2025人教版高考生物复习讲义：基因工程的基本工具和操作程序

第51课时基因工程的基本工具和操作程序

课1.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和

标载体三种基本工具。

要2.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表

求达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。

1.重组DNA技术

2024•山东卷，5；2024•江西卷,12；2023•新课标卷,6

的基本工具

考

2024•重庆卷，19；2024湖南卷,21：2024•甘肃卷，24：

情

2024•安徽卷，20;2024•河北卷,22；2024•山东卷，25；

分2.基因工程的基

2024•全国甲卷，38；2024•新课标卷，35；2024•黑吉辽

析本操作程序

卷，25；2023,全国乙卷,38；2023•全国甲卷，38；2023♦湖

北卷，4；2023•广东卷，20

命题点一重组DNA技术的基本工具

主干知识•复盘再研必备知识

1.基因工程的概念

［认知觉醒］基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新

的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。下列关于基因

工程的叙述，错误的有0

①基因工程的原理是基因突变

②从操作层面看，基因工程是在细胞水平上进行设计和施工的

③基因工程能克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传性状

④基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的

提示①②

2.基因工程的工具

［认知觉醒］EcoRI限制酶的识别序列和切割位点为5，-GIAATTC-3\

SmaI限制酶的识别序列和切割位点为5，一CCCIGGG-3%下列关于限制酶（限

制性内切核酸酶)的叙述，正确的是_______。

①限制酶只存在于原核生物中

②限制酶能识别DNA分子的特定核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷

酸二酯键断开

③EcoRI限制酶切割DNA分子后形成平末端

@Sma1限制酶切割DNA分子后形成黏性末端

⑤EcoRI限制酶是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制醐

提示②⑤

1967年，世界上几个实验室儿乎同时发现了一种能够将两个DNA片段连接起

来的酶,称之为DNA连接酶。下列关于DNA连接酶的叙述,错误的有o

①DNA连接酶催化磷酸二酯键的断裂

②T4DNA连接酶只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，不能连接具有

平末端的DNA片段

③E.co〃DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝

合”双链DNA片段的平末端

@T4DNA连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于E.coliDNA连

接酶

⑤DNA连接酶与DNA聚合醐是同一种酶，作用相同

提示①②④⑤

思维升华(l)DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的

脱氧核甘酸连接到已有的DNA片段上。

(2)DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。

基因工程中的载体，能携带外源DNA片段进入受体细胞，被称为“分子运输

车”。

⑴基因工程中通常是利用作为载体，将基因送入细胞。除此以外，常用

的载体还有等。

提示质粒噬菌体、动植物病毒

(2)作为基因工程的载体，应满足哪些主要条件？

提示①能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNAL,随受体DNA同步复

制；②有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中；③有特

殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选。

I关键能力•提升深研典型例题

题型1基因工程的两大工具酶（科学思维）

[例1]（2023・新课标卷，6）某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接

能为工具，将日的基囚（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切

割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。

II

5,-GAATTC-3,5'-GGATCC-3'

3,-CTTAAG-5,3'-CCTAGG-5'

