DB12∕T 1359-2024 水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、酰胺醇类抗生素残留量的测定液相色谱-质谱∕质谱法

ICS65.150

CCSB50

12

天津市地方标准

DB12/T1359—2024

水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、

酰胺醇类抗生素残留的测定液相色谱-质

谱/质谱法

Determinationofquinolones,sulfonamidesandamidolantibioticresiduesin

non-standarddrugsforaquaculturebyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

2024-11-27发布2025-01-01实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T1359—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由天津市农业农村委提出并归口。

本文件起草单位：天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心、山东省科学院海洋仪器仪表研

究所。

本文件主要起草人：陈永平、成振华、王辉、韩现芹、时文博、史艳艳、高丽娜、王愿宁、高丽、

李灏、曹建新、易伟、苏梦寒。

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DB12/T1359—2024

水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、酰胺醇类抗生素残留

的测定液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本文件规定了水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、酰胺醇类抗生素留量测定的原理、试剂

和材料、仪器、分析步骤、结果计算、正确度与精密度。

本文件适用于水产养殖用非规范药品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛

美沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹噁

啉、磺胺异噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共17种抗生素残留量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

非规范药品non-standarddrugs

水产养殖过程中用来净化水质、改良地质、除杂等的非药品，包括水质改良剂、底质改良剂、微生

态制剂、除杂剂及促生长剂等。

4原理

非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、酰胺醇类抗生素，先加水溶解或稀释，再用酸化乙腈萃取，经固

相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱法检测，内标法定量。

5试剂材料

除非另有说明，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。

5.1.2乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。

5.1.3甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）：色谱纯。

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5.1.4二氯甲烷（CH2Cl2，CAS号：75-09-2）：分析纯。

5.1.5乙酸乙酯（C4H8O2，CAS号：141-78-6）：分析纯。

5.1.6氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）：分析纯。

5.1.7乙酸铵（CH3COONH4，CAS号：631-61-8）：分析纯。

5.2溶液配制

5.2.1乙酸铵（2.0mmoL/L）-甲酸溶液（0.1%）：称取0.077g无水乙酸铵，用0.1%甲酸水溶液溶解

并稀释至500mL。

5.2.2甲醇-水溶液（15+85，体积比）：量取甲醇15mL加入85mL水中，混匀。

5.2.3甲酸-乙腈（0.1+99.9，体积比）：量取甲酸0.5mL，加乙腈稀释至500mL，混匀。

5.3标准品

17种抗生素类标准品应符合附录A，纯度≥95%。

5.4标准溶液配制

5.4.1标准贮备液

100µg/mL。取诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、磺胺嘧啶、磺

胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺多辛、磺胺喹恶啉、磺胺异噁唑、氯

霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各适量（相当于各活性成分10mg），精密称定，于各自容量瓶中，喹诺酮

类需加0.2mL甲酸，均用甲醇溶解后并稀释定容至100mL，配制成浓度为100µg/mL的标准储备液。避

光-18℃以下保存，有效期1年。

5.4.2氘代同位素内标标准储备液

500µg/mL。取氘代磺胺邻二甲氧嘧啶、氘代磺胺间二甲氧嘧啶、氘代诺氟沙星、氘代环丙沙星、

氘代恩诺沙星、氘代氯霉素内标各适量（相当于各活性成分5mg），精密称定，于各自容量瓶中，用甲

醇溶解稀释定容至10mL。配制成浓度为500µg/mL同位素内标标准储备液，避光-18℃以下保存，有

效期1年。

5.4.3喹诺酮类与磺胺类混合标准工作液

准确吸取各喹诺酮类和磺胺类标准储备液（5.4.1）适量，用甲醇稀释制成1.0µg/mL混合标准工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1个月。

5.4.4酰胺醇类混合标准工作液

准确吸取各酰胺醇类标准储备液（5.4.1）适量，用甲醇稀释制成氯霉素、氟苯尼考0.1µg/mL，

甲砜霉素0.5µg/mL混合标准工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1个月。

5.4.5磺胺类与喹诺酮类混合内标标准工作液：

准确吸取各磺胺类和喹诺酮类内标标准储备液（5.4.2）适量，用甲醇稀释制成10.0µg/mL混合

标准工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1个月。

5.4.6酰胺醇类混合内标标准工作液

准确吸取各酰胺醇类内标标准储备液（5.4.2）适量，用甲醇稀释制成1.0µg/mL混合内标标准工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1个月。

