检疫学病理部分

植物病害检疫学（植物篇）一、名词解释1、植物检疫学：一门为保护植物的健康，阻止某些对植物有严重危害的有害生物随人为的远离传播，对有害生物进行风险分析，提出检疫决策，制定与执行检疫法律、法规的科学。研究内容：包括植物检疫法规、有害生物风险分析、植物检疫程序、检疫检验、检疫处理；危险性病、虫、杂草的分布、寄主和为害、传播途径、检验与检测方法和检疫处理方法及其防治的基本理论和技术。2、植物检疫：是通过法律、行政和技术的手段，防止危险性植物病害、害虫、杂草和其它有害生物的人为传播，保障农林业的安全，促进贸易发展的措施。3、有害生物：泛指为害或可能为害动植物及其产品的任何有生命的有机体。包括：限定的有害生物、非限定的有害生物4、非限定的有害生物：亦就是已经广泛发生或普遍分布的有害生物，它们在植物检疫中没有特殊的重要性。5、限定的有害生物:是指在一个国家或地区未发生或虽然有发生、但且正在进行官方防治的、有潜在经济重要性的有害生物，亦即由国家法律、法规规定的、须对其采取限制措施的有害生物，也有人称之谓“潜在的危险性有害生物”。包括检疫性有害生物和限定的非检疫性有害生物。①检疫性有害生物：指对某一地区具有潜在经济重要性，但在该地区尚未存在或虽存在但分布未广并正由官方控制的有害生物。②限定的非检疫性有害生物：是一种在进口国虽有广泛分布，但存在于进境的种植材料上，并将对其原有用途将造成不可接受的损害的非检疫性有害生物，因而进口方的法律、法规可规定对其采取检疫措施。6、疫区：指由官方划定的发现有检疫性有害生物存在与为害，并正由官方采取措施控制中的地区。7、非疫区：有科学证据证明未发现某种有害生物并由官方维持的地区。8、非疫产地：科学证据表明特定有害生物没有发生并且官方能适当保持此状况达到规定时间的地区。9、非疫生产点：指科学证据表明特定有害生物没有发生并且官方能保持此状况达到规定时间的产地内作为一个单独单位以非疫产地相同方式加以管理的限定部分。10、法规：法律规范，国家或权威组织制定或认可，受国家强制执行的行为规范。组成：假定、处理、制裁11、植物检疫法规：是指为了植物检疫工作的顺利进行，实现植物检疫的目的和任务，由国家、地方政府或有关的权威性国际组织等所制订、颁布的用以调整国际间或国内区域间植物检疫工作的法规规范的总称。它包括有关植物检疫的法规、条例、细则、办法和其它单项规定等。12、疫情：是指检疫性有害生物以及新传入的和国内突发性的危害性病虫杂草的发生、分布情况。13、疫情发布：全国植物检疫性有害生物、从国外新传入和国内突发性的危险性病虫杂草的疫情，由农业部发布；各省、自治区、直辖市补充的植物检疫对象的疫情，由各省级农业主管部门发布，并报农业部备案。14、调运植物检疫：是指调运规定应施检疫的植物、植物产品时，由调运单位和个人申请，由植物检疫机构实施的检疫检验、监督处理和出证的过程，是植物检疫管理十分重要的环节。15、检疫许可：又称检疫审批，指在调运、输入某些检疫物或引进禁止进境物时，输入单位须向当地植物检疫机关预先提出申请，检疫机关经过审批做出是否批准引进的法定程序。16、检疫申报：有关检疫物进出境或过境时由货主或代理人向植物检疫机关及时声明并申请检疫的法律程序。17、现场检验：检疫人员在现场环境中对应检物进行检查、抽样，初步确认是否符合相关检疫要求的法定程序。18、检疫处理：采用物理或化学的方法杀灭植物、植物产品及其他检疫物中有害生物的法定程序19、检疫出证：检疫机关根据进出境或调运的植物、植物产品及其他检疫物的检疫和除害处理结果，签发相关单证并决定是否准予调运的法定程序。