tf

伽酶2

I5-XGATCT-3,

5,-CCCGGG-3,

3,-GGG<CCC-5,3,-TCTACjA-5,

酣3梅4

下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是（）

A.质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coliDNA连接酶连接

B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接

C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接

D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coliDNA连接酶连接

答案C

解析酶3切割后得到的是平末端，可以用E.co"DNA连接酶，但£co〃DNA

连接酶连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低『T4DNA连接酶，A不符

合题意；质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末

端，二者不能连接，B不符合题意；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到

黏性末端，用T4DNA连接酶连接，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此

重组表达载体的构建方案最合理且高效，C符合题意；若用酶2和酶4切割质粒

和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标

A.在进行基因工程操作中，被用作载体的质粒都是天然质粒

B.所有的质粒都可以作为基因工程中的载体

C.质粒是一种独立于细菌染色体外的环状DNA分子

D.作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因

答案CD

解析在进行基因工程操作中，被用作载体的质粒是在天然质粒的基础上进行过

人工改造的，A错误；具有一个至多个限制酶切割位点、具有标记基因、能进行

自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制的质粒才可以作为基因

工程中的载体，B错误；质粒是一种独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA

之外的环状双链DNA分子，细菌是原核生物，没有染色体，C正确；作为载体

的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因，且能在受体细

胞中复制并稳定保存，DJF确。

［例3］（2025・陕西汉中模拟）质粒是基因工程中常用的一种载体。下列关于质粒的

说法，错误的是（）

A.质粒中的喋吟碱基数和喀咤碱基数是相等的

B/-些质粒可以整合到目的细胞的染色体.上，随受体DNA同步复制

C.可以利用质粒上的特殊标记基因对目的基因进行筛选

D.质粒至少应有三个限制酶识别切割位点，便于目的基因插入

答案D

解析双链DNA中，A=T、G=C,因此A+G=T+C,即喋吟碱基数等于喀唳

碱基数，A正确；基因工程中的载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体DNA

上，随受体DNA同步复制，以便提供大量的目的基因，B正确；质粒上需要具

有某些特殊的标记基因，以便于重组DNA分子的筛选，C正确；质粒一般具有

一个至多个限制酶切割位点，以供目的基因插入其中，D错误。

命题点二基因工程的基本操作程序

主干知识•复盘再研必备知识

1.目的基因的筛选与获取

［认知觉醒］利用PCR技术获取和扩增目的基因是基因工程中获取R的基因的

重要方法之一，其每个循环的过程如下图所示。

一

5，

W产353

V,3y=三

三

，r3

5三

彳5

Ir15,伸

三3

三=

物

小

F延

三=

性

⑶三=

三

口-

三=

53r

三=

幽

弓3:

三

5三=

」555S535

3r>.

(1)PCR技术的原理是________________________________________________,

⑵变性时，需要将温度升高到℃以上，目的是破坏模板DNA分子之间

的，使模板双链DNA解聚成o

(3)复性时，温度下降到℃左右，目的是让通过碱基互补配

对与两条单链DNA结合。

(4)延伸时，需要将温度上升到℃左右，溶液中的4种脱氧核甘酸在

酶的作用卜，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。

提示(l)DNA半保留复制(2)90氢键单链

(3)50两种引物(4)72耐高温的DNA聚合

［深度思考］⑴在PCR过程中实际加入的原料为dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、

dCTP),其有何作用？

提示既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。

(2)为扩增目的基因，应选择下图所示引物中的

弓网II3,

目的基闪I

3，-，~，S'

,引物II引物IV'

提示引物1【和引物川

(3)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱

基序歹|J)都不合理(如图)，请分别说明理由。

引物I

第1组引物CAGGCT

引物【I

AGCCTG

引物I'

笫2组引物AACTGCAGTT

引物『

CGACTGATTA

①第1组:

②第2组：。

提示引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效引物I'自身折叠后会出

现局部碱基互补配对而失效

（4）若一个DNA分子在PCR中经过〃轮循环，理论上需要消耗多少个引物？第〃

轮循环需要消耗多少个引物数？

提示经过〃轮循环需要消耗引物数为（2内一2）个，第〃轮循环需要消耗的引物

数为2〃个。

思维升华体内DNA复制与PCR技术的比较

PCR技术体内DNA复制

原则碱基互补配对

相

DNA母链作为模板、弓1物（体内弓1物RNA、体外引物DNA）、4

同条件

种脱氧核井酸为原料

点

延伸方向新链都是从5,端向3'端延伸

解旋方式90℃以上高温解旋解旋酶催化

场所PCR扩增仪主要在细胞核

延伸用酶耐高温的DNA聚合酶DNA聚合酶

不

温度控制温度、需要在不同温度下进行细胞内温和条件

同

点5

过程r>41111

’3，；：w,

结果大量的DNA片段（或目的基因）形成完整的子代DNA

2.基因表达载体的构建——核心

［认知觉醒I构建基因表达载体

是基因工程的核心工作。如图表示基因表达载体的一般构成，请回答问题:

