微生物的分离纯化综合实验

一、实验方案

实验序号2实验项目微生物的分离、纯化、接种和鉴定

实验时间2012.3.31实验室生化楼327小组成员

1.实验目的

①了解微生物分离与纯化的原理；

②掌握常用的分离与纯化微生物的方法；

③学习并掌握微生物的几种接种技术；

④建立无菌操作的概念，掌握稀释菌液、倒平板等无菌操作技术。

2.实验原理、实验流程或装置示意图

土壤是微生物生活的大本营，土壤中所含的微生物在数量和种类上都是极其丰富的。因此

土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离和纯化得到许

多有价值的菌株.本实验将采用从土壤中分离得到的微生物。

分离纯化技术是微生物学中重要的基本技术之一。从混杂微生物群体中获得只含有某•种

或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。从食品或其他样品中中分离微牛.物的H的是

为了查找与污染有关的微生物，或找出能应用于食品加工的微生物，这对于食品生产和研究很

有价值。所以，在分离时应掌握原则，以便指导检出微生物，避免漏杳误杳。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此

可以通过挑取单一菌落而获得一种纯培养。本次实验采取平板划线法完成。

将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称为接种。接种是微生

物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有

关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关健是要严格地进行无菌操作，如果

操作不慎引起污染，则会导致实验结果不可匏，继而会影响下一步工作的进行。

根据菌落的生长特征，在一定程度上可以鉴定是何种微生物。

实验步骤：称取土样1.0g—►溶解于99mL生理盐水中一►充分搅拌一~►移取上一个

试管中1ml的溶液，放入下一个已装有9mL生理盐水的试管中一►试管分别标号10,10,

10\10弋I。--»标号io,10弋I。，I。，的试管分别再用培养基培养，每种培养基倒

三皿——►用牛皮纸包好恒温培养，24h后观察

己灭菌的接种环从平板培养基上挑取分离的单个菌落一►接种到培养皿（平板划线）和

斜面培养基上一►用牛皮线包好恒温培养，24h后观察一►根据根据菌落的生长特征，鉴

定是何种微生物。

3.实验设备及材料

照相设备、烘箱、显微镜、天平、乳胶头、橡皮圈、牛皮纸、接种环、无菌培养皿、盛9mL

生理盐水的试管（带有试管塞）、99mL生理盐水并带有瓶塞的三角瓶、移液管、洗耳球、烧杯、

玻璃棒、试管架、电炉、手套、酒精灯、打火机、生理盐水（0.85%NaCl）、营养琼脂培养基、

棉绳等

4.实验方法步骤及注意事项

1、采土样：选择校园内肥沃（微生物较多）的土壤，去表层土，挖5cm深度的土壤约10g,装入

洁净的小烧杯中，封好口，带回实验室。

2、制备土壤稀释液：用天平称取上样1.0g,放入盛99ml生理盐水的三角瓶中，充分搅拌振荡

lOmin使土壤均匀分散成为土壤悬液。用1mL移液管从中吸取1mL土壤悬液，注入事先有标号

为IO"装有9mL生理盐水的试管中，吹吸3次,振荡均匀。然后同样方法，配置成稀释度为10）

10"、107的土壤菌悬液。用一支新的尢菌移液管，由低浓度开始，从各浓度土壤稀释液中各吸

取1mL,对号均匀地放入已写好稀释度的培养基平板上（直径较小的那个培养皿），在酒精灯火

焰上方操作，每个浓度做3个平板（重复）。（注意：操作时每一个稀释度换一支试管，移取液体

和将液体置于培养皿中时必须在火焰上方操作，这样可以在一定程度上保证是无菌操作）

3、倒平板：右手持盛培养基的三角瓶置于火焰旁边，左手将瓶塞轻轻地拔出，瓶口保持对着火

焰，然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约1/3,加盖后轻轻摇

动培养皿，右三圈，左三圈，右三圈，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，

冷却后倒置。（注意:倒平板必须在火焰上方操作，这样可以在一定程度上保证是无菌操作）

4、培养：用牛皮纸包好，放到温度为37℃的恒温箱中培养，23后观察。

5、纯化和接种：用已经灭菌的接种环从平板培养基上挑取分离的单个菌落，接种到培养皿和斜

面培养基（接种管）上.培养皿用平板划线法完成，平板划线应不少于150条线.用牛皮纸包好恒

温培养，24h后观察.

6、鉴定：根据根据菌落的生长特征，对照食品微生物学课本，鉴定是何种微生物。

5.实验数据处理方法

观察培养基和试管里的微生物的生长情况,根据根据菌落的生长特征，对照食品微生物学课本，

鉴定是何种微生物。

6.参考文献

[1].牛天贵.食品微生物学实验技术.第1版.北京：中国农业大学出版社，2002.

[2].郝林.食品微生物学实验技术.北京：中国农业出版社，2001.

[3].何国庆，贾英民，丁立孝等.食品微生物学.第2版.北京：中国农业大学出版社,

2009.

教师对实验方案设计的意见

签名：

年月日

二、实验报告

1.实验现象与结果

I

2.对实验现象、实验结果的分析及其结论

⑴、平板划线划得不是很好，超过24h后才观察导致菌落都差不多生长在一起。不过接种管斜

面的划线很成功，可以清楚地看清一些菌落。总的来说，实验算是成功的。

⑵、观察培养基和试管里的微生物的生长情况，根据根据菌落的生长特征，对照食品微生物学

课本，鉴定是酵母菌和霉菌及放线菌。

三、实验总结

1.本次实验成败及其原因分析

⑴、由「划线技术不够娴熟，平板划线划得够好，超过24h后才观察导致菌落都差不多生长在一

起。不过试管斜面的划线很成功，可以清楚地看清一些菌落。但总的来说，实验算是成功的。

⑵、观察培养基和试管里的微生物的生长情况，根据根据菌落的生长特征，对照食品微生物学

课本，鉴定是酹母菌和霉菌及放线菌。

2.本实验的关键环节及改进措施

⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即

可。接种环使用后，先在火焰周围把环上标本烤•干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，

污染环境。金属杆快速通过火焰2—3次，杀灭表面微生物。

⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。

⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。

思考题

1、食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？

2、食品被微生物污染后有哪些危害？

3、检样稀释时，每个稀释度都要更换刻度吸管，为什么？

1、答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物，且无机盐含量相对较低,

食品中含有一定的水分，并且食品包装后容易使内部升温，这些都是很适合微生物（细

菌、原虫、病毒）生长繁殖的情况，因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。所

以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等，或者真空包装。

2、答:⑴、降低食品的营养;

（2）、引起食品腐败变质；

（3）、引起呕叶.、中毒或者某些疾病（如痢疾、腹泻、呼吸道感染等）和潜在性的慢性危

害等。

3、答：每个稀释度都要更换刻