病毒学第十一章 双链RNA病毒学习资料

第十章双链RNA病毒呼肠孤病毒科（Reoviridae）双RNA病毒科（Birnaviridae）微双RNA病毒科（Picobirnaviridae）单分病毒科（Totiviridae）10.1呼肠孤病毒科（Reoviridae）Reoviridae呼肠孤病毒科135000X一、分类按病毒的宿主范围和致病性不同分为2个亚科，共15个属，其中对脊椎动物致病的有7个属：呼肠孤病毒两个亚科的形态结构示意图正呼肠孤病毒属质多角体病毒属斐济病毒属水稻病毒属真菌呼肠孤病毒属环状病毒属轮状病毒属植物呼肠孤病毒东南亚十二节段RNA病毒属科州蜱传热病毒属光滑刺突属名病毒名称主要感染动物所致疾病光滑呼肠孤病毒亚科环状病毒属蓝舌病毒1-26型绵羊、山羊、鹿蓝舌病非洲马瘟病毒1-9型马、驴、骡、斑马非洲马瘟马脑炎病毒1-7型马流产、脑炎流行性出血症病毒1-10型鹿、牛流行性出血热、急性出血性疾病轮状病毒属轮状病毒甲至戊型几乎所有动物，通常有宿主特异性肠炎东南亚十二节段RNA病毒属版纳病毒人神经症状蟹十二节段病毒属刺突呼肠孤病毒亚科正呼肠孤病毒属哺乳动物正呼肠孤病毒1-4型多种哺乳动物

小鼠“油毛综合征”等禽正呼肠孤病毒鸡、火鸡、番鸭、鹅关节炎、肾炎、肠炎、慢性呼吸道病、心肌炎水生呼肠孤病毒属科州蜱传热病毒属呼肠孤病毒科的主要脊椎动物致病病毒二、科的特征无囊膜，球形病毒粒子，直径60-80nm，双层衣壳（三层），均呈二十面体对称，内壳体与核酸构成核心。基因组为双股RNA，分为10-12个节段，基因组大小为18-23kb，总分子量为12-20×106D。有6-10种结构多肽，细胞浆内复制，某些种有血凝活性。三、环状病毒属（Orbivirus)为典型的虫媒病毒根据血清学及基因的同源性分为14个群，其中5个群对家畜有致病性基因组由10个片段组成代表成员为蓝舌病毒蓝舌病毒（Bluetonguevirus，BTV)Humansnotsusceptible属于呼肠孤病毒科，环状病毒属，双股RNA病毒，以库蠓为传播介体基因组为10个双股RNA片段。病毒可使鸡胚死亡，表现水肿和出血病毒存在于感染动物的血液和各器官中1.病毒的基本特性群特异抗原为VP7，可用补体结合试验、琼脂扩散试验、免疫荧光技术检测型特异抗原为VP2，含有中和位点和血凝素，可凝集绵羊及人O型红细胞根据中和试验可将BTV分为26个血清型，各型之间无交叉免疫，病毒有基因序列漂移和重配现象地区血清型美国10，11，13，17澳大利亚1，20，21，23南非和西部非洲1~15，18，19，22，24中国1~4，12，15，16瑞士25，262.致病性以昆虫（库蠓）为传播媒介的反刍动物的一种急性传染病。OIE规定必须通报的A类传染病(OIE指定的A类病有15种）。主要发生于绵羊，表现为发热、白细胞减少、口鼻和胃黏膜的糜烂性炎症。危害：羔羊长期发育不良并有死亡，胎儿畸形，羊毛损坏（变粗而脆），造成很大经济损失。流涎，面部水肿蹄冠发炎口腔黏膜、舌头充血、糜烂临床症状季节（昆虫）实验室诊断3.诊断病毒分离ELISAPCRAGIDIFASN四、轮状病毒属（Rotavirus)最早由美国于1968年从犊牛粪便中分离到病毒随后在欧美各国以及新西兰、日本都发现了轮状病毒引起犊牛腹泻我国由庞其方等于1979年首次从儿童腹泻粪便中检测出轮状病毒1975年Woode和Bridge首次从猪分离出轮状病毒。我国于1982年从腹泻猪粪便中分离到轮状病毒1.轮状病毒的发现群致病性A人、牛、猪、其它动物B人D、F、G禽类E猪病毒形态类似车轮而得名基因组由11个双股RNA片段组成衣壳抗原VP6为群特异抗原根据中和试验分为A、B、C、D、E5群（F和G为暂定群）。