⑴构建基因表达载体的目的是什么？

提示使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时使目的基因

能够表达和发挥作用。

(2)启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的游，紧挨转

录的起始位点，它是_________________识别和结合的部位。

提示上RNA聚合解

(3)构建因表达载体的过程分为酶切和连接两个步骤。下图为构建基因表达载体时

所用的载体及目的基因所在DNA片段上限制酶的识别切割位点情况。

Sp?I5,-ACTAGT-3,

&oRl5—G入ATTC-3'

BamttI5'-G%ATCC-3'&oRl

/BamHI

BN115J《GATCT-3'后

HindIII5'-A'AGCTT-3'(uni

、终止子

IEioRI0g/11

5Tii―r星制i

?一t目的基因t[5,原点、

标记法因

SueISpeIHindIII

①构建基因表达载体时(“能”或“不能”EcoRI,原因是

提示不能反。RI会破坏目的基因

②选择SpcI进行单酶切构建基因表达载体时，容易出现目的基因和载体的自身

环化，以及目的基因的反向链接，导致目的基因转录时出现错误，无法

表达正常的蛋白质。

提示模板链

③选择BamHI与Bg/H进行双酶切构建基因表达载体时，能否避免单酶切时出现

的目的基因和载体的自身环化，以及目的基因的反向链接？为什么？

提示不能，因为及7HI与虽然识别序列不同，但是切割后产生的黏性末

端相同。

④选择BamWI与dill进行双酶切构建基因表达载体时，能否避免单酶切时出

现的目的基因和载体的自身环化，以及目的基因的反向链接？为什么？

提示能，因为8刖汨1与”泳1IH切割后产生的黏性末端不同。

思维升华关于同尾酶及切割连接

不同种限制性内切核酸酶识别序列各不相同，但切割后能产生相同的黏性末端，

则称为同尾酶。如HI、BelIBglll、Sau3AI、X/wII为一组同尾酶，它

们的识别序列和切割位点依次分别是5'—G\GATCC—3'、5'—TIGATCA-3'、

5'-AIGATCT—3'、5'—IGATC-3'、5'—RIGATCY-3',它们切割DNA后

都形成由GATC组成的黏性末端。

由同尾酶酶切产生的DNA片段，能够通过黏性末端的互补作用而彼此连接起来。

一般情况下，同尾酶产生的黏性末端连接后不能再被原来的限制酶切割，这是因

为同尾酶产生的黏性末端连接后原来的酶切位点将不复存在，故不能被原来的限

制酶切割，但可以被识别序列短的限制酶切割，如被上述Saw3Al识别并切割。

3.将目的基因导入受体细胞

［认知觉醒］将构建好的基因表达载体导入不同受体细胞，往往采取不同的方

法。

（1）将基因表达载体导入植物细胞，常常采用法或法。

⑵将基因表达载体导入动物细胞，受体细胞通常是动物,一般采用

____________法。

（3）将基因表达载体导入原核细胞时，应用最为广泛的受体细胞是____________,

一-般先用处理受体细胞，使其处于一种

的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。

提示（1）花粉管通道农杆菌转化（2）受精卵显微注射（3）大肠杆菌Ca2h

能吸收周围环境中DNA分子

•名师解读，

（1）农杆菌特点

①能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染

能力。

②农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能二符Ti质粒上的T-DNA转

移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。

⑵农杆菌转化法中的两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的

T-DNA上，第二次拼接（非人工操作）是指插入目的基因的T-DNA拼接到受体细

胞的染色体DNA上；两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒导入农杆

菌，第二次导入（非人工操作）是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。

（3）导入的目的基因，可能存在于细胞质中，也可能整合到染色体DNA上。存在

于染色体DNA上的目的基因有可能通过花粉传播进入杂草或其他作物中，造成

“基因污染”。

4.目的基因的检测与鉴定

［认知觉醒］目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，还

需要进行检测与鉴定。

（1）分子水平的检测，通常借助等技术，检测受体染色体DNA上是否插

入目的基因或目的基因是否;

