研究黄芪精中黄芪甲苷

研究黄芪精中黄芪甲苷一．产品概况OTC产品，为补血养气，固本止汗之良药。其疗效佳，口感好，携带方便。

YangtzeRiverPharmaceuticalGroup扬子江药业集团二.小组概况

(一)小组简介

制表人：张集盘日期：2006.3.20YangtzeRiverPharmaceuticalGroup扬子江药业集团(二)QC小组成员一览表制表人：张集盘日期：2006.3.20三．选择课题1.薄层扫描法测定黄芪精中黄芪甲苷含量的缺陷分析基线不稳定耗时长易出现鬼峰偏差大缺陷51.1.扫描时基线不稳定61.2.容易出现鬼峰71.3.检测偏差大，方法的准确性较差8大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流91.4.薄层板展开耗时长，且一块薄层板只能点一个批号的供试品，检测批次很有限，导致出成品检测报告的周期较长。1.5.按照部颁标准，以薄层扫描法（TLCS）对黄芪精中黄芪甲苷进行含量测定，结果如下。10黄芪精按部颁标准含量测定结果制表人：张集盘日期：2005.11.3TLCS法测定本品含量时偏差大，不利于产品质量的控制。112.课题确定

研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法可供直接借鉴的方法少黄芪化学成分复杂黄芪为君药黄芪甲苷为主要有效成分12四.设定目标拟制定黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法的回收率不低于90%；含量测定结果的相对平均偏差小于2.0%。13五．提出并选择最佳方案1.提出方案（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法142.方案的分析、评估与确定1516备注：可操作性、准确性、经济性三个指标均以1分（●一般）、3分（▲良好）、5分（■显著）为评分标准，上述综合得分为QC小组成员所评分数的总和。173.确定方案的采用顺序（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法PDCA18六．制定对策

根据以上选择的最佳方案制订对策表192021制表人：张集盘日期：2005.11.422七．对策实施实施一：色谱条件的确定1.仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪；Attech2000蒸发光散射检测器；梅特勒AG285电子天平。

黄芪精；天津农药总厂D101型大孔吸附树脂；甲醇、乙腈为色谱纯；95%乙醇为分析纯；水为超纯水。232.对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.1mg•ml-1的对照品溶液。3.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，0.45µm有机系微孔滤膜滤过，即得。244.色谱条件的确定25色谱条件筛选图1色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.2ml·min-1min24681012mAu100200300400500600700ADC1A,ADC1CHANNELA(ZJP\HQJ21528.D)1.4057.91726色谱条件筛选图2色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.0ml·min-127色谱条件筛选图3色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：0.9ml·min-128色谱条件筛选图4色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：0.9ml·min-129色谱条件筛选图5色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40℃流速：1.0ml·min-130色谱条件筛选图6色谱柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40℃流速：1.0ml·min-131色谱条件筛选图7色谱柱：DikmaDiamonsilTM（钻石）C18柱(4.6×250mm,5µm)流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40℃流速：1.0ml·min-1前延峰32色谱条件选择情况汇总表制表人：马军日期：2005.11.2033

因此，可以选择AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5µm）、以乙腈-水(32：68)为流动相，流速为1.0ml·min-1进行后续试验。34实施二：供试品前处理方法的选择

1.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用A％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用B％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。35

2.提取分离条件的确定收集上述水液和各拟弃去的乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C按照上述色谱条件分别进样20µl，记录色谱峰面积。36制表人:卢晶晶日期:2005.12.1037试验结果表明：（1）弃去的水液中目标物无损失；（2）当A=40，即采用40%乙醇洗脱时，目标物有损失；（3）当B=60，即继续采用60%乙醇洗脱时，则目标物洗脱不完全。因此确定A%、B%的最佳值分别为：30%、70%，并以此值确定的提取分离条件进行后续方法学的验证。38实施三：线性关系的确定取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至8个系列浓度,分别进样10µl，测定峰面积，以对照品浓度X(mg•ml-1)的lg值为横坐标，峰面积积分值Y的lg值为纵坐标进行线性回归，得回归方程：

Y=0.1819X+1.9515r=0.999239工作曲线评价：结果表明黄芪甲苷在76.560～255.20µg•ml-1

范围内线性关系良好。40实施四：精密度试验取同一供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，每次10µl，测得黄芪甲苷色谱峰峰面积平均值为978.57883，RSD为0.5%。41制表人：祖若玉日期：2006.2.742绘图人：祖若玉日期：2006.2.7评价：精密度良好，达到预期目标。43实施五：重复性试验取同一批号样品，制备6份供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，以外标两点法对数方程计算，即得黄芪甲苷的含量。44重复性试验结果制表人：张集盘日期：2006.2.1445

绘图人：张集盘日期：2006.2.14评价：重复性试验RSD为1.2%，达到预期目标。46实施六：稳定性试验取同一供试品溶液，于0、2、4、6、12、

14h分别精密吸取10µl注入液相色谱仪分析，测得峰面积值，计算RSD。47稳定性试验结果制表人：卢晶晶日期：2006.2.2048绘图人：卢晶晶日期：2006.2.20

评价：上述结果表明供试品溶液在14h内稳定性良好。49实施七：方法回收率试验

精密吸取已知含量同一批号样品5ml，6份，分别精密加入已知浓度的对照品溶液5ml，制备溶液，分别进样10µl，测得峰面积值，计算平均回收率和RSD。50回收率测定结果（n=6）制表人：张集盘日期：2006.2.2651评价：平均回收率为96.76%，RSD为1.91%，表明方法准确度良好，可以用于本品的定量分析。52评价1.初步评价建立了黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法，方法学研究符合《中国药典》2005年版（一部）附录“中药质量标准分析方法验证指导原则”。532.综合评价

取本品3批，将两法的含量测定结果进行对比。5455绘图人：陆莉娟日期：2006.3.956评价：采用HPLC-ELSD法测定黄芪精中黄芪甲苷含量比采用TLCS法测定时的相对平均偏差小，测定的结果较理想。57八.效果检查1.效果验证取不同批号的黄芪精，依法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10µl，测得峰面积值，并计算黄芪甲苷含量。10批样品含量测定结果见下表。5810批样品含量测定结果（n=4）596061上表数据反映出新的分析方法测定结果较理想，QC活动取得了良好的效果。622.效果二活动前后相对平均偏差柱状图

绘图人：张集盘日期：2006.3.12633.效果三(社会效益)此次QC活动,解决了薄层扫描法进行黄芪精中黄芪甲苷含量测定时基线不稳定、易出现鬼峰、检测耗时长及偏差大等问题,有助于正确地评价该产品的质量和稳定性。同时，本次QC活动的成果已形成“部颁标准升国家标准”的材料供药检所审核。64成果确认表九.标准化将新的检测方法形成文件，载入企