沙门氏菌和志贺氏菌检测操作程序

沙门氏菌和志贺氏菌检测操作程序范围本程序规定了粪便标本中沙门氏菌（Salmonella）和志贺氏菌（Shigella）的检验方法。检验程序沙门氏菌和志贺氏菌检验程序见图1。36℃36℃±1℃，18h粪便或肛拭子挑取3个或以上可疑菌落，接种于5％羊血琼脂平板报告进行系统生化鉴定、血清学试验TSI，赖氨酸，MIO，西蒙氏柠檬酸盐琼脂，尿素SBG增菌液XLD和MAC36℃±1℃，18h36℃±1℃，18h直接科玛嘉沙门显色培养基TSI:K/Ag++赖氨酸:+MIO:+/-/+柠檬酸盐:+尿素:-TSI:K/Atr赖氨酸:+MIO:+/-/-柠檬酸盐:-尿素:-TSI:K/Ag赖氨酸:-MIO:+/-/+柠檬酸盐:-尿素:-TSI:K/A赖氨酸:-MIO:-/V/-柠檬酸盐:-尿素:-反应结果与左侧描述不符TSI:K/A赖氨酸:-MIO:-/-/+柠檬酸盐:-尿素:-沙门氏菌属伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌志贺氏菌属宋内志贺氏菌可能是肠道菌群，或者需要额外试验以排除其他致病菌或生化不典型的沙门氏菌或志贺氏菌分离株36℃±1℃，18h操作步骤标本收集标本包括新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子。最优标本是转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。肛拭子收集后应当目测，需要在拭子上明显见到粪便。所采集的标本尽快检验，放入Cary-Blair运送培养基中的标本应在冷藏条件下24h内送检。新鲜的粪便标本置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中，冷藏条件下8h内送检。分离培养直接分离培养新鲜粪便：无菌拭子采集少量粪便，尽量从可见血或黏液的部位收集；新鲜拭子在XLD和MAC一区划线；以1µL无菌接种环或接种针划线分离。在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。肛拭子：操作程序同新鲜粪便。转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子：轻搅混合标本；拭子在XLD和MAC一区划线；以1µL无菌接种环或接种针划线分离；在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。平板36℃1℃增菌培养增菌液于36℃1℃培养18h～24h，采用上述方法于科玛嘉沙门氏菌显色平板上划线分离，36℃菌落特征选择性平板上可疑菌落的特征见表1。沙门氏菌属和志贺氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌（大多数）伤寒沙门氏菌志贺氏菌属MAC琼脂菌落光滑、无色，直径2mm～3mmXLD琼脂菌落呈红色，直径2mm～4mm科玛嘉显色培养基紫色或酒红色紫色或酒红色纯培养挑取3个或以上可疑菌落，划线接种5%羊血琼脂平板，36℃±1℃初步鉴定可疑菌落接种TSI琼脂，赖氨酸脱羧酶培养基、动力-靛基质-鸟氨酸琼脂（MIO）、西蒙氏柠檬酸盐琼脂和尿素琼脂。沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别见表2。沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别表项目沙门氏菌（大多数）伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌志贺氏菌属TSI（斜面）KKKKTSI（底层）AAAATSI（产气）＋－＋＋TSI（硫化氢）＋少量－－赖氨酸＋＋－－MIO（动力）＋＋＋－MIO（靛基质）－－－可变MIO（鸟氨酸）＋＋＋痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌：－宋内志贺氏菌：＋柠檬酸盐（西蒙氏）＋－－－尿素－－－－血清学鉴定挑取5%羊血琼脂平板上的菌落，进行沙门氏菌和志贺氏菌的血清学鉴定，设盐水对照。确定鉴定刮取5%羊血琼脂平板上的单个菌落，进行系统生化鉴定。结果与报告报告粪便标本中检出沙门氏菌或志贺氏菌。菌株的保存和上送培养物穿刺接种半固体培养基，轻拧管盖，36