20、检疫监管：是检疫机关对进出境或调运的植物、植物产品的生产、加工、存放等过程实行监督管理的检疫程序。21、产地检疫：在植物或植物产品出境或调运前，输出方的植物检疫人员在其生长期间到原产地进行检验、检测的过程。22、预检：在植物或植物产品入境前，输入方的植物检疫人员在植物生长期间或加工包装场所进行检验、检测的过程23、隔离检疫又称入境后检疫：针对风险极高的进境繁殖材料，是将拟引进的植物种子、苗木和其他繁殖材料，于植物检疫机关指定的场所内，在隔离条件下进行试种，在其生长期间进行检验和处理的检疫过程。其过程包括供试材料登记、初步检验与处理、饲养和栽培合格的材料、生长期检验与处理、出证放行等5个步骤。三个要求：①对隔离材料的要求②对隔离场所人员的要求③对隔离时间的要求二、填空：1、植物检疫的任务：外检、内检、检疫处理2、植物检疫的对象（有害生物）种类：检疫性害虫、检疫性病害、检疫性杂草、其他检疫性有害生物3、国际性法规与公约（填空）：《国际植物保护公约》(IPPC)、《实施卫生与植物卫生措施协定》(简称《SPS协定》)、4、中国的植物检疫法规：《中华人民共和国进出境动植物检疫法》、《中华人民共和国进出境动植物检疫法实施条例》5、检疫性有害生物名单管理制度：全国植物检疫性有害生物名单农业部制定公布，各省补充名单由各省级农业主管部门制定公布。6、植物检疫程序：检疫许可、检疫申报、现场检验、实验室检测、检疫处理与出证、检疫监管7、植物检疫性真菌常见检疫检验技术：直接检验、比重检验、染色检验、洗涤检验、保湿萌芽检验、分离培养检验8、植物病毒检疫检验技术：鉴别寄主谱反应检验、血清学检测技术、物理方法检测、分子生物学检验技术9、植物病原线虫检疫检验技术：直接检验、染色检验、分离检验第一章概论第一节植物检疫和植物保护的关系一、植物检疫与植物保护间有何差别？相同点：发现有害生物后采取化学的或物理的方法来处理。不同点：植物检疫植物保护针对对象带有检疫性有害生物的植物、植物产品及其应检物重要的农作物病害处理要求不带活的有害生物危害程度控制在经济阈值以下工作内容与方法重点掌握危险性有害生物的分布、发生、危害等情况，是以法律为依据，防治有害生物的传入或传出依据病害发生规律，采取综合措施，降低危害三、植物检疫性有害生物确定的依据（提问）1、危险性的病害、害虫、杂草（适应性强、危害性大、难以根治）2、局部地区发生的（疫区）3、人为传播的（随货物、运输工具、包铺材料、携带邮寄等途径传播）4、风险分析评估确认四、植物检疫的任务（提问）1、阻止危险性病、虫、杂草随植物及其产品由国外传入获传出-----------外检2.封锁国内局部地区已发生的危险性病、虫、杂草，使其不蔓延---------内检3.对已传入的危险性病虫草，采取紧急措施，就地彻底消灭-------------检疫处理五、检疫的目的和意义1、行使国家主权、防止检疫性有害生物传入或传出国境2、保护农林业生产和生态安全3、保护人民的生存环境和身体健康4、保证卫生安全、促进对外贸易发展5、创造更好的社会、生态和经济效益六、检疫的范围1、进出境植物及植物产品检疫（进境、出境、过境）2、运输工具检疫（车、船、飞机等）、装载容器（集装箱等）、铺垫材料（托盘等）、包装材料检疫（木质包装）3、旅客携带物检疫（口岸）4、邮寄物检疫（国际邮件互换局）七、植物检疫的对象（有害生物）种类1、检疫性害虫2、检疫性病害（真菌、原核生物、病毒及类病毒、线虫等）3、检疫性杂草（恶性杂草：假高粱、毒麦；寄生性种子植物：兔丝子、列当）4、其他检疫性有害生物（软体动物：蜗牛）第二节、植物检疫的重要性一、引种与检疫的关系引种的优点：增加植物种质的多样性的手段、提高栽培植物抗病虫、逆境的手段、提高和改善品质的手段缺点：有害生物随调运植物或产品传播条件适宜又缺少天敌，导致有害生物迅速扩展危害，如马铃薯晚疫病、葡萄根瘤蚜等二、植物检疫的效益：①经济效益----可分为直接效益和间接效益。