DB51∕T 3128-2023 畜禽遗传材料收集与保存技术规程

ICS65.020.30

CCSB40/49

DB51

四川省地方标准

DB51/T3128—2023

畜禽遗传材料收集与保存技术规程

2023-12-29发布2024-01-29实施

四川省市场监督管理局发布

DB51/T3128—2023

目次

前言..................................................................................II

1范围.................................................................................1

2规范性引用文件.......................................................................1

3术语和定义...........................................................................1

4样品来源.............................................................................2

5样品信息登记.........................................................................2

6采集人员要求.........................................................................2

7采集方法.............................................................................2

8包装与运输...........................................................................3

9物流追踪和记录.......................................................................3

10安全管理............................................................................3

附录A畜禽遗传材料样本信息采集单.......................................................5

附录B畜禽遗传材料样本编码规则.........................................................6

附录C畜禽样本采集量和储存方案.........................................................7

附录D猪冷冻精液生产技术操作规程.......................................................8

附录E家禽冷冻精液生产技术操作规程....................................................11

I

DB51/T3128—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。

本文件起草单位：四川省畜牧总站。

本文件主要起草人：曹伟，李强，王莉娟，刘园，张勇，洪宁，高慧纯，王小强，杨舒慧，葛桂华，

余易展，刘政权。

本文件为首次发布。

II

DB51/T3128—2023

畜禽遗传材料收集与保存技术规程

1范围

本文件规定了四川省畜禽遗传材料收集、整理与保存相关的样品来源、样品信息登记、采集人员要

求、采集方法、包装与运输、物流追踪和记录、安全管理。

本文件适用于四川省畜禽遗传资源基因库、保种场、保护区等保种单位的畜禽遗传材料收集、整理

与保存。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB2260中华人民共和国行政区划代码

GB/T5458液氮生物容器

GB13690化学品分类和危险性公示通则

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T25172猪常温精液生产与保存技术规范

GB∕T26938牛体内胚胎生产与移植技术规程

GB/T43051实验动物动物实验生物安全通用要求

GB50140建筑灭火器配置设计规范

AQ3013危险化学品从业单位安全标准化通用规范

NY/T1234牛冷冻精液生产技术规程

NY/T1571羊胚胎移植技术规程

NY/T1900畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范

NY/T3186羊冷冻精液生产技术规程

NY/T3444牦牛冷冻精液生产技术规程

NY/T3458种鸡人工授精技术规程

NY/T3796马和驴冷冻精液

NY/T4047家禽精液品质检测方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

畜禽遗传材料livestockandpoultrygeneticmaterial

畜禽遗传资源的胚胎、精液、卵子、细胞、毛发、DNA、RNA等遗传物质。

3.2

生物安全biosafety

在生物技术的开发和应用过程中，为避免对人类健康及生态环境产生潜在危害，所采取的综合

1

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性预防和控制措施。

4样品来源

《国家畜禽遗传资源名录》所列畜禽、蜂、蚕等遗传资源。

5样品信息登记

5.1登记《畜禽遗传材料样本信息采集单》，记录样本类型、物种信息、采集地、储存条件、采集人

员等信息。参考附录A。

5.2样品编号具有唯一性，并且长期使用，以保证信息的准确性。样品编号由15位字符、分五部分组

成：4位品种品系代码+6位行政区域代码（精确到区、县）+3位样品编号+1位性别代码+1位样品类型。

参考附录B。

5.3根据样本类型、用途，选择合适保存规格、最低保存数量、储存温度、储存类型。参考附录C。

6采集人员要求

样品采集人员须接受专业培训，熟悉品种特性，掌握遗传材料采集方法、储存条件及管理、防护措

施等。

7采集保存方法

7.1精液采集保存

牛冷冻精液采集和保存参照NY/T1234的规定执行；牦牛冷冻精液采集和保存参照NY/T3444的

规定执行；绵羊和山羊冷冻精液采集和保存参照NY/T3186的规定执行；马和驴冷冻精液采集和保存

参照NY/T3796的规定执行；猪冷冻精液采集和保存参照附录D的规定执行；家禽冷冻精液采集和保存

参照附录E的规定执行。

7.2胚胎采集保存

牛胚胎采集和保存方法参照GB∕T26938的规定执行；绵羊和山羊胚胎采集和保存方法参照NY/T

1571的规定执行；其它家畜胚胎采集和保存方法参照NY/T1900的规定执行。

7.3卵子采集保存

家畜卵子采集和保存方法参照NY/T1900的规定执行。

7.4细胞采集保存

畜禽体细胞的采集和保存方法参照NY/T1900的规定执行。

7.5组织样品采集保存

7.5.1活体采集保存

将畜禽保定后，利用取样器采集组织，放入冻存管或锡箔纸中，做好样本标记迅速放入液氮中保存。

7.5.2死亡动物样品采集保存

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动物死后2h内利用取样器采集组织，放入冻存管或锡箔纸中，做好样本标记迅速放入液氮中保