引起婴幼儿及幼龄动物的腹泻2.轮状病毒的主要特性成熟轮状病毒粒子结构模式图3.猪轮状病毒（PorcineRotavirus，PRoV)引起猪腹泻的主要病毒之一，在猪群中多呈地方流行性，经粪一口传播成年猪大多呈隐性感染病毒主要在小肠绒毛上皮细胞的胞浆内增殖，使肠绒毛上皮细胞发生溶解、死亡，最后脱落，造成消化吸收的严重障碍，致使肠内容物渗透压增高，正常的离子和水分向肠腔分泌，加上酶活性明显下降，在临床上表现严重的水泻。组织学检查发现小肠绒毛缩短变平，顶端融化，柱状上皮细胞脱落。五、禽正呼肠孤病毒（Avianreovirus,ARV)1954年FaheyCrawley首次从患有慢性呼吸道疾病的鸡呼吸道中分离到ARV1972年Walker等通过电镜观察证实该病毒，并命名为呼肠孤病毒我国1985年首次报道属于呼肠孤病毒科、正呼肠孤病毒属1.病毒形态与理化特性无囊膜、球形病毒粒子对热有较强的抵抗力，能耐受60℃8-10h，56℃22-24h，37℃可达13-16周，22℃为48-51周，4℃为3年以上。对乙醚不敏感，对2%来苏儿、3%甲醛等有抵抗力无血凝活性，能诱导细胞融合2.病毒基因组结构特征根据电泳迁移率的不同，可将ARV的双链RNA基因组分为10个节段，这10个节段又可分为L(大）、M（中）、S(小）三个组正链(+)基因节段的5’段有帽子结构，而且每个dsRNA节段的3’端均露出羟基，这种dsRNA节段完全能够抵抗单链特异性的核酸酶S1的降解3.ARV的复制

Amodelfortheavianreovirusreplicativecycle.AvianreovirionsattachtocellsurfacereceptorsthroughtheσCfiberandpenetratebyreceptor-mediatedendocytosis.Intraendosomalreovirionuncoatingisfollowedbythereleaseoftranscription-competentcoreparticlesintothecytosol.TranscriptionofthedsRNAgenomesegmentsproducesall10viralmRNAs,whichhaveadualfunctionintheinfectedcell:(i)theyaretranslatedintoviralproteinsattheribosomes;(ii)theyarerecruitedintonewlyformedcoreorsubcoreparticlesandusedastemplatesforthesynthesisoftheviralminusstrands,thusformingprogenygenomes.Finally,viralmorphogenesiscompletestheformationofmaturereovirions,whichexittheinfectedhostcellcausingcelllysis.4.ARV的致病性流行于鸡、鸭、火鸡、鹅、鹦鹉等禽类主要引起感染鸡的病毒性关节炎/腱鞘炎和吸收障碍综合征，感染番鸭时多见肝、脾肿大及表面出现白色小坏死点可水平传播，也可垂直传播发病率高，但死亡率比较低。临床上常见于鸡马立克氏病毒、传染性法氏囊病毒感染的病例，混合感染可加剧病情和死亡。5.诊断RT-PCR琼脂扩散试验核酸探针空斑减数中和试验10.2双RNA病毒科（Birnaviridae）传染性法氏囊病毒（禽）传染性胰坏死病毒（鱼）一、科的特征病毒颗粒呈二十面体对称，球形，只具单层衣壳，粒子直径约55-77nm，无囊膜，表面无突起。