SNT 4419.17-2016 出口食品常见过敏原LAMP系统检测方法 第17部分：荞麦

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第17部分：荞麦I1出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第17部分：荞麦1范围SN/T4419的本部分规定了出口食品中过敏原荞麦成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原养麦成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限(LOD)为0.5%(质量分数)。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1961.18—2013出口食品过敏原成分检测第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原和苦荞(F.tataricum)是两种主要的栽培种。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)LAMP:环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification)TritonX-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403—2008中附录D的规定。26.2.2水浴锅或加热模板：65℃±1℃和80℃±1℃。6.3.2CTAB提取缓冲液(20g/LCTAB,1.4mol/LNaCl,0.1mol/LTris-HCl,0.02mol/L6.3.5蛋白酶K(20mg/mL)。3表1。名称编号序列LAMP引物序列外侧上游引物(F3)外侧下游引物(B3)5'-AGTCCTTCTCTTCCTGCCT-3’内侧上游引物(FIP)5'-CTCCGACAACCTGGACTCTTCCAACTTGA内侧下游引物(BIP)5'-AGTGTGTTCGACGACAACGTGCTCAACACCACTGCGAATCC-3’6.4DNA提取4表2过敏原荞麦成分LAMP反应体系外侧上游引物(F3)外侧下游引物(B3)内侧上游引物(FIP)内侧下游引物(BIP)4(包括缓冲液中所含硫酸镁)2水6.5.3LAMP反应参数65℃恒温扩增60min,80℃5min使酶灭活，反应结束6.5.4显色反应反应结束后，将显色液与反应液上下颠倒轻轻混匀，在黑色背景下立即进行颜色观察。6.6质量控制基本原则：实验室中设置的各种对照IAMP检测结果应符合以下情况。否则，任一种对照如果出——阴性对照：反应管中液体呈橙色；——阳性对照：反应管中液体呈绿色。7结果判断和确证7.1待检样品2个平行样反应管中液体均呈橙色，同时各种实验对照结果正常，可判断该样品检测结7.2待检样品2个平行样反应管中液体至少1管呈绿色，同时各种实验对照结果正常，可判断该样品过敏原荞麦成分初筛阳性，还应通过下列方法之一进行确证：—按照SN/T1961.18—2013实时荧光PCR检测；——可对PCR扩增产物进行序列测定，参照附录A中序列比对；——其他验证方法。56ATCCTCGGACCGAGATGGAACTTGAACGCGCACAGCGCACTGTACGTGAAAGGAAGAG