见表2。积内参照荔枝和龙眼实时荧光PCR反应混合液DNA模板(10ng/pL～200ng/μL)无菌ddH₂O8.3.2实时荧光PCR反应程序5c)35<Ct值<40,则重复实验一次。再次扩增后Ct值<40,则判定为阳性；Ct值≥40,则判定为检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403-2008中附录D的规定执行。6TCATGTGTGGTCTCAACCCGGAAGGGTTCATATAAACCACTTACACTTTCTGGGCTATCTTTCCAGTCTCATGTGTGGTCTCAACCCGGAAGGGTTCATATAAACCACTTAAACTTTCTGGGTTATCTTTCCAGTC沉淀溶液/recipitationSolu注：以Prom

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