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DB12/T1359—2024

5.5材料

通过式固相萃取柱，200mg/6mL，或性能相当者。

6仪器

6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源。

6.2分析天平：感量0.01g、0.01mg。

6.3高速离心机：转速大于10000r/min。

6.4超声波震荡仪。

6.5涡旋振荡器。

6.6氮吹仪。

6.7粉碎装置：如杵或研钵。

6.8筛：筛孔为1mm金属网。

7试样制备

7.1试样制备

7.1.1固态非规范药品

按GB/T20195的规定制备试样，至少100g，粉碎使其全部通过1.0mm孔径的分析筛，装入密闭容

器中备用。

7.1.2液态非规范药品

将样液过0.45µm滤膜，收集样液体积20mL，于密闭容器中保存。

7.2试样保存

将试样于4℃及以下条件下保存。

8分析步骤

8.1样品处理

称取非规范药品0.1g（准确至0.01g)，用水稀释至100mL，涡旋1min，超声波超声5min，取5mL

置于50mL离心管中，加入50μL混合内标标准使用液（5.4.5、5.4.6），加入2.0gNaCl，再加入10mL

酸化乙腈，涡旋1min，超声波超声5min，8000r/min离心3min，取上清液过固相萃取柱于20mL玻璃

离心管中，再加入5mL酸化乙腈，重复上述操作，2mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于40℃条件

下，氮气吹至近干，残留物加入甲醇溶液（5.2.2）1mL，充分涡旋混匀，转移至1.5mL离心管中，20000

r/min离心5min，取上清液过0.2μm有机相滤膜后，取100µL滤液，用甲醇溶液（5.2.2）定容至10.0

mL，上机测定。

注：对在本实验条件下测定浓度过高或过低时，应适当增加或降低稀释倍数。

8.2测定

8.2.1磺胺类与喹诺酮类

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DB12/T1359—2024

8.2.1.1色谱条件

8.2.1.1.1色谱柱：C18色谱柱，1.7μm，100mm×2.1mm（内径），或性能相当。

8.2.1.1.2柱温：35℃。

8.2.1.1.3流速：0.25mL/min。

8.2.1.1.4进样体积：5.0μL。

8.2.1.1.5流动相：甲醇-（乙酸铵-甲酸溶液，5.2.1）；洗脱程序见表1。

表1流动相梯度洗脱程序

时间（min）VA/%VB/%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.1.2质谱条件

8.2.1.2.1离子化模式：电喷雾离子源（ESI+），多反应监测。

8.2.1.2.2喷雾电压：5500v。

8.2.1.2.3气帘气压力：0.24MPa。

8.2.1.2.4碰撞气压力：0.02MPa。

8.2.1.2.5离子源温度：550℃。

8.2.1.2.6碰撞室入口电压：10v。

8.2.1.2.7碰撞室出口电压：10v。

8.2.1.2.8驻留时间：50ms。

8.2.1.2.9离子源Gas1：0.6MPa。

8.2.1.2.10离子源Gas2：0.2MPa。

8.2.1.2.11多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量见表2。

表2多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量

母离子子离子解簇电压碰撞能量

目标化合物

m/zm/zvev

1088522

磺胺噻唑256

156*8516

1088525

磺胺嘧啶251

156*8516

1088522

磺胺甲基异噁唑254

156*8516

1868517

磺胺二甲嘧啶279

156*8519

1728517

磺胺甲基嘧啶265

156*8517

5

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1088529

磺胺多辛311

156*8519

1088529

磺胺喹噁啉301

156*8519

1088525

磺胺异噁唑268

156*8517

233.48526

诺氟沙星320.3

276.3*8526

245.38535

环丙沙星332.2

288.3*8525

245.2*9039

恩诺沙星360.2

316.39027

2618527

氧氟沙星362

318*8518

2908518

培氟沙星334

316*8520

2658522

洛美沙星352

308*8516

氘代诺氟沙星325.3307.28530

氘代环丙沙星340.3322.38529

氘代恩诺沙星365.3321.39428

氘代磺胺间二甲氧

3171568520

嘧啶

氘代磺胺邻二甲氧

3141568517

嘧啶

注：*为定量碎片离子

8.2.1.3标准工作曲线

分别准确移取标准工作液适量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，喹诺酮类与磺胺类稀释成质量浓

