2023新课标三维人教生物选修1-专题二-课题1-微生物的实验室培养

课题1微生物的试验室培育

二

1.培育基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等养分

物质。

2.消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体

背虽传统有害的微生物，灭菌则是杀夕匕物体内外全部的微

生物，包括芽袍和匏子。

但最实用

3.试验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和运用紫外

线或化学药剂进行消毒,常用的灭菌方法有灼烧

灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。

4.固体培育基的配制过程为：计算一称量一溶

化—**灭菌--倒平板。

5.微生物接种最常用的应是平板划线法和稀释涂

布平板法。

ENBEI6.长期保存菌种可以采纳甘油管藏法。

GUANJIANYLJU

■墟军成矗麻削国I课前自主学习，基稳才能楼高

N基本知识/一读完教材就能做对-

一、培育基

1.概念：人们依据微生物对养殳物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的养分基质。

2.种类；(按物理:性质分)

液体培育基-常用琼脂•固住培育基

3.养分构成：各种培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外还要满意微生物生

长对过1、特别养分物质以及氧气的要求。

二、无菌技术

1.获得纯净培育物的方法

获得纯净培育物的关键是防止外来杂菌的入侵，详细操作如下：

(1)对试验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。

(2)将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等进行灭菌。

(3)为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在酒精灯火焰旁边进行。

(4)试验操作时应避开已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触。

2.消毒和灭菌

(1)概念：［填表］

芽抱和胞子

比较项目理化因素的作用强度歼灭微生物的数量

能否被歼灭

消毒较为温秀物体表面或内部的部分微生物不能

灭菌剧烈物体内外全部的微生物能

(2)常用方法：［连强］

类型||方法||对袋

灼烧灭菌-----------1.接种针(环)

①消毒干热灭菌n.接种室

巴氏消毒、^此培养皿

②灭菌〈\〉d.紫外线牛奶等不耐高温液体

.化学药物(酒精)-----V.操作者双手

.俞压蒸汽灭菌-------VI培养基

三、大肠杆的的纯化培育

1.制备牛肉膏蛋白陈固体培育基

计算一称一一落化一灭菌—倒平板。

2.纯化大肠杆菌

(1)纯化原理：在培育基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌造，这个

菌落就是一个纯化的细菌菌落。

(2)接种方法：

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐

步稀释分散到培育基的表面。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别途

布到琼脂固体培育基的表面，进行培育。

(3)培育：将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入江C恒温箱中，培育，12h

和24h后，分别视察、记录。

四、菌种的保存［地线］

|适用对■||保存方法|保存温度

①顼繁使用的苗种------a.临时保藏法、，I.-20X?

②长期保存的菌种------b.甘油管藏法/''n.4C

基础小题/-动脑思考就能做对一

1.不同培育基的详细配方不同，但一般都含()

