实验二：超声波提取香菇多糖课件

实验二：超声波提取香菇多糖模块1-2超声波提取香菇多糖提取情景视野拓展视野拓展实验二：超声波提取香菇多糖超声波提取技术

超声波提取技术是近年来应用到中草药有效成份提取分离的一种最新的较为成熟的手段提取情景实验二：超声波提取香菇多糖超声波提取技术超声波在溶剂和样品之间产生声波空化作用，使固体样品分散，增大样品与萃取溶剂之间的接触面积，提高目标物从固相转移到液相的传质速率。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖超声波提取的原理

超声波在物质介质中的相互作用效应可分为热效应、空化效应和机械传质效应。超声波的热效应、机械传质作用及空化作用成为超声技术在提取应用中的三大理论依据。1超声波的热效应

2超声波的机械效应

3超声波的空化效应

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖超声波提取的特点

适用于中药材有效成份的萃取，彻底改变传统的水煮醇提萃取方法的新方法，与常规提取工艺相比，超声波提取具有如下突出特点：

无需高温，超声波在40～70ºC工作效率非常高，而温度在65ºC度内天然产物有效成份基本没有受到破坏。

萃取效率高，超声波强化萃取20～40分钟即可获最佳提取率，萃取时间仅为传统方法的1/3或更少。提取3次，基本上可提取有效成份的90%以上。

常压萃取，安全性好，操作简单易行，维护保养方便具有广谱性。适用性广，绝大多数的中药材各类成份均可超声萃取。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质（如极性）关系不大。因此，可供选择的萃取溶剂种类多、目标萃取物范围广泛。

减少能耗，由于超声萃取无需加热或加热温度低，萃取时间短，因此大大降低能耗。

药材原料处理量大，成倍或数倍提高，且杂质少，有效成分易于分离、净化。

萃取工艺成本低，综合经济效益显著

超声波具有一定的杀菌作用，保证萃取液不易变质。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖真菌多糖生产技术提取情景多糖来源大致分为植物来源多糖、动物来源多糖、海藻来源多糖和微生物来源多糖

即细菌产生的多糖和真菌产生的多糖。实验二：超声波提取香菇多糖真菌多糖生产技术多糖的种类繁多，不同种多糖其提取分离方法各不相同。一般按多糖的性质采取热水提取法、中性盐溶液提取法、碱提取法、水解酶消化提取法，蛋白酶水解法，近年来兴起超声提取研究热点。生产订单：香菇多糖500kg，产品规格：LNT>10%，水分<9%，灰分<4%，国标检测；价格：￥400元/Kg。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖三、超声波法提取香菇多糖材料准备操作流程记录要点超声波法提取香菇多糖关键技术教师讲解提取情景实验二：超声波提取香菇多糖材料准备

干香菇，蒸馏水；电热恒温鼓风干燥箱组织粉碎机圆底烧瓶，铁架台，温度计超声波发生器（带加热功能）真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等提取情景实验二：超声波提取香菇多糖操作流程香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用提取情景实验二：超声波提取香菇多糖提取情景实验二：超声波提取香菇多糖多糖提取液中蛋白质的脱去方法

天然多糖提取后，往往提取液中含有大量杂物，其中蛋白质所占份额较大，必须首先去除，常用方法有Sevag法、三氯乙酸法、氯化钠法、氯化钙法、盐酸法、木瓜蛋白酶法以及两种方法之间的联合方法。实验研究时常以糖保留率和蛋白去除率为观测指标，各种参数因糖的来源不同需要适当调整。教师讲解提取情景实验二：超声波提取香菇多糖Sevag法1利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，向香菇多糖浓缩液中加入其体积1/4的氯仿和1/20的正丁醇，在分液漏斗中振荡20min，静置分层，将下层的氯仿和正丁醇放出，取上清液重复以上操作2次，得脱蛋白多糖液。三氯乙酸法

2多糖溶液加入1/5体积10％的三氯乙酸溶液，磁力搅拌30min，离心去除沉淀物，用3倍体积的95％的乙醇沉淀，5000r/min离心15min，沉淀加原来多糖溶液体积的1/5水溶解，加入1/5体积10％三氯乙酸溶液，重复处理3次，得脱蛋白多糖液。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖鞣酸沉淀法

3在微沸状态下，向多糖溶液中滴加1％的鞣酸溶液，直至无沉淀产生，5000r/min离心15min，离心取上清液，再滴加1％的鞣酸溶液，直至无沉淀产生为止。离心取上清液，透析，浓缩，得脱蛋白多糖液。盐酸法4多糖溶液用2mol/L盐酸调节其pH=3，放置过夜，在5000r/min条件下离心15min，弃去沉淀，得脱蛋白多糖液。氯化钠法

5在沸腾状态下，将多糖浓缩液的pH值调至9～10，加入氯化钠使浓度达5%(w/v)，搅拌，煮沸30min，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖低温酸碱法6将多糖水浸提液的温度降至4℃，然后加入有机酸，调整料液的酸碱度pH值为3.5-4.6，混均，再此4℃温度下作用1.5小时，5000r/min离心15min，离心取上清液，再用NaOH调整pH值为7.0，再将料液浓缩，得脱蛋白多糖液。木瓜蛋白酶法7取10mg/mL多糖溶液100mL，加入0.01g木瓜蛋白酶，在pH6.4条件下，于60℃酶解2h，沸水浴5min灭酶，冷却后，5000r/min离心去变性酶沉淀。滤液浓缩至33mL左右，加95%乙醇100mL，沉淀24h后离心，弃上层清液，醇沉物水溶，得脱蛋白多糖液。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖氯化钙法

