2025年微生物学微生物培养与鉴定技能考核试卷及答案解析

2025年微生物学微生物培养与鉴定技能考核及答案解析一、单项选择题（每题1分，共30分）1.在血琼脂平板上出现β溶血、菌落呈灰白色、直径1～2mm、触酶阴性的革兰阳性球菌，最可能的鉴定步骤是A.直接报告为A群链球菌B.做杆菌肽敏感试验C.做CAMP试验D.做Optochin敏感试验答案：B解析：β溶血、触酶阴性的革兰阳性球菌首先考虑化脓链球菌，杆菌肽敏感试验阳性即可初步报告。2.怀疑厌氧菌感染，采集标本后最佳运送方式是A.注入需氧转运管B.注入含半胱氨酸的厌氧转运管并立即送检C.直接冷藏于4℃D.注入含枸橼酸钠的普通试管答案：B解析：厌氧菌对氧敏感，需专用厌氧转运管并尽快培养。3.麦康凯琼脂上形成无色透明菌落、氧化酶阳性、不发酵乳糖、OF葡萄糖产酸不产气的革兰阴性杆菌，下一步应选A.做靛基质试验B.做氧化酶试验（已做）C.做动力试验并接种SS琼脂D.做API20NE答案：D解析：已排除肠杆菌科，需用非发酵菌鉴定系统。4.在沙氏葡萄糖琼脂上25℃培养3天后出现绒毛状菌落，镜检可见45°分枝、有隔菌丝，最可能的真菌属是A.曲霉属B.毛霉属C.青霉属D.念珠菌属答案：A解析：45°分枝、有隔菌丝为曲霉典型特征。5.对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行确认，首选分子靶基因是A.mecAB.blaZC.vanAD.tetM答案：A解析：mecA编码PBP2a，是MRSA的分子标志。6.下列哪种培养基最适合分离百日咳鲍特菌A.鲍-金培养基B.巧克力琼脂C.罗-琴培养基D.庆大霉素血琼脂答案：A解析：鲍-金培养基含马铃薯甘油血液，营养要求高且可抑制杂菌。7.怀疑肠出血性大肠杆菌O157:H7，应选用的选择性培养基是A.SMACB.TCBSC.XLDD.CLED答案：A解析：SMAC（山梨醇麦康凯）可区分不发酵山梨醇的O157:H7。8.对艰难梭菌毒素检测，细胞培养中和试验使用的抗毒素是A.抗毒素A+B混合抗体B.仅抗毒素AC.仅抗毒素BD.抗毒素CDT答案：A解析：需同时中和A、B毒素才能确认细胞病变被完全抑制。9.在液体培养基中呈“汹涌发酵”现象的是A.产气荚膜梭菌B.脆弱拟杆菌C.艰难梭菌D.诺维梭菌答案：A解析：产气荚膜梭菌分解糖产酸产气剧烈，形成汹涌发酵。10.怀疑布鲁菌感染，实验室操作必须在A.生物安全二级+负压罩B.生物安全三级C.生物安全一级D.普通洁净台答案：B解析：布鲁菌为三类病原，需BSL-3防护。11.对肺炎链球菌奥普托欣敏感试验，抑菌圈直径≥mm判为敏感A.6B.9C.14D.20答案：C解析：≥14mm为敏感，<14mm需做胆汁溶菌确认。12.怀疑淋病奈瑟菌，采集宫颈标本后应A.直接冷藏B.接种改良Thayer-Martin平板，5%CO₂35℃C.接种血琼脂并放厌氧袋D.注入肉汤增菌答案：B解析：淋球菌需高营养、高湿、5%CO₂环境。13.下列哪项不是真菌KOH压片镜检的目的A.溶解角质B.清除杂质C.固定真菌结构D.增强折光答案：C解析：KOH仅起溶解与透明作用，无固定效果。14.对ESBLs确证试验，头孢他啶/克拉维酸抑菌圈直径比单药≥mm为阳性A.3B.5C.8D.10答案：B解析：≥5mm差异提示ESBLs。