②社会效益③生态效益第三节、植物检疫的特点（简答）特点：一、植物检疫以先进的科学技术为后盾，法规为手段，实施强制性的检疫检查-----（法律法规与技术相结合）1.法规防治2.技术性强：快速、准确、有效二、植物检疫坚持预防为主，防御与铲除相结合。（风险分析定名录、一旦发现必根除）要有预见性：立法、执法过程三、植物检疫立足于国内，放眼于世界---国内与国际相结合（检疫的地域性和有害生物的传播性）第四节、国内外植检的概况和中国植检史一、世界各国植物检疫的基本类型（重点）从实验检疫的方法出发，全面检疫、针对性检疫2.根据植物检疫体系管理，分为三种模式：美国模式、欧洲模式、亚洲模式3.按照各国的地理位置、自然环境、资源禀赋和经济社会发展水平分为：发达国家型、经济共同体型、发展中国家型、环境优越型第二章、植物检疫法规第一节、植物检疫法规组成：假定、处理、制裁假定－－所要求或所应禁止的行为处理－－具体内容，细则、条例制裁－－违反后的法律后果一、植物检疫主管部门1.我国的植物检疫体系：口岸检疫、国内农业检疫、林业检疫2.植物检疫法规的立法和管理由农业部负责3.口岸的进出境植物检疫现由国家出入境检验检疫局管理；国内的植物检疫则由农业部和国家林业总局分别负责，国内县级以上各级植物检疫机构受同级农业或林业行政主管部门领导的管理体制。植物检疫的技术依托单位：包括植物检疫的科研单位、检疫技术人员培训基地、植物检疫学术团体第四章植物检疫程序检疫许可、检疫申报、现场检验、实验室检测、检疫处理与出证、检疫监管第一节检疫许可1.管理机构：国家质量监督检验检疫总局：负责因科学研究等需要引进的禁止进境物的特许审批。国务院及各地方政府所属植检机构：负责从国外引进植物种子、苗木及其他繁殖材料、水果、粮食等的一般审批2.申报要求（条件）：①必须事先向植物检疫部门提出申请；②必须详细说明需要引进物的品名、品种、产地、引进的特殊需要和使用方式；③必要时必须提供具符合检疫要求的监督管理措施。3..意义：①能够向出口国或地区提出相关的检疫要求，从而有效预防有害生物的传入；②避免盲目进口，并有助于进行合理索赔。第二节、实验室检测肉眼检测、过筛检测、比重检测、染色检测、X光检测、洗涤检测、保湿萌芽检测、分离培养与接种试验、噬菌体检测、显微镜检测、血清学检测、指示植物接种检测、分子鉴定和计算机辅助鉴定。产地检疫和预检的意义：①提高检疫结果的准确性、可靠性②简化现场检验的手续，加快商品流通③避免货主的经济损失疫情检测：检测方法：一般检测：广泛收集某一特定地区有害生物状况特定调查：针对特定的有害生物开展专门的调查检测手段：诱捕检测、预测圃检测第四章、植物病害检疫检验技术植物检疫性真菌常见检疫检验技术（提问）（一）直接检验-----肉眼检验1、适用范围：混杂在种子间的较大病原体（线虫瘿、菌核）污染大量病菌孢子的种子（小麦腥黑穗病）种子带明显病症的病粒（小麦黑胚病）①在检查时应先进行外表和周围的检查，然后，由表及里仔细观察病害症状、菌瘿、菌核等病症。②对于苗木、接穗、插条等，应注意茎、叶、芽、根各部位，并需检查粘着和夹带的土壤。③对块茎、块根以及鳞茎，应特别注意芽眼、凹陷处、伤口和附着的土壤。主要工具：放大镜或解剖镜2、检验方法：将送验样品分出一半试样，放在白纸或白色塘瓷盘中，检出线虫瘿、麦角菌、黑粉菌球、菌核及病粒，称其重量，病害感染率率(%)=病（粒）原体重量(g)/试样重量(g)×100%3、注意①无病征的种子不一定是无病的种子。