基因组为双股、双节段RNA，病毒体有4-5种结构蛋白，在胞浆中复制。对乙醚、氯仿和胰蛋白酶有抵抗力，具有很高的热稳定性，IBDV于56℃可存活5h，于60℃存活90min，耐酸（pH3.0）。二、传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）同义名：传染性法氏囊炎病毒、盖姆波罗病病毒、鸡肾病变病毒1957年，美国甘保罗镇（Gumboro)首次爆发，又称为甘保罗病（GumboroDisease）。1962年，Cosgrove首次对该病进行了全面描述，由于病死鸡肾脏肿大，又称为“禽肾病”1962年，Winterfield等用鸡胚培养法成功地从发病小鸡中分离到病原，并称之为“传染性法氏囊因子”(Infectiousbursalagent)1970年世界禽病会定义为传染性法氏囊病。1979年，我国邝荣禄首次报道目前，该病呈世界性流行，变异株和超强毒株的出现以及引起的免疫抑制给养禽业造成了巨大的损失。IBDV属于双RNA病毒科，禽双RNA病毒属。无囊膜，二十面体立体对称，直径55-65nm，感染细胞内呈晶格样排列。1.病毒的基本特性IBDV对外界抵抗力强，对乙醚和氯仿不敏感。在pH12时失活，但在pH2时不受影响。耐冻融，反复冻融5次毒价不降低。超声波破裂不能灭活。在鸡舍中可以存活2-4个月，消毒和清洗的鸡舍也难以去除病毒。基因组为双链、分节段RNA，A节段约长3.3kb,B节段约长2.9kb。A片段VP2：主要蛋白VP3：主要蛋白VP4：病毒蛋白酶VP5：功能不清B片段VP1：RNA聚合酶2.IBDV基因组的结构组成3.IBDV抗原性（血清分型）VP2和VP3具有种特异性抗原表位，VP2具有型特异性抗原表位。根据VP2抗原性的不同，可以将IBDV分为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型VP2可以诱导保护性抗体，VP3的抗体没有保护作用VP3VP2血清Ⅰ型血清II型血清Ⅰ型鸡源毒株，仅对鸡致病，可以分为6个亚型。血清Ⅱ型为火鸡源性，一般对鸡和火鸡无致病性，其抗体对血清Ⅰ型不能产生保护。4.病毒分离培养5-7日龄鸡胚接种卵黄囊，9-11日龄鸡胚接种绒毛尿囊膜。感染胚水肿，头部、趾部和肾脏充血、出血，肝脏点状坏死和出血斑。变异株不致死胚，仅出现肝脏肿大和脾脏肿大。鸡胚接种：鸡胚中适应的IBDV毒株可适应细胞培养并产生细胞病变。常用的细胞系有鸡胚成纤维细胞、鸡胚肾细胞，鸡胚法氏囊细胞、鸡胚淋巴细胞系和一些非鸡源细胞系。细胞培养：自然宿主是鸡和火鸡，但最近几年国外也有关于从鸭、鹅、鸥等的血清中检测到IBDV抗体的报道。同时，我国学者周宗安等发现麻雀、鸭、鹅均可自然感染IBDV.(感染谱在不断扩大！）野毒具有不同程度的致病力，疫苗毒株也有潜在的致病力，所有的鸡都面临IBDV的威胁。5.致病性1-3w3-6w>18w免疫抑制最易感隐性感染20世纪80年代以前，IBDV造成的死亡率很低，用弱毒疫苗或灭活疫苗可以很好地控制。20世纪末开始，超强毒（vvIBDV)在比利时出现，随后在欧洲大陆蔓延，并迅速传播到亚洲、再到南美洲。vvIBDV的VP2抗原区与经典毒株存在差异我国目前主要流行的是vvIBDV。导致高死亡率，且弱毒苗难以控制。法氏囊弥漫性出血，粘膜上附有干酪样物质法氏囊浆膜出血法氏囊粘膜出血抗原检测免疫荧光：病毒分离鉴定的辅助手段。双抗夹心ELISA：直接对组织中的病毒进行检测和分型，快速