从转基囚生物体

内提取出相关蛋白质，用相应的抗体进行,检测目的基因

是否翻译出相应的蛋白质。

⑵水平的鉴定，通过抗虫、抗病接种实验，检测转基因生物是

否赋予了相关的遗传特性以及这种特性的程度。

提示（l）PCR转录出mRNA抗原一抗体杂交

（2）个体生物学

关键能力,提升深研典型例题

题型基因工程的基本步骤（科学思维）

［例1］（2023・湖北卷，4）用氨节青霉素抗性基因（A〃!〃R）、四环素抗性基因（左产）作为

标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶

切后的质粒，构建基区表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误

的是（）

HindIH

Ptu1“SphT

SeaI

A.若用“加dHI酶切，目的基因转录的产物可能不同

B.若用Gul能切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因

C.若用SphI酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否

D.若用SphI酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨平青霉素）和Tet的培养基

中能形成菌落

答案D

解析若用〃山din酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，转录的产物

可能不同，A正确；若用PmI酶切，重组质粒和质粒中都有四环素抗性基因（我产）,

因此在含Tet(四环素)培养基中的菌落，不一定含有目的基因，B正确；DNA凝

胶电泳技术可以分离不同大小的DNA片段，重组质粒的大小与质粒不同，能够

鉴定重组质粒构建成功与否，C正确；S/MI的酶切位点位于四环素抗性基因中，

若用5〃〃【酶切，会破坏四环素抗性基因，重组质粒中含氨苦青霉素抗性基因

(A〃?pR),因此携带目的基因的受体菌在含Amp(氨羊青霉素)的培养基中能形成菌

落，在含Tet的培养基中不能形成菌落，D错误。

[例2](2024・江苏卷，23)为了高效纯化超氧化物歧化酶(SOD),科研人员将ELP50

片段插入pET-SOD构建重组质粒pET-SOD-ELP50,以融合表达SOD-ELPso

蛋白，过程如图1。其中，ELPso是由人工合成的DNA片段，序列为：限制酶a

识别序列一(GTTCCTGGTGTTGGC)5o一限制酶b识别序歹ij,50为重复次数。请

回答下列问题：

⑴步骤①双酶切时，需使用的限制酶a和限制酶b分别是

(2)步骤②转化时，科研人员常用处理大杨杆菌，使细胞处于感受态，转

化后的大肠杆菌采用含有的培养基进行筛选。用PCR技术筛选成功导入

pET—SOD—ELP50的大肠杆菌，应选用的一对引物是o

⑶步骤③大肠杆菌中RNA聚合酶与结合，驱动转录，翻译SOD-ELP50

蛋白。已知蛋白质中氨基酸残基的平均相对分子质量约为0.11kDa,将表达的蛋

白先进行凝胶电泳，然后用SOD抗体进行杂交，显示的条带应是_______(从图

2的“A〜D”中选填)。

(4)步骤④为探寻高效纯化SOD-ELP50蛋白的方法，科研人员研究了温度、NaCl

对SOD-ELPso蛋白纯化效果的影响，部分结果如图3。

不力IINaCI力口NaCI不加NaCI川NaCl

20tloot

图3

①20℃时，加入NaCl后实验结果是_______________

②100℃时，导致各组中所有蛋白都沉淀的原因是0

③据图分析，融合表达S0D-ELP5。蛋白的优点有

_____________________________________________________________________0

答案⑴氏oRI、HindlW

