2025 年高职动植物组织和细胞培养技术（细胞冻存）技能试卷

2025年高职动植物组织和细胞培养技术（细胞冻存）技能试卷

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______一、单项选择题（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填入括号内）1.细胞冻存时，常用的保护剂是（）A.酒精B.甘油C.甲醛D.丙酮2.以下关于细胞冻存的温度，正确的是（）A.-20℃B.-40℃C.-80℃D.-196℃3.细胞冻存时，一般采用的降温速率是（）A.快速降温B.缓慢降温C.先快后慢D.先慢后快4.细胞冻存管的正确标记不包括以下哪项（）A.细胞名称B.冻存日期C.操作人员D.培养基种类5.用于细胞冻存的血清应（）A.新鲜血清B.陈旧血清C.灭活血清D.未灭活血清6.细胞冻存前，需要对细胞进行（）A.传代B.计数C.固定D.染色7.以下哪种细胞冻存效果较好（）A.对数生长期细胞B.静止期细胞C.衰老细胞D.死亡细胞8.细胞冻存时，冻存液的体积一般为细胞悬液体积的（）A.1/2B.1/3C.1/4D.1/59.细胞冻存后复苏时，应采用（）A.快速解冻B.缓慢解冻C.先快后慢解冻D.先慢后快解冻10.细胞冻存过程中，防止冰晶形成的关键是（）A.保护剂的使用B.降温速率C.冻存管的质量D.细胞密度二、多项选择题（总共5题，每题5分，每题有两个或两个以上正确答案，请将正确答案填入括号内，多选、少选、错选均不得分）1.细胞冻存的正确操作包括（）A.配制冻存液B.收集细胞C.加入冻存液D.密封冻存管E.直接放入液氮2.以下属于细胞冻存保护剂的有（）A.DMSOB.蔗糖C.海藻糖D.NaClE.KCl3.细胞冻存时，影响细胞活力的因素有（）A.保护剂种类B.降温速率C.细胞密度D.冻存时间E.复苏方法4.细胞冻存管的选择要求有（）A.密封性好B.耐低温C.透明度高D.材质无毒E.容量大5.细胞冻存记录应包含（）A.细胞名称B.冻存日期C.冻存管编号D.操作人员E.细胞状态三、判断题（总共10题，每题2分，判断下列说法是否正确，正确的打“√”，错误的打“×”）1.细胞冻存时可以不用保护剂。（）2.细胞冻存的温度越低越好。（）3.细胞冻存前不需要对细胞进行处理。（）4.冻存液中保护剂的浓度越高越好。（）5.细胞冻存管可以反复使用。（）6.细胞冻存后复苏的细胞活力与冻存时的操作无关。（）7.不同类型的细胞冻存条件相同。（）8.细胞冻存时，细胞悬液应充分混匀后再加入冻存液。（）9.细胞冻存记录可有可无。（）10.细胞冻存后可以长期保存而不影响细胞活性。（）四、简答题（总共3题，每题10分，请简要回答以下问题）1.简述细胞冻存的基本原理。2.说明细胞冻存过程中保护剂的作用。3.细胞冻存复苏后，如何判断细胞活力？五、综合分析题（总共2题，每题15分，请结合所学知识分析以下问题）1.某实验室在细胞冻存过程中，发现部分细胞复苏后活力不佳，请分析可能的原因并提出改进措施。2.现有一批新的细胞需要冻存，设计一个完整的细胞冻存方案。答案：一、单项选择题1.B2.D3.C4.D5.C6.B7.A8.B9.A10.B二、多项选择题1.ABCD2.ABC3.ABCDE4.ABD5.ABCDE三、判断题1.×2.×3.×4.×5.×6.×7.×8.√9.×10.×四、简答题1.细胞冻存的基本原理是在缓慢降温的条件下，使细胞内的水分渗出，减少细胞内冰晶的形成，从而避免冰晶对细胞造成机械损伤，同时利用保护剂降低细胞内溶液的冰点，进一步减轻冰晶的损害，在超低温环境下长期保存细胞。2.保护剂在细胞冻存过程中的作用主要是降低细胞内溶液的冰点，减少冰晶形成；同时可以提高细胞对冷冻损伤的耐受性，如DMSO等保护剂能够穿透细胞膜，改变细胞内的渗透压，防止细胞脱水皱缩，保护细胞免受冷冻损伤。3.可以通过观察细胞形态，如复苏后的细胞是否贴壁、伸展良好；检测细胞活性，如采用台盼蓝染色法，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色，计算活细胞比例；还可以检测细胞的代谢活性，如通过MTT法检测细胞内线粒体的活性等方式来判断细胞活力。五、综合分析题1.可能原因：保护剂选择不当或浓度不合适；降温速率过快；细胞冻存前状态不佳，如传代次数过多或过少、细胞密度不合适等；冻存管密封性不好；冻存记录不准确或不完整，无法追溯冻存条件。改进措施：重新评估保护剂，选择合适种类和浓度；优化降温程序，采用程序降温盒等确保缓慢降温；确保细胞冻存前处于良好状态，合适的传代次数和细胞密度；检查冻存管密封性，更换有问题的冻存管；完善冻存记录，详细记录冻存全过程。2.细胞冻存方案：准备工作：选择合适的细胞，准备好冻存液（如含10%DMSO的血清培养基）、冻存管、标记笔等。收集细胞：将细胞培养至对数生长期，进行细胞计数，确保细胞密度合适。配制冻存液：按照比例配制冻存液。加入冻存液：将细胞悬液与冻