15.怀疑结核分枝杆菌，涂片抗酸染色报告“1+”对应菌量A.1～2条/300视野B.1～9条/100视野C.1～9条/10视野D.1～9条/每视野答案：B解析：WHO分级标准，1+为1～9条/100视野。16.对铜绿假单胞菌进行42℃生长试验，其目的是A.区分荧光与非荧光株B.区分铜绿与恶臭假单胞C.区分产碱与产酸株D.区分黏液型与非黏液型答案：B解析：恶臭假单胞42℃不生长。17.怀疑李斯特菌，应选用A.冷增菌4℃B.45℃热冲击C.6.5%NaCl生长D.以上均可答案：D解析：李斯特菌可冷增菌、耐盐、耐碱。18.对厌氧菌进行药敏，推荐方法是A.纸片扩散法B.E-testC.微量肉汤稀释法D.琼脂稀释法答案：C解析：CLSI推荐微量肉汤稀释法。19.怀疑鼻疽伯克霍尔德菌，实验室操作需A.BSL-2B.BSL-3C.BSL-1D.普通台答案：B解析：鼻疽为二类病原，需BSL-3。20.对VRE确证，应检测A.vanA/vanB基因B.vanC基因C.vanD基因D.vanE基因答案：A解析：vanA/B为临床重要耐药基因。21.怀疑霍乱弧菌，TCBS上菌落颜色为A.黄色B.绿色C.蓝绿D.无色答案：A解析：霍乱弧菌发酵蔗糖产酸使指示剂变黄。22.对支原体培养，培养基需添加A.胆固醇与酵母透析液B.血清与淀粉C.血液与万古霉素D.氯化血红素与维生素K答案：A解析：支原体需固醇及辅酶。23.怀疑军团菌，培养基需A.BCYE-αB.巧克力C.麦康凯D.CLED答案：A解析：BCYE-α含L-半胱氨酸与铁，为军团菌生长必需。24.对白色念珠菌进行厚膜孢子试验，培养基为A.玉米吐温80琼脂B.沙氏琼脂C.血琼脂D.巧克力答案：A解析：玉米吐温80可诱导厚膜孢子。25.怀疑鼠疫耶尔森菌，标本采集后需A.室温放置B.4℃冷藏C.立即床旁接种D.冷冻-70℃答案：C解析：鼠疫菌易自溶，需床旁接种。26.对产碳青霉烯酶肠杆菌，首选表型确证试验A.CarbaNPB.ESBL双纸片C.头孢西丁纸片D.高浓度庆大答案：A解析：CarbaNP可快速检测碳青霉烯酶。27.怀疑放线菌，镜检可见A.硫磺颗粒B.芽生孢子C.荚膜D.端生鞭毛答案：A解析：放线菌形成典型硫磺颗粒。28.对诺卡菌进行弱抗酸染色，脱色剂为A.1%硫酸B.3%盐酸乙醇C.95%乙醇D.2%氢氧化钠答案：A解析：诺卡菌弱抗酸，1%硫酸即可脱色。29.怀疑巴尔通体，培养需A.5%CO₂35℃B.28℃长时间C.35℃烛缸D.细胞共培养答案：D解析：巴尔通体为苛养菌，需细胞共培养。30.对B群链球菌筛查，选用A.含庆大霉素血琼脂B.含萘啶酸血琼脂C.含叠氮钠血琼脂D.含萘啶酸和结晶紫选择性肉汤答案：D解析：Lim肉汤含萘啶酸与结晶紫可抑制杂菌。二、配伍题（每空1分，共20分）A.鲍-金培养基B.罗-琴培养基C.庆大霉素血琼脂D.改良Thayer-MartinE.TCBSF.SMACG.XLDH.CINI.BCYE-αJ.玉米吐温80琼脂31.百日咳鲍特菌——A32.结核分枝杆菌——B33.淋病奈瑟菌——D34.霍乱弧菌——E35.O157:H7——F36.小肠结肠炎耶尔森菌——H37.军团菌——I38.白色念珠菌厚膜孢子——J39.