②不同的病害可以表现类似的症状，③同一病害也可产生不同的症状。④在确定某种病害时，须与其他方法配合使用。（二）过筛检验检查混杂在种子内较大的病原体如菟丝子、菌核、线虫瘿和杂草种子等。利用病原体与种子形状、大小的不同，通过一定的筛孔将病原体筛出来，然后进行分类称重。过筛检验主要用于检验粮谷、种子、油料、干果和生药材（三）洗涤检验1、适用范围：种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。（附着在种子表面的病菌孢子）洗涤检验法原理：主要用于检查附着在种子表面的各种真菌孢子。种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等（四）比重检验法比重检验法一般用于检验种子、粮谷、豆类中的菌瘿、菌核和病秕籽粒等。原理：由于菌瘿、菌核、病秕粒，都要比健康籽粒轻。若将其浸入一定浓度的食盐水（糖、泥土等）或其他溶液中时，就会浮于液面。捞取浮物，结合解剖镜进行检验，即可鉴定其种类。（五）染色检验原理：某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原物本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上特有的颜色，帮助检出和区分病虫种类。这种方法即为染色检验法。（六）解剖检查法有许多病害或一些病害初发生阶段，在种子、苗木及其他植物产品表面没有明显的症状，诊断比较困难。有时为要了解病原物潜伏的场所，常常需要用解剖检验进行鉴定，如散黑穗病菌以菌丝体在胚中越冬,有的果树病害以菌丝体在花芽或鳞片中越冬。解剖检验主要采用徒手切片或切片机切片，经过染色，制成玻片标本后，放在显微镜下观察鉴定。（七）保湿萌芽检验原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。保湿萌芽检验的方法：保湿培养检验：吸水纸法、冰冻吸水法和琼脂平皿沙内萌芽检验、土内萌芽检验、试管幼苗症状测保湿萌芽检验的优点::容易检查根部和绿色部分，也可避免相互传染，但操作较麻烦，一般可用于检验珍贵的繁殖材料（八）分离培养检验分离真菌的方法有：组织分离法、稀释分离法（九）接种方法：拌种接种、浸种接种、花期接种法、整株喷雾接种、土壤接种法（十）核酸技术(十一)隔离种植检验：不易发现症状或病原物，需要在生长发育阶段进行病害观察或分析鉴定对不同的病害，用不同的方法：1、对较大的病原体过筛肉眼2、对种子外表有明显症状的：肉眼3、表面带菌但看不见的：洗涤、滤纸培养4、胚内病菌：离体胚培养5、种子内部的病原菌：琼脂培养第二节、植物病原细菌检疫检验技术（提问）——细菌溢准确检测种子和种苗是否携带检疫性病原细菌，是防治这类病害的关键。植物病原细菌的检测方法：直接检测、间接检测直接检测：检测病原细菌时，病原物不被提取或分离出来。间接检测：先把病原细菌提取、分离或破坏以后进行检测。又分为活菌检测和非活菌检测（一）直接检验1..直观检验：以症状为主的田间检测，植物细菌病害的产地检疫主要是以这种方式进行的。通过肉眼观察植株的症状、菌脓以及镜检观察，并结合田间诊断结果而做出。快速诊断细菌性病害方法----细菌溢2..生长检验：实验室检验、田间幼苗症状检验（二）间接检验1..