⑵CaCb卡那霉素S-F和E-R

(3)启动子C

(4)①SOD-ELP$o组纯化蛋白含量比SOD组高②高温使蛋白变性，离心后沉淀

③纯化回收率高、杂蛋白少、低温下纯化有利于酶活性的保持

解析(1)目的基因应插入启动子和终止子之间，结合题意可知，ELP50应插入pET

一SOD之后，由图可知，限制酶a和限制酶b分别是EcoRI、H山dill。(2)步骤

②转化时常用CaCb处理细菌，使细胞处于感受态。由图可知，重组DNA含有标

记基因卡那霉素抗性基因，所以转化后的大肠杆菌采用含有卡那霉素的培养基进

行筛选。pET-SOD-ELPso的大肠杆菌同时含有SOD和ELPso,结合图示可知，

选用引物S-F和E-R可特异性对SOD-ELPso进行扩增。(3)RNA聚合酶与启

动子结合后，驱动转录。由图1可知，ELPso中一(GTTCCTGGTGTTGGC)50一转

录出的RNA对应5X50=250(个)密码子，ELPso为750bp,SOD为462bp,同理

可以算出SOD转录出的RNA对应154个密码子，则pET—SOD—ELPso转录出

的RNA对应404个密码子，即对应404个氨基酸，其脱水缩合形成的蛋白质质

量为404X0.U=44.44（kDa）,电泳后应该为条带C。（4）①由图3可知，20℃时，

加入NaCl后，SOD—ELPso组较SOD组纯化蛋白数量更多。②100C时，温度过

高，导致蛋白质变性而沉淀。③20℃,加入NaCl时，与SOD组相比，SOD—ELPso

组沉淀中蛋白质相对含量较高，说明低温下添加Na。有利于SOD蛋白纯化，且

杂蛋白较少，有利于酶活性的保持。

■关键•真题必刷

1.（2023・重庆卷，12）某小组通过PCR（假设引物长度为8个碱基，短于实际长度）

获得了含有目的基因的DNA片段，并用限制酶进行酶切（如下图），再用所得片段

成功构建了基因表达载体。下列叙述错误的是（）

限制酶S/,eI5'-ACTAGT-3'

识别序列3'-TGATCA-5'

Niu-I5'-GCTAGC-3'QbI5'-GCGC-3'

3,-CGATCG-5,：r-CGCG-5'

扩增茯得

S^AGCTAGCAATGCTC……ATGAACTGCGCA-3,

的

DNA：r-TCGATCGTTACGAG……TACTTGACGCGT-S,

片段①刖力

5r-CTAGCAATGCTC....ATGAACTGCG-B*

rr-GTTACGAG.......TACTTGAC-5*

A.实验所用引物，其中一个序列为5-TGCGCAGT-3,

B.步骤①所用酶是SpeI和C狗I

C.用步骤①的酶对载体进行酶切至少获得了2个片段

D.酶切片段和载体连接时可使用E.coliDNA连接酶或T4DNA连接酶

答案B

解析根据扩增所得DNA片段可知，实验所用的两种引物序列为5，一

TGCGCAGT-3,和5，-AGCTAGCA—31A正确；根据酶切后得到的黏性末端判

断，步骤①所用酶是人力el和依I,B错误；步骤①用两种酶切割载体（质粒）,

质粒上至少有两个切口，至少产生2个片段，C正确；目的基因片段和质粒经酶

切后产生的均为黏性末端，可用£co"DNA连接酶或T4DNA连接酶连接，D正

确。

2.（2024・重庆卷，19）大豆是重要的粮油作物，提高大豆产量是我国农业领域的重

要任务。我国研究人员发现，基因S在大豆品种DN（种子较大）中的表达量高于品

种TL（种子较小），然后克隆了该基因（两品种中基因S序列无差异）及其上游的启

动子序列，并开展相关研究。

①表达载体

限制酶识别位点(“加dill,SpeI,EcoRI,XbaI)

②启动子D+基因S

5c.......TAGAATTCCA.......3，

3'.......ATCTTAAGGT.......5'