流感嗜血杆菌——C40.志贺菌——G三、填空题（每空1分，共20分）41.厌氧菌培养最常用的指示剂是__________。答案：刃天青42.怀疑厌氧菌感染，标本采集后应在__________小时内送检。答案：0.543.对MRSA进行头孢西丁纸片试验，抑菌圈直径≤__________mm为耐药。答案：2144.真菌血培养推荐使用__________培养瓶以提高检出。答案：双相（或树脂）45.对结核分枝杆菌进行比例法药敏，临界浓度异烟肼为__________μg/mL。答案：0.146.怀疑鼻疽伯克霍尔德菌，氧化酶反应为__________。答案：弱阳性或可变47.对VRE进行琼脂筛选，含万古霉素浓度为__________μg/mL。答案：648.对产气荚膜梭菌进行反向CAMP试验，金黄色葡萄球菌划线位于培养基__________。答案：中央垂直49.怀疑支原体肺炎，采集标本应使用__________拭子以避免抑制。答案：涤纶或植绒50.对诺卡菌进行16SrRNA测序，通用引物为__________。答案：27F/1492R四、判断题（每题1分，共10分，正确打“√”，错误打“×”）51.所有厌氧菌均对甲硝唑敏感。×52.白色念珠菌在血清中37℃3小时可形成芽管。√53.铜绿假单胞菌氧化酶阴性。×54.艰难梭菌毒素A可致细胞圆缩变方。×55.巴尔通体可在血琼脂上28℃培养直接见菌落。×56.李斯特菌在室温下呈周鞭毛运动，37℃失去运动力。√57.霍乱弧菌O1群与O139群均对多黏菌素B敏感。×58.结核分枝杆菌对吡嗪酰胺耐药常由pncA突变引起。√59.诺卡菌为革兰阳性需氧放线菌。√60.鼻疽伯克霍尔德菌与类鼻疽伯克霍尔德菌可用glpPCR区分。√五、简答题（每题6分，共30分）61.简述从脓液标本中分离MRSA的完整流程。答案：1.采集：床旁无菌抽吸脓液注入含SPS的无菌容器；2.接种：立即划种血琼脂与含4%NaCl的甘露醇盐琼脂；3.培养：35℃18–24h；4.初筛：选金黄色或白色菌落做革兰染色、触酶、凝固酶；5.确证：头孢西丁纸片（30μg），抑菌圈≤21mm为耐药；6.分子：PCR查mecA；7.药敏：CLSI微量肉汤稀释法报MIC；8.注明MRSA并提示隔离。62.说明真菌血培养阳性后分级报告策略。答案：1.一级（阳性报警当日）：革兰染色结果+镜检照片；2.二级（24h）：转种沙氏、显色琼脂，报菌落形态与显微镜特征；3.三级（48–72h）：MALDI-TOFMS或ITS测序给出种名；4.四级（药敏）：对氟康唑、伏立康唑、两性B、棘白菌素MIC测定；5.五级（临床沟通）：如热带念珠菌提示高毒力，需眼科排查。63.列举三种检测碳青霉烯酶表型试验并比较优缺点。答案：1.CarbaNP：快（2h），成本低，但低浓度菌易假阴；2.改良Hodge试验：灵敏度90%，可检测所有类型，但步骤多、生物安全要求高；3.EDTA协同试验：对金属酶敏感，操作简单，但无法区分KPC与OXA；4.mCIM：CLSI推荐，灵敏度>95%，需过夜；5.分子XpertCarba-R：30min出结果，可分型，但费用高。64.描述艰难梭菌毒素检测“两步法”策略。答案：1.初筛：GDH抗原检测（快、灵敏、便宜）；2.