度为5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，内标液浓度均为50ng/mL。

8.2.2酰胺醇类测定

8.2.2.1色谱条件

8.2.2.1.1色谱柱：C18色谱柱，1.7μm，100mm×2.1mm（内径），或性能相当。

8.2.2.1.2柱温：35℃。

8.2.2.1.3流动相：甲醇-水；流动相洗脱程序见表3。

8.2.2.1.4流速：0.3mL/min。

8.2.2.1.5进样体积：5.0μL。

表3流动相梯度洗脱程序

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时间（min）VA/%VB%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.2.2质谱条件

8.2.2.2.1离子化模式：电喷雾离子源（ESI-），多反应监测。

8.2.2.2.2喷雾电压：-5500v。

8.2.2.2.3气帘气压力：0.24MPa。

8.2.2.2.4碰撞气压力：0.02MPa。

8.2.2.2.5离子源温度：550℃。

8.2.2.2.6碰撞室入口电压：10v。

8.2.2.2.7碰撞室出口电压：10v。

8.2.2.2.8驻留时间：100ms。

8.2.2.2.9离子源Gas1：0.6MPa。

8.2.2.2.10离子源Gas2：0.2MPa。

8.2.2.2.11多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量见表4。

表4多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量

母离子子离子解簇电压碰撞能量

目标化合物

m/zm/zvev

152*-55-24

氯霉素321

257-55-18

290-55-18

甲砜霉素354

185*-55-27

185-55-14

氟苯尼考356

336*-55-27

氘代氯霉素334.1318.1*-55-26

注：*为定量碎片离子

8.2.2.3标准工作曲线

分别准确移取标准工作液适量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，氯霉素、氟苯尼考稀释至0.5ng/mL、

1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL，甲砜霉素稀释至2.5ng/mL、5.0ng/mL、

10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL，内标液浓度均为5.0ng/mL，供液相色谱-串联质

谱仪测定。

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8.2.3定性和定量

8.2.3.1保留时间

被测试样中目标物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之

内。

8.2.3.2离子丰度比

在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，同一检测批

次，对同一化合物，样品中目标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许相对偏差

不超过表5规定的范围，则可判断样品中存在目标物。

表5定性时离子丰度比最大允许偏差

离子丰度比（%）＞50＞20～50＞10～20≤10

允许相对偏差(%)±20±25±30±50

8.2.3.3定量

内标法定量，其中磺胺异噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺多辛以氘代磺胺间二甲氧嘧啶为内标，磺胺噻唑、

磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶为内标，氯霉素、

甲砜霉素、氟苯尼考以氘代氯霉素为内标。在上述液相色谱-质谱条件下,标准溶液中特征离子质量色谱

图见附录B。

8.2.4试样溶液测定

将标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱/质谱联用仪中，保留时间和离子丰度比定性，测

得定量用子离子色谱峰面积，待测样液中化合物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内。

8.2.5平行试验

按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。

8.2.6空白试验

除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行测定。

9结果计算

试样中各药物残留量以质量分数ω计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或公式（2）计

算。

AAV1000

1i1

AsAism1000

V1000

22

m1000

式中：

——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；

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DB12/T1359—2024

1——标准工作液中被测物的质量浓度数值，单位为毫克每升（mg/L）；

2——标准工作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度数值，单位为毫克每升（mg/L）；

A——试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；

As——标准工作液中被测物的质量色谱图峰面积；

Ai——试样溶液中内标物的质量色谱图峰面积；

Ais——标准工作液中内标物的质量色谱图峰面积；

V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；

m——试样质量数值，单位为（g）.

计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字，含量超1

mg/kg时保留3位有效数字。

10正确度和精密度

10.1正确度

磺胺类、喹诺酮类、酰胺醇类测定回收率为70%～110%。

10.2精密度

本方法的批内相对标准偏差小于15%，批间相对标准偏差小于15%。

11其他

本实验条件下非规范药品中喹诺酮类、磺胺类定量限为1.0mg/kg；氯霉素、氟苯尼考定量限为0.1

mg/kg，氟苯尼考定量限为0.5mg/kg。

9

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A

A

附录A

（规范性）

17种抗生素中英文对照索引

17种抗生素中英文对照索引，见表A.1。

表A.117种抗生素中英文对照索引

序号药物中文名药物英文名CAS号分子式

1诺氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3

2环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O3

3恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3

4氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4

5培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3

6洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O3

7磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-0C9H9N3O2S2

8磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-9C10H10N4O2S

9磺胺甲基异噁唑Sulfamethoxazole723-46-6C10H11N3O3S

10磺胺二甲嘧啶Sulfam