③四种限制酶识别序列及切割位点

叫di"S罕IEcoRIXba\

5JAAGCTT-3'5=ACTAGT-3'5'-GAATTC-3'5-TCTAGA-3f

3JTTCGAA-5'3JTGATCA-5'3-CTTAAG-5f3'-AGATCT-5'

Itt♦

注：箭头表示酶的切割位置。

(1)基因S启动子的基本组成单位是________0

⑵通过基因工程方法，将DN克隆的“启动子D+基因S”序列导入无基因S的

优质大豆品种YZo根据题图所示信息(不考虑未标明序列)判断构建重组表达载体

时，为保证目标序列的完整性，不宜使用的限制酶是；此外，不宜同时

选用酶SpeI和XbaI,原因是_______________________________________

(3)为验证“启动子D+基因S”是否连接在表达载体上，可用限制酶对重组表达

载体酶切后进行电泳。电泳时，对照样品除指示分子大小的标准参照物外，还应

有o经验证的重组表达载体需转入农杆菌，检测转入是否

成功的技术是_______o

(4)用检测后的农杆菌转化品种YZ所得再生植株YZ-1的种子变大。同时将从

TL克隆的“启动子T+基因S”序列成功导入YZ,所得再生植株YZ-2的种子

也变大，但小于YZ-U综合分析，大豆品种DN较TL种子大的原因是

答案(1)脱氧核糖核甘酸(脱氧核甘酸)(2)EcoRI酶切后形成的片段黏性末

端相同，易自我环化；不能保证目标片段与载体定向连接（或反向连接）（3）酶切

后的空载体片段、“启动子D+基因S”片段PCR（4）品种DN的基因S上游

启动子效应比TL强，使得基因S表达量更高，种子更大

解析（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，用于启动基因的转录，是一

段有特殊结构序列的DNA片段，其基本组成单位是脱氧核糖核普酸。（2）根据图

示信息可知，“启动子D+基因S”的DNA序列上存在EcoRi的识别序列，若

使用限制酶EcoRI，会使目的基因序列被破坏；根据图中限制酶的识别序列可知，

酶SpeI和XMI切割产生的黏性末端相同，若用这两种限制酶切割，形成的DNA

片段在构建基因表达载体时，容易出现自我环化，以及无法保证目的基因片段与

载体片段定向连接，影响目的基因在受体细胞中的表达。（3）DNA电泳可以分离

不同大小的DNA片段，用限制酶对重组表达载体酶切后的产物不仅有“启动子

D+基因S”片段，还有酶切后的空载体片段，因此电泳时，对照样品除指示分

子大小的标准参照物外，还应有酶切后的空载体片段和“启动子D+基因S”片

段；在分子水平上检测目的基因是否转入成功可通过PCR等技术检测受体细胞的

DNA上是否插入目的基因或目的基因是否转录出mRNAo（4）根据题目（4）信息可

知，再生植株YZ—1导入的目的基因为取自品种DN的“启动子D+基因S”序

列，再生植株YZ—2导入的目的基因为取自品种TL的“启动子T+基因S”序

列，结合题干信息“两品种中基因S序列无差异”可推测：品种DN的基因S上

游的启动子D的效应强于品种TL的启动子T,启动子D使基因S表达量更高，

因而种子更大。

限时练51基因工程的基本工具和操作程序

（时间:40分钟）

一、选择题

1.（2025・湖北襄阳四中联考）大肠杆菌puC118质粒是基因工程中常用的一种载体，

具有氨芳青霉素抗性基因，该质粒中某限制酶的唯一切点位于LacZ基因中。在

特定的选择培养基中，若。cZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若LacZ

基因被破坏，则菌落呈白色。关于图中操作的叙述正确的是（）

氨节青

试管3

基因

目的

因T

基

猫

用

◎

卜

霉素抗&

性基因

菌）

基细

培养

选择

试管2

试管1

接酶

A连

和DN

制酶

入限

应加

管1中

A.试

肠杆菌

理大

?'处

用Ca

，需

杆菌

大肠

导入

质粒

重组

中将

管2

B.试

现白色

落均呈