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原核表达PEDV经典株和流行株S基因N端片段的抗原性比较及单克隆抗体制备的任务书任务书任务名称：原核表达PEDV经典株和流行株S基因N端片段的抗原性比较及单克隆抗体制备任务目的：1.比较PEDV经典株和流行株S基因N端片段的抗原性差异，为进一步研究提供基础。2.制备针对PEDV经典株和流行株S基因N端片段的单克隆抗体，为研究PEDV的检测方法、诊断技术及疫苗研发提供技术支持。3.提高实验人员的技术水平，加强实验室的研究能力。研究内容：1.基于S基因序列的比对，设计PEDV经典株和流行株S基因N端片段的引物，使用PCR扩增并克隆到原核表达载体中。2.对原核表达的PEDV经典株和流行株S基因N端片段进行纯化及验证，包括SDS电泳、Westernblot及ELISA等方法。3.选取合适的小鼠作为免疫动物，免疫原核表达的PEDV经典株和流行株S基因N端片段，制备多克隆抗体。4.使用细胞融合技术，制备PEDV经典株和流行株S基因N端片段的单克隆抗体。5.对制备的多克隆抗体及单克隆抗体进行特异性和敏感性的检测，评估其在PEDV检测中的应用价值。6.最后，撰写实验报告并总结研究成果。参考文献：1.万芬.猪进口性腹泻病毒S蛋白N端片段的原核表达和免疫抗原性研究[D].沈阳农业大学,2014.2.Zhang,Q.etal.EvaluationoftransmissiblegastroenteritisvirusMillerstrainMproteinasadiagnostictoolusingamonoclonalantibody-basedindirectELISAandimmunochromatographicstrips.Journalofvirologicalmethods,2014,205:43-50.3.Kim,YK.etal.Protectiveimmuneresponsesofasinglemabrecognizingepizootichemorrhagicdiseasevirusglycoproteininmiceandwhite-taileddeer.Researchinveterinaryscience,2014,96(1):91-97.预期成果：1.成功克隆PEDV经典株和流行株S基因N端片段，并进行纯化及鉴定。2.成功制备出对PEDV经典株和流行株S基因N端片段的多克隆抗体和单克隆抗体。3.多克隆抗体和单克隆抗体特异性和敏感性良好，可应用于PEDV的检测及疫苗研发。4.通过本研究，提高实验室的技术水平和研究能力，为进一步研究提供基础。时间安排：1.设计实验方案：2天。2.克隆S基因N端片段及其表达：7天。3.抗原纯化及鉴定：2天。4.动物免疫及制备多克隆抗体：60天。5.单克隆抗体制备：30天。6.对多克隆抗体和单克隆抗体进行鉴定：10天。7.撰写实验报告：5天。费用预算：1.实验材料费：20000

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