活菌检测①分离培养法检验分离病原细菌：稀释分离法（培养皿稀释分离法、平板划线分离）细菌的形态：革兰氏染色法（多为阴性菌）、鞭毛染色②浓缩接种及离体叶检测③噬菌体检验细菌的色素：非水溶性色素、水溶性色素:过敏性反应——致病性的初步测定2、非活菌检测：用于植物病原细菌鉴定和检测的主要方法（1）免疫吸附分离检测原理：结合血清学与平板分离技术，利用与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目标细菌转移或释放到培养基上生长。方法：平皿免疫吸附评价测定法、免疫吸附稀释培养法（2）免疫荧光抗体法：先将荧光染料（异硫氰酸荧光黄或罗丹明等）与抗体，以化学方法结合起来，形成标记抗体。当与相应的抗原反应后，产生有荧光标记的抗体-抗原复合物。（3）PCR技术及其应用PCR的特点：①灵敏度高1.皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(µg=10-6)水平2.能从100万个细胞中检出一个靶细胞3.病毒检测的灵敏度可达3个RFU4.细菌检测的最小检出率为3个细菌②简便、快速1.一次性加好反应液，2～4h完成扩增2.扩增产物一般用电泳分析③对标本的纯度要求低：血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA第三节、植物病毒和线虫检疫检验技术植物病毒检疫检验技术一、鉴别寄主谱反应检验通过对所测定病毒有特殊反应的寄主将该病毒和其他病毒相区别开来。主要是植物病毒对批量鉴别寄主或指示植物反应来测定。二、血清学检测技术①植物病毒具有较强的抗原特性，它能够激发动物体产生大量相应的特异性抗体，并且血清中存在这种抗体。②在体外，该抗体又能与相同或相似的病毒特异性反应。通过这种特异性反应，就可以鉴别和检测不同的病毒。③具有快速、简便、特异性强、灵敏度高④在一般实验室中，最常用的血清学方法有琼脂双扩散、免疫电镜、ELISA等其他血清学方法还有：试管沉淀法、血凝集反应、微量沉淀法等三、物理方法检测病毒形态的透射电镜观察荧光染色显微检验法四、分子生物学检验技术1、分子杂交检测鉴别DNA的杂交交：Southernblot鉴别RNA的杂交：Northernblot鉴别蛋白质的杂交：：WesternblotPCR技术检测植物病原线虫检疫检验技术直接检验适用检验固着在植物体内或以休眠状态生存于植物组织内的线虫，如粒瘿线虫、根结线虫、胞囊线虫、水稻干尖线虫等。①种子类：以肉眼和手持放大镜仔细检查种子，检出畸形、变色、干瘪种子以及夹杂的土粒杂质等，作进一步检查②无性繁殖材料：从根系到茎、叶、芽、花等部位均应仔细检查，注意根、块茎等部位有无根结、肿瘤，根部有无黄色、褐色或白色针头大小的颗粒状物，须根有否增生，根部有否产生斑点、斑痕等症状③块根、块茎：是否干缩龟裂和腐烂，叶、茎或其它组织是否肿大、畸形等症状染色检验：适于检验植物组织中的内寄生线虫。酸性品红乳酸酚溶液四、分离检验：将病原线虫由寄主体内、土壤或其它载体中分离出来，再鉴定种类。分离方法：直接解剖法、简易贝尔曼漏斗法、过筛法、漂浮分离1、发病样品的采集及保存方法发病植物的采集土壤样本的采集保存方法2、植物寄生线虫的各种分离方法：（1）直接解剖（2）简易贝尔曼漏斗（3）过筛检验法(本法用于从大量土壤中分离各类线虫。)（4）漂浮分离法（简易漂浮法适于检查含有线虫胞囊的土样）3、线虫的杀死固定技术线虫的热力杀死、温和热杀死、化学杀死方法、、线虫的固定方法及常用固定液植物病原检疫检验新技术：分子检测技术（分子探针、PCR技术）同工酶技术农作物重要检疫性病害识别与防治进境检疫性真菌：小麦腥黑穗病一、小麦腥黑穗病（提问）（一）我国主要是光腥黑穗和网腥黑穗。该病常造成小麦减产，而且还降低面粉品质。病菌孢子因含有毒物质三甲胺，使面粉不能食用。