若阳性，立即做毒素A/BEIA或细胞培养中和试验；3.GDH阳性而毒素阴性者，做毒素基因PCR确认；4.仅毒素阳性或PCR阳性者报“产毒艰难梭菌感染”；5.阴性者考虑定植或其他原因腹泻。65.解释为何巴尔通体血培养常需延长incubation时间至21天。答案：巴尔通体为兼性胞内菌，菌量少、生长慢，需血红素或血红素前体，且对万古霉素敏感故需去除血培养瓶中万古霉素；其倍增时间长达18–24h，常规5天系统易漏检；延长incubation至21天并定期盲种可提高检出率至80%以上。六、案例分析题（每题10分，共30分）66.患者，男，58岁，糖尿病足溃疡。床旁接种脓液于血琼脂、麦康凯、厌氧血琼脂。24h后血琼脂见灰白色β溶菌落，革兰阳性球菌、触酶阴性；厌氧血琼脂见相同菌落。问题：1.列出进一步鉴定步骤；2.若显示PYR阳性、6.5%NaCl不生长、CAMP阴性，给出种名；3.药敏发现青霉素MIC0.06μg/mL，应如何报告？答案：1.做PYR、CAMP、6.5%NaCl、胆汁七叶苷、奥普托欣；2.符合无乳链球菌（B群）；3.青霉素MIC≤0.12μg/mL为敏感，报告“B群链球菌，青霉素敏感，首选青霉素G”。67.患者，女，32岁，持续高热、肝脾大，养猫。血培养瓶7天报警，革兰阴性小杆菌，需氧瓶仅一瓶阳性，转种血琼脂无生长，巧克力琼脂35℃5%CO₂亦无生长。问题：1.最可能病原？2.下一步如何处理？3.如何向临床沟通？答案：1.巴尔通体；2.取血培养物做巴尔通体PCR，并送血至参考实验室做细胞共培养；3.报告“血培养革兰阴性小杆菌，考虑巴尔通体，已启动分子检测，建议多西环素+庆大经验治疗并排查猫抓伤史”。68.新生儿，出现脓毒症，母亲产道检出B群链球菌。患儿血培养报阳，转种后见革兰阳性链状球菌，触酶阴性，CAMP阳性。问题：1.写出完整鉴定流程；2.若青霉素MIC0.25μg/mL，是否耐药？3.列出向NICU的感染控制建议。答案：1.做CAMP、PYR、兰斯菲尔德分群、MALDI-TOF、血清胆汁七叶苷；2.青霉素MIC0.25μg/mL仍≤0.12敏感折点，但新生儿需高剂量青霉素或氨苄西林联合庆大；3.立即接触隔离、加强手卫生、同病房新生儿监测血培养、母亲接受产时抗生素。七、技能操作题（共40分）69.请写出“粪便标本艰难梭菌培养+毒素检测”完整SOP（20分）。答案：1.标本拒收：成形便、非无菌容器、超过2h未冷藏；2.接种：取稀便2mL加入等量无水乙醇，室温混匀30min杀灭繁殖体；3.离心：3000g15min，取沉淀接种CCFA（环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂）；4.培养：37℃厌氧48h，观察黄色毛玻璃样菌落；5.鉴定：革兰阳性粗大杆菌、芽孢卵圆形、马尿酸阳性、脯氨酸氨基肽酶阳性；6.毒素：取48h菌落用生理盐水调2McF，煮沸10min裂解菌体，EIA测毒素A/B；7.培养阳性且毒素阳性报“产毒艰难梭菌”；培养阳性毒素阴性报“非产毒株”；8.生物安全：BSL-2，废弃物含氯消毒。70.请设计一个“多耐药鲍曼不动杆菌院内暴发调查”微生物学方案（20分）。答案：1.病例定义：ICU住院>48h、培养检出鲍曼不动杆菌且对碳青霉烯耐药；2.标本：患者肛周、咽、气管插管、静脉导