存。

7.5.3用于细胞培养的组织样本采集

在取样后3min内用pH7.0的PBS溶液对组织样本进行冲洗、迅速放入细胞保存液中，0℃～

4℃保存，24h内进行细胞培养。

7.6血液样品采集保存

7.6.1将畜禽保定，对采血部位进行局部消毒后，用采血针沿静脉缓慢刺入血管，待血液流出后收集

在不同需求的采血管内，0℃～4℃暂存。

7.6.2需保存全血的样品，全血0℃～4℃运输至保存单位后，保存于-80℃冰箱。

7.6.3需保存血清的样品，全血0℃～4℃运输至保存单位，进行血清分离并分装后，保存于-80℃

冰箱。

7.6.4需保存血浆的样品，新鲜全血置于含肝素、枸橼酸钠等抗凝剂的试管中，全血0℃～4℃运

输至保存单位后，进行血浆分离并分装后，保存于-80℃冰箱。

7.7毛发样本采集保存

畜禽保定后，对采集部位消毒后，分别采集背部、腹部、颈部、尾部的毛发（带毛囊）放入冻存管

中，迅速放入液氮进行储存。

8包装与运输

8.1包装

8.1.1生物样本选用三层容器保存，即内层容器、第二层容器及外层容器。

8.1.2三层容器包装上注明样本类型、编号（采集编号和样本编号）、物种信息、日期等标识。

8.1.3外层容器须坚固耐压，三层容器均须注意防水、防漏。

8.2运输

8.2.1样本的运输由专人承担，运输方式根据样本类型、运输距离、时间、温度要求等条件决定。

8.2.2运输前确认运输方式、目的地、运输证明文件等。运输文件须包括《样本信息采集单》。

8.2.3恒温（16℃～18℃）运输的样本，使用专用恒温设备运输；低温（2℃～8℃）运输的

样本，使用装有冰袋的泡沫箱或其它一些制冷剂保持2℃～8℃运输；超低温（低于-30℃）条件

运输的样本，用干冰保存运输；液氮条件下保存的样本，使用液氮罐进行运输，符合GB/T5458的要

求。

8.2.4对于运输过程中可能出现的问题，工作人员须提前准备相关解决方案。

9物流追踪和记录

9.1运输各个环节做好沟通、记录、追踪。

9.2装样运输时核查是否达到各种样品运送需要的防震、恒温和防照射等要求，接样时核查样品是否

符合要求。

10安全管理

3

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10.1基本要求

畜禽遗传材料保存单位制定相应的保存计划和质量管理、出入库管理、安全管理、消毒防疫、重大

突发事件应急预案等制度，以及遗传材料制作、保存和质量检测技术规程。有完整系统的技术档案资料。

10.2消防安全

畜禽遗传材料保存单位防火系统须符合GB19489的规定。畜禽遗传资源保种单位灭火器的配置符合

GB50140的规定。

10.3生物安全

畜禽遗传材料保存单位在样本采集和使用前须进行生物安全评估，并符合GB/T43051的规定。

10.4化学安全

畜禽遗传材料保存单位化学安全须符合GB13690的规定，在使用到有毒有害物质的工作区域，须符

合AQ3013的规定。

10.5设备安全

畜禽遗传材料保存单位的设施及仪器设备须建立安全维护系统，除制定有序的设备维护、更换计划，

定期进行设施的维护和检查外，还须制定相关仪器设备检定、校准计划并组织实施。相关设施设备的检

修工作都须由专业技术人员来进行。

10.6环境安全

畜禽遗传材料保存单位放置干冰、液氮的地方要确保空气流通，安装氧气与二氧化碳检测装置。液

氮储存装置须通过监控装备自动或手动记录每天的液氮用量与剩余量。相关人员在操作干冰和液氮时，

须做好防冻保护措施并佩戴专用的保护装备。

10.7信息安全

畜禽遗传材料保存单位须有统一、完整的信息管理系统，满足样本追踪、检索以及与其他数据系统

兼容或关联的需求，须根据不同工作人员职责设置相应的权限。信息管理系统须建立安全保障措施，注

意硬件防潮及信息防盗。