如将混有大量菌瘿和孢子的麦粒作饲料，会引起家禽和牲畜中毒。（二）危害与症状1..危害苗期侵染的系统性病害，导致病株矮化（高度仅为健株的1/3-1/4），子粒为菌瘿所代替，造成严重减产。2.典型症状症状：病株特矮（1/3～1/2），分蘖特多（>>11倍），病穗特密，病粒特硬，有鱼腥臭味（三）生物学寄主范围：主要危害冬小麦，也危害大麦和黑麦.病原形态：3..生物学特性：分散的冬孢子在土中可存活11年，菌瘿可存活3--10年。萌发需长期低温与弱光照，适温为33--88℃，最低--22℃，10℃以上萌发不正常，可出现菌体自溶现象生初侵染来源：土壤带菌，冬孢子可存活33--77年，菌瘿可存活3～10年。传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水 .越冬与传播越冬：以冬孢子或菌瘿在土壤、种表、粪肥中;;远距离传播：冬孢子附在种子表面或菌瘿混入种子间随种子调运，或通过被孢子污染的包装材料、容器和运输工具近距离传播：土壤带菌、风、水等；粪肥（经牲畜消化道后冬孢子仍可萌发）麸皮、下脚料、淘麦水5.发生条件和适生区域条件：①一定数量的孢子②稳定积雪70以上的地区和年份病害常大流行，冬麦区苗期日均温度为0--10℃达45天以上同样有利于病菌的侵染适生区域：西北高原冬麦区和新疆、青藏高原晚播冬麦区………………高危地区发病规律：侵染期长，12月～4月，1～2月是盛期，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，50天到生长点，随寄主生长，菌丝进入穗原始体，到各个花器，破坏子房，形成冬孢子堆。长时间3～8℃低温利于侵染；冬麦区苗期日平均温度0～10℃达45d以上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。流行因素：大面积感病品种、足够菌源、冬季日均温0～10℃的日数＞40d、稳定积雪70d以上，积雪厚度10cmm以上。TCK的特点：①病菌抗逆性极强:冬孢子在土中可存活3~7年，菌瘿中冬孢子甚至长达10年以上。②传播途径：可通过土壤传播，混杂在小麦中的病粒（菌瘿）和病菌冬孢子可远距离传播。③造成的损失大：一般减产20％~50％，严重时可高达75％以上，甚至绝产。④防治难：很难防治或根除麦类黑穗病中危害最大、防治最难（四）检验方法直接检查：放大镜菌瘿检查筛下物：有无菌瘿碎块筛上物：检查挑出洗涤检查冬孢子鉴定方法：1）孢子形态鉴定：应以油镜检测成熟孢子各种尺度，目尺要精确核校2）孢子自发荧光鉴定3）冬孢子萌发鉴定4.PCR技术：206bp处有特异扩增带。检疫结果评定：经检疫未发现TCK，视为合格小麦若发现可疑，应增抽复合样品在未发现菌瘿的情况下，若在1份洗涤检验样品中发现的30个孢子中，5个或5个以上网脊值≥1.25微米，则不合格。如发现菌瘿，网脊值≥1.25微米为TCK，≤0.7微米为网腥，居中的参照自发荧光率判定。防治措施：1、进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处理2、带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，130℃30min或120℃1h。3、种子处理：三唑酮、福美双4、农业防治：重病地应轮作倒茬或改种春小麦、播种不宜过深二、烟草霜霉病分布与危害寄主范围：专性寄生，寄主范围窄，主要侵染烟草，自然条件，还可侵染茄科植物。3、症状：①发病时期：主要在苗期，大田期也发生。②发病部位：主要为害叶片。③症状特点：因病原菌