义翘讲堂《生物层干涉（BLI）技术在蛋白抗体研发生产及质控中的应用》

北京义翘神州科技股份有限公司生物层干涉（BLI）技术在蛋白/抗体研发、生产及质控中的应用杂交瘤上清快速筛选抗体/蛋白定量稳定株开发条件优化抗原-抗体动力学&亲和力蛋白/抗体表征、分析（生物活性&表位）QC放行：生产批次间一致性从研发到生产质控，BLI贯穿生物试剂研发的每一步义翘神州CONTENT前期粗样品亲和力筛选及浓度监控1纯化蛋白/抗体的表征分析及质量检测2检测服务案例分析3义翘神州前期粗样品亲和力筛选及浓度监控01义翘神州杂交瘤上清抗体亲和力快速筛选SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.

AMC(Anti-mIgGFcCapture)抗体上清稀释2倍后进行使用

40588-V07E35

107.8nMELISA44OCTET41162813义翘神州培养上清抗体浓度检测SampleIDBindingRateWellConc.(µg/ml)Mouse-IgG1standard0.075320.040312.80.02065.120.01092.050.00720.81920.00280.3277标准曲线细胞上清检测结果SampleIDBindingRateWellConc.DilutionFactorSampleConc.(µg/ml)ELISA定量（µg/ml）22STD2A-50-10.062825.25126.2110.722STD2A-50-20.0623.75118.4110.322STD2A-50-DMA-10.063725.75128.6112.422STD2A-50-DMA-20.066927.55137.7108.422STD2A-53-10.02546.9953553.622TA24-4-20.02567.06535.348.222TA24-4-DMA-10.02175.54527.720.822TA24-4-DMA-20.02346.23531.225.822STD2-1070.02496.7953427.522STD2A-54-10.036311.2556.278.022STD2A-54-DMA-20.038712.256178.4义翘神州SampleIDBindingRateWellConc.(µg/ml)牛IgG标准品0.00111.660.00233.330.00406.650.009013.30.021426.60.043953.2SampleIDBindingRateWellConc.(µg/ml)百分比QC-13.3µg/ml0.009812.9797.5%QC-26.6µg/ml0.021927.30102.6%SampleID牛IgG质量（g/L）稀释倍数BindingRateSampleConc.(µg/ml)A品牌血清处理前14.30310000.004114.920000.007614.41处理后--40.00340.0478B品牌血清处理前4.184000.00153.38000.00143.87处理后--40.00390.0519胎牛血清牛IgG浓度检测义翘神州纯化蛋白/抗体的表征分析及质量检测02义翘神州ACE2（mFc）&OmicronRBD(His)亲和力测定SensorTypeLoadingSampleIDSampleIDConc.(nM)ResponseKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)FullR^2proAACE2mFcOmicronRBD(His)44.80.19843.444E-094.389E+051.511E-030.995917.90.13387.160.07512.870.03271.150.0133固化同样的配体，检测同一分析物的不同浓度需要加入一个零浓度，作为referencewell扣除多浓度梯度曲线，globalfitting，得到不同的KD，Kon，Koff义翘神州注：1.需要样品量较大，因为要用到饱和浓度；2.尽量选择固化高度（饱和信号）相近的抗体比较。

MAb1MAb2MAb3MAb4MAb5MAb6MAb1-5.11%21.66%7.89%1.95%11.36%MAb29.23%-33.69%6.24%7.62%24.55%MAb343.56%33.21%-51.02%83.99%12.65%MAb43.58%5.66%89.26%-86.35%57.68%MAb551.22%40.65%95.43%8.09%-45.07%MAb632.12%2.11%5.65%7.98%73.12%-抑制率：60%-100%：完全不竞争20%-60%：部分竞争<20%：完全竞争，若有一个方向达到这个标准，则认为两个抗体有竞争

先检测1（ligand）与2和3（analyte）间单独的相互作用

2需要于1结合比较强

2样品需要饱和

比较3在有无2的情况下的信号FirstantibodySecondantibody抗体表位分析：不同SARS-CoV-2Spikeantibody与SARS-CoV-2SpikeRBD做epitopebinning优势：快速无需标记用量少可回收

可做粗样品

配套软件分析义翘神州

Anti-flagantibody批次间一致性109143-MM13Lot1109143-MM13Lot2109143-MM13Lot3109143-MM13Lot4KD=

3.59E-09KD=

3.19E-09KD=

2.97E-09KD=3.24E-09SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.Analyte

AMC(Anti-mIgGFcCapture)

MouseAbs

2µg/mL

CT026-H0323H义翘神州检测服务案例分析03义翘神州关于“北京义翘神州”服务内容检测项目周期交付内容结合、筛选、表征抗体与抗原亲和力测定1-2周项目报告抗体与FcγRs/FcRn/C1q亲和力测定原始数据蛋白与蛋白亲和力测定蛋白与小分子亲和力测定上清抗体亲和力排序graphpad作图EpitopeBinning客户需提供提供名称、浓度、分子量、种属和标签等信息（信息越详细越好比如抗体的轻重链亚型、是否容易形成聚体以及已知的结合价等）；特殊要求AR2G需要足够的游离氨基。浓度>0.2mg/mL，纯度>90%，每对样品各自用量>50ug，表位分析用量加倍。Buffer：如果需要AR2G不要含有Tris；不要含有高浓度的高聚物物质；NTA传感器的固化缓冲液中不得含有EDTA；APS传感器的固化缓冲液不得含有任何去污剂。义翘神州义翘神州抗体生物活性分析：Fc受体及C1q结合活性hIgG1VSFcRIIA(CD32a)hIgG1VSFcRIIIB(CD16b)hIgG1VSFcRI(CD64)hIgG1VSFcRnhIgG1VSC1qSensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)AR2G(AmineReactive2ndGen)hIgG15µg/mL

C1q64.9~1039nM0.1644-0.57261.17E+053.01E-032.58E-08KD=1.5E-6KD=1.58E-07KD=1.76E-09KD=1.69E-08KD=2.58E-08义翘神州膜蛋白与抗体亲和力检测SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)AHC(Anti-hIgGFcCapture)人源化抗体10µg/mL

膜蛋白125~2000nM0.0476-0.38398.32E+038.27E-049.93E-08义翘神州蛋白与外泌体亲和力测定外泌体：直径50~200nm之间，膜上带有某个白介素受体SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)HIS1K(Anti-Penta-HIS)xx白介素10µg/mL

外泌体0.0023-0.0181nM0.2328~0.51271.75E+091.03E-035.89E-13义翘神州多肽与抗体亲和力分析SensorTypeCaptureLigandCaptureLigandConc.AnalyteAnalyteConc.Responsekon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)proA兔单抗5µg/mL多肽110~886nM0.0386-0.13465.83E+045.16E-048.85E-09关于“北京义翘神州”坚持自主研发生产打造中国生命科学研究“一站式”试剂与服务支撑平台人才与设施荣誉资质设施