A

A

4

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附录A

（资料性）

畜禽遗传材料样本信息采集单

A.1畜禽遗传材料样本信息采集单

畜禽遗传材料样本信息采集单见表A.1。

表A.1畜禽遗传材料样本信息采集单

采集编号

样本类型血液组织细胞精液胚胎卵子毛发其他

物种信息

属种亚种

性别繁殖方式

采集地

省/直辖市市/州县/区

具体地点

储存条件

4℃冰箱-20℃冰箱-80℃冰箱液氮其他

采集人员

姓名单位

日期

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附录B

（资料性）

畜禽遗传材料样本编码规则

B.1畜禽遗传材料样本编码规则

畜禽遗传材料样本编码规则见表B.1。

表B.1畜禽遗传材料样本编码规则

品种品系编码行政区域代码分管号性别类型

县级行政区域

两位品种首字母缩写+

代码，具体参001-NNNF-雌性D-DNA

两位品系代码

见GB2260

001-NNNM-雄性R-RNA

001-NNNC-细胞

001-NNNT-组织

001-NNNB-血液

001-NNNE-卵子

001-NNNEM-胚胎

001-NNNS-精子

001-NNNH-毛发

示例：CH0151XXXX001FB

CH01：成华猪

51XXXX：四川省XX市XX区

001：第一管样本

F：雌性（Female）

B：血液（Blood）

CH0151XXXX001FB即成华猪在四川省XX市XX区采集的雌性第一管血液样本

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附录C

（资料性）

畜禽样本采集量和储存方案

C.1畜禽样本采集量和储存方案

畜禽样本采集量和储存方案见表C.1。

表C.1畜禽样本采集量和储存方案

样本类型保存规格最低数量储存条件用途

血液3～5mL3管-80℃冰箱RNA/DNA/蛋白提取

3管-80℃冰箱RNA/DNA/蛋白提取

组织2～10g

3份液氮RNA/DNA/蛋白提取/建立细胞系

单胎：1枚

胚胎200份液氮动物扩繁、育种

多胎：2枚

单胎：1枚

卵子200份液氮动物扩繁、育种

多胎：2枚

猪：15000剂

精液0.25mL牛：3000剂液氮动物授精、扩繁和育种

羊：3000剂

毛发适量3管-80℃冰箱核DNA和线粒体DNA分析

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附录D

（规范性）

猪冷冻精液生产技术操作规程

D.1采精前准备

D.1.1种公猪

D.1.1.1种公猪体型外貌和生产性能符合本品种标准，体质健康，系谱齐全。

D.1.1.2采精前先修剪种公猪阴毛至2cm以下，刷拭公猪体表并清洗消毒。

D.1.2采精室

D.1.2.1检查假台猪是否平稳，擦拭假台猪后半部。

D.1.2.2检查假台猪后方的防滑垫，防止公猪爬跨时打滑。

D.1.2.3对采精室清洗，并用紫外线消毒。

D.1.2.4采精室的温度须控制在15℃～25℃。

D.2采精

采精操作按照GB/T25172的规定进行。

D.3鲜精品质检测

D.3.1检测方法

检测方法按GB/T25172的规定进行，并做好登记。

D.3.2质量要求

D.3.2.1外观

淡乳白色或灰白色，均匀一致，无杂质。

D.3.2.2气味

略带腥味，无异味。

D.3.2.3精子活力

精子活力≥70%。

D.3.2.4精子密度

精子密度≥1×108个/mL。

D.3.2.5精子畸形率

精子畸形率≤15%。

D.4鲜精处理

D.4.1预稀释

