TCACM1326.31-2019见血封喉种子超低温保存技术规程

ICSC T/CACM1326.31—TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofAntiaristoxicariaLesch. 中华中医药学会T/CACMT/CACM1326.31—目前 活 附录A（规范性附录）试剂的配制和保存方 前——T/CACM1326.1——T/CACM1326.2——T/CACM1326.3——T/CACM1326.4——T/CACM1326.5——T/CACM1326.6——T/CACM1326.7——T/CACM1326.8——T/CACM1326.9——T/CACM1326.10GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。T/CACMT/CACM1326.31—GB/T3543.6GB/T3543.7见血封喉Antiaristoxicaria见血封喉果实AntiaristoxicariaLesch.2cm见血封喉种子AntiaristoxicariaLesch.seedof月～610010（2）见血封喉种子活力以种子生活力为判别标准。按照GB/T3543.7中的2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成2爿后放培养皿内，内侧面向下，滴入TTC溶液浸没种子，室温(25℃)避光放置4h后观察染色结果。TTCAA.1A.2≥60𝐴

×100%⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯（1）用尼龙网袋包裹见血封喉种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为40：1，至20％～30％。

𝑀1−

×100%……….36015mL（15种子）置于装载液（LS）中并于25℃处理种子20min，再用玻璃化保护溶液（PVS2）冰浴处理种子30min，换上预冷新鲜的PVS2后迅速投入液氮中进行超低温保存。LSPVS2AA.3A.4液氮中至少冻存24h后，取出2个冻存管，立即放入403min洗涤液（DS）15min3DSAA.5取出1管解冻后的种子，按照5.1活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥60％时视为保存成功。125～30湿度70％～85％条件下培养。见血封喉种子出芽周期大概25～40d。附录TTC1.00g100mL1TTCpH6.5～7.54溶液I：9.08g磷酸二氢钾溶于1L无菌水中。II：35.81g1LI﹕II2﹕313.7g11.9mLMSpH5.8100mL，高温高压灭菌，4℃冷藏。23.8mL13.6mL13.6mL13.7gMS中，调pH至5.8后，定容至100mL，高温高压灭菌，4℃冷藏。精密称取蔗糖41.1gMS溶液中，调pH至5.8后，定容至100mL，高温高压灭菌，4℃23(1)[MZhouZhekun,MichaelG.Gilbert.Moraceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.2003.5:21-73.（第二册）[M]