8将多糖浓缩液的pH值调至8～9，加热至85℃，加入氯化钙使浓度达5%(w/v)，搅拌，冷却，过滤，得脱蛋白多糖液。酶法-Sevag联合法9多糖溶液中加入1%的木瓜蛋白酶(w/w多糖量)，在pH6.4条件下，于60℃酶解2h，5000r/min离心20min，取上清液，再采用上述Sevag法脱蛋白。

三氯乙酸-Sevag联合法

10多糖溶液中加入一定体积三氯乙酸，使其终浓度为0.5%，混匀后于4℃冰箱静置过夜，次日5000r/min离心15min，取上清液，再采用上述Sevag法脱蛋白。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖水溶性多糖与酯溶性多糖区别，以及存在原料举例？香菇多糖的主要成分是什么，如何脱蛋白？如何将实验室的提取装置与企业生产相衔接？提取情景课后问题讨论实验二：超声波提取香菇多糖视野拓展

实训操作是理论联系实际的重要环节，是衡量实训效果的重要依据。实训报告必须在科学实训的基础上进行，撰写应该体现完整性、规范性、正确性、有效性。

报告的结构实训报告汇报注意事项

如何撰写实训任务完成汇报提取情景实验二：超声波提取香菇多糖报告的结构1）题目及署名强调实训题目，要求用一句话点明所要研究问题，可以对实训指导书上的题目进行修改。题目下面署上操作者姓名、班级和专业，以示文责自负。2）前言要求学生通过查阅相关资料和文献写出此次实训验的背景、目的和意义，以及要解决的问题。明确实训关键操作技能，文字力求简明扼要，只要说明问题即行，不必多加铺叙。3）材料及方法要求学生掌握相关实训材料的配制方法和预处理技术。简明扼要地写出实验技术流程路线，既尊重实训指导内容，又参考自己查阅的相关文献作相应的修改，力求达到最佳的实训目的与实验成果。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖4）结果与分析

按照上述的实验技术流程图路线，得出的实验结果，力求做到有理有据，准确可靠。并且，通过查阅资料对自己的实验结果加以分析（即使实验失败，也要说明失败原因，为下次实验总结经验教训），在对实验结果进行分析后，还有必要进行更为深人的讨论，如对实验结果的理论分析，对操作方法的科学性与局限性，实验结果的可靠程度与适用范围等等作进一步阐述，同时，大胆地提出对实验的改进意见和质疑等。另外，可以对实训课的组织与安排提出建议，以便老师在同类实训教学中改进。5）致谢致谢对象应是对整个实训操作过程有实质性帮助的人，主要是实训合作伙伴，以及实训教辅人员，并应写出被致谢者。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖6）参考文献任何科学研究活动都是在前人研究的基础上前进和发展的，在进行实训的过程中，应该广泛地阅读文献资料，参考已有的成果，只有这样才能减少不必要的重复劳动，取得有价值的成果和突破。但是，也应该尊重别人的劳动，凡是引用了他人的材料或研究成果，都必须加以说明，注明出处，要求学生每个实训至少参考四篇以上参考文献。7）附录附录是指内容太多、篇幅太长而不便于写入报告但又必须向读者交代的一些重要材料。主要包括本实训的原始记录、药品的配制方法和有关仪器设备的使用方法。原始记录要求学生在实验操作过程中，详细而实事求是地记录实验技术路线，有关溶液的配制方法、实验数据、标准曲线的制作、实验条件。药品的配制方法要求学生详细记录所称量药品的质量、体积、溶剂溶解方式、溶液的总体积以及试剂的贮存方式等。对于仪器设备的使用方法，要求学生写清楚首次使用的仪器设备的名称、型号、使用环境、仪器原理、使用方法等。提取情景实验二：超声波提取香菇多糖汇报注意事项

1）可读性

为了便于传播和交流，报告的表述应具有可读性。语言阐述必须精确、通俗，在不损害规范性的前提下，尽可能使用简洁的语言。专门的名词术语，可以用，但不能故弄玄虚。文字切忌带个人色彩。一般不采用比喻、拟人、夸张等修辞手法；不可把日常概念当作科学概念，不宜采用工作经验总结式的文字。2）操作路线流程图实训时操作路线一般最好以流程图的形式进行书写，这样在操作时看起来比较方便，一般文字不要太详细，但也不能过于笼统，让别人无法“照方抓药”，但关键点最好越详细越好。

提取情景实验二：超声波提取香菇多糖通常实训流程图可以参考下面格式：姜辣素产品工艺根据不同的用途，姜辣素的生产工艺略有不同，但总的路线如下：

提取液处理（低压浓缩回收乙醇，水稀释浓缩物，低温静置待分层，取下层沉淀浸膏，用β-CD包络）提取前处理（生姜净洗、去皮、切片、烘干）挥发油去除（4倍体积水（ml/g）浸泡，沸水蒸煮60min,过滤、离心）姜辣素提取〔滤渣用8倍体积（ml/g）50%乙醇60℃回流浸提120min，过滤〕姜辣素提取〔滤渣用6倍体积（ml/g）50%乙醇60℃回流浸提120min,过滤，滤液离心、合并提取液〕喷雾干燥按照产品规格，用水处理时制备的姜淀粉和离心液调整姜辣素含量提取情景实验二：超声波提取香菇多糖3)讨论或建议分析讨论要不夸大，不缩小；敢于坚持真理，不为权威或舆论所左右；在下结论时要注意前提和条件，不要绝对化，更不要以偏概全，把局部经验说成是普遍规律。依据正文的科学分析