营养液（葡萄糖1.5g、乳糖3g、甘氨酸0.8g，蒸馏水100mL）先预热到32℃，与鲜精1:1混合

均匀。预稀释后的精液放入17℃恒温箱内。

D.4.2离心

将预稀释精液装入100mL～500mL的离心管或离心杯内，在17℃和重力800g条件下离心15

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min后，弃上清液。

D.4.3稀释

冷冻稀释液（葡萄糖6.12g、EDTA0.3g、蒸馏水75mL、蛋黄20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、

青霉素和链霉素各1×105U）预热至17℃，以精子密度不低于4×108个/mL计算冷冻稀释液添加量。先

取2/3冷冻稀释液加到离心管中，以吸吐方式混合均匀，装入专用器皿中，再用剩余冷冻稀释液冲洗离

心管壁后合并。

D.4.4平衡

将盛放精液的器皿放入17℃水浴杯中，一同放进4℃冰箱，平衡1.5h。

D.4.5分装

D.4.5.1将精液分装到0.25mL或0.5mL细管中，标明生产单位、品种、种公猪号和生产日期。

D.4.5.2剔除有气泡、未灌满等不合格的细管精液。

D.4.5.3将分装好的细管精液铺放在冷冻支架上。

D.5冷冻

D.5.1冷冻方式

D.5.5.1程序冷冻：程控冷冻仪的冷冻柜预冷至4℃，将细管放入冷冻柜。以2℃/min的速率，从4℃

下降至1℃，以30℃/min的速率，从1℃下降至-25℃，以30℃/min的速率从-25℃下降至

-140℃，-140℃保持15min。冷冻程序完成后将细管浸入液氮。

D.5.5.2熏蒸冷冻：将液氮倒入深度50cm以上的专用冷冻箱预冷10min，保持冷冻支架高于液氮

面2cm、熏蒸冷冻8min。

D.5.2包装

将冷冻好的细管精液包装好，外包装上标明生产单位、品种、种公猪号、生产日期和支数等。

D.5.3保存

将包装好的细管精液放置液氮中保存。

D.6解冻

解冻液（葡萄糖3.7g、无水柠檬酸钠0.6g、碳酸氢钠0.125g、EDTA0.125g、氯化钾0.075g，蒸

馏水100mL）预热至26℃。

从液氮罐中快速取出2支～3支细管精液，放至38℃水浴锅中15s～20s或50℃水浴锅中7

s解冻。剪开细管精液封口端，挤入数滴精液至1mL解冻液中，搅匀，回温到37℃，静置20min。

D.7冻精品质检测

D.7.1检测方法

检测方法按GB/T25172的规定进行，并做好登记。

D.7.2质量要求

D.7.2.1精子活力

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精子活力≥30%。

D.7.2.2精子密度

精子密度≥4×108个/mL。

D.7.2.3精子畸形率

精子畸形率≤18%。

D.7.2.4细菌菌落数

细菌菌落数≤800CFU/mL。

D.8生产记录

做好冷冻精液生产全流程记录并存档。

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附录E

（规范性）

家禽冷冻精液生产技术操作规程

E.1采精前准备

E.1.1种公禽

E.1.1.1选择符合本品种标准，体质健康，系谱齐全的成年种公禽，单笼饲养3～4周，准备后续采

精训练。

E.1.1.2配种前1～2周开始采精训练，每天训练1次，使公禽形成条件反射，训练可采取按摩法。

E.1.1.3正式采精前，需剪掉公禽泄殖腔周围直径5～7cm范围内的羽毛，并在3h～4h内不再喂

水喂料。

E.1.2采精用具

参考NY/T3458执行。

E.1.3采精室

E.1.3.1采精环境保持清洁无污染。

E.1.3.2环境温度保持在20℃～25℃。

E.2采精

采精员右手