A.碳源、磷酸盐和维生素

B.氮源和维生素

C.水、碳源、氮源和无机盐

D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

解析：选C培育基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑pH、特

别养分物质及02等条件。

2.获得纯净培育物的关键是（）

A.将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等进行灭菌

B.接种纯种细菌

C.相宜环境条件下培育

D.防止外来杂菌的入侵

解析：选D获得兔净培育物的关键是防止外来微生物的污染。

3.下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是（）

A.培育基——高压蒸汽灭菌

B.牛奶一煮沸消毒

C.接种环——灼烧灭菌

D.试验者双手——化学消毒

解析：选B对牛奶应采纳巴氏消毒法进行消毒。

4.制备牛肉膏蛋白豚固体培育基的步骤是（）

A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

解析：选C制备牛肉背蛋白炼固体培育基，应先依据需要计算各成分用量，然后

称量、溶化、灭菌、倒平板。

5.下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是（）

A.首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释

B.然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面

C.在相宜条件下培育

D.结果都可在培育基表面形成单个的菌落

解析：选D稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度

的菌悬液分别涂布到琼脂固体培育基的表面，在相宜条件下培育。只有在稀释度足够高的

菌悬液里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培育基表面形成单个的

菌落。

课堂讲练设计，举一能通类题

核心要点（一）|培育基及无菌技术

1.培育基配制的原则

(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，依据培育目的进行配制。

(2)养分要协调：养分物质的浓度和比例要相宜。养分物质浓度过低不能满意微生物养

分须要，过高对微生物的生长有抑制作用。

(3)pH要相宜：各种微生物相宜生长的pH范围不同，如细菌的相宜pH约为6.5〜7.5、

放线菌的相宜pH约为7.5〜8.5、真菌的相宜pH约为5.0〜6.0。为维持pH的相对恒定，

可在培育基中加入缓冲剂，常用的缓冲剂是磷酸氢二钾一磷酸二氢钾。

2.培育基的成分

养分物质定义作月主要来源

无机碳源：CO2、

构成生物体细胞的物质

凡能供应碳元素的物NaHCO3等；有机碳

碳源和一些代谢产物，有些也

质源：糖类、脂肪酸、

是异养生物的能源物质

花生粉饼、石油等

无机氮源：N2>NH3、

凡能供应氮元素的物合成蛋白质、核酸以及含铉盐、硝酸盐等；有

氮源

质氮的代谢产物机氮源：尿素、牛肉

寻、蛋白陈等

生长必不行少的微量维生素、氨基酸、碱

生长因子是酶和核酸的组成成分

有机物基等

不仅是优良的溶剂，而且

培育基、空气、代谢

水—可维持生物大分子结构

产物

的稳定

为微生物供应除碳、

是细胞的组成成分、生理

氮以外的各种重要元

无机盐调整物质、某些化能自养无机化合物

素，包括大量元素和

菌的能源，酶的激活剂等

微量元素

［名师点拨］几种微生物的养分和能量来源

微生物碳源氮源能源

蓝藻；、等光能

CO2NHNO3

硝化细菌的氧化

CO2NH3N%

根瘤菌糖美等有机物N2有机物

大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物

3.几种常用灭菌和消毒方法的比较

灭菌和消毒

主要方法应用范围

种类

微生物接种工具，如接种环、接种

灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧针或其他金属用具等,接种过程中

的试管口或瓶口等

玻璃器皿（如吸管、培育皿等）、金

干热灭菌干热灭菌箱160〜170・C加热1〜2h属用具等凡不相宜用其他方法灭

菌而又能耐高温的物品

高压蒸汽灭

100kPa、121C维持15〜30min培育基及多种器材、物品

菌

煮沸消毒法100C煮沸5〜6min家庭餐具等生活用品的消毒

牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进

巴氏消毒法70〜75C煮30min或80*C煮15min

行高温灭菌的液体

紫外线消毒30VV紫外灯照耀30min接种室、接种箱、超净工作台

用于皮肤、伤口、动植物组织表面

化学药物消用体积分数为70%〜75%的酒精、碘酒涂

消毒和空气、手术器械、塑料或玻

毒抹，来苏尔喷洒等

璃器皿等的消毒

［题组冲关］

1.下列关于微生物养分物质的描述，正确的是（）

A.同一种物质不行能既作碳源又作氮源

B.除水以外的无机物仅供应无机盐

C.凡是碳源都能供应能量

D.无机氮源也能供应能量

解析：选D对同一种物质来说，含C、H、O、N四种元素的化合物既是碳源，又是

氮源，如蛋白陈。除水以外的无机物种类繁多，对不同的微生物起的作用可能不同，如CO2

是光能自养细菌的碳源，但不能供应能量；NaHCOj可作为自养型微生物的碳源。硝化细

菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌供应用于化能合成作用的能量。

2.下列对灭菌和消毒的理解，不正确的是（）

A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽均和孩子

B.消毒和灭菌实质上是完全相同的

C.接种环用灼烧法灭菌

D.常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法

解析：选B消毒是运用较为温柔的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分

微生物，不包括芽抱和施子。灭菌则是运用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物，

包括芽把和抱子。

核心要点(二)|制备牛肉青蛋白膝固体培育基

1.操作步骤

计算H依据牛肉膏蛋白陈培辛基配方的比例，计算各成分的用量(1)才灭过曲的培养皿放在火焰旁

(2)右手木雒形瓶，使瓶

的桌面上，右手拿装有培养基

口迅速通过火焰

0：牛肉膏比较黏稠,可用称疑纸称取，牛肉膏和蛋白胺都易吸的惟形瓶，左手拔出棉窕

称/门潮，称取的动作翌迅速，称后及时靛上瓶1K

0:牛肉膏和称H纸+水上辿取出称依址--加蛋臼豚和

虬化钠加琼脂(注意：不断用玻墙■视神，防止球品

溶化U

：糊底而导致烧杯破裂)-----朴加蕉慵水至

0100mL

灭菌H培养基用高压蒸汽火必；培养皿用干热火偏法灭偏(3)月左手将培养皿打开一条柄大于救(4)券特平板冷却凝固

口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养(大妁禽5~10mln)后,

0;特培养用冷却至50C左右时，在酒和灯火焰附近倒平板.

茶(的10〜20mL)倒入培养皿，将平板倒过水放置，使

.际反连被上的物奥通左手立即盖上培养皿的皿盖皿蓑在下、皿底在上

2.倒平板操作的留意事项

(1)培育基要冷却到504c左右时起先倒平板。温度过高会烫手，过低培育基又会凝固。

(2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。

(3)倒平板时，要用左手的拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全

打开，以免杂菌污染培育基。

(4)平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝聚水珠，培育基表面的

温度也较高，平板倒置后，既可使培育基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠

落入培育基，造成污染。

(5)在倒平板的过程中，假如不当心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平

板不能用来培育微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生。

(6)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避开杂菌污染。

［题组冲关］

3.下列关于制备牛肉膏蛋白豚固体培育基的叙述，错误的是()

A.操作依次为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C.加热溶化琼脂时应不断用玻璃棒搅拌

D.待培育基冷却至50C左右时倒平板

解析：选A制备牛肉膏蛋白臃固体培育基的步既是计算、称量、溶化、灭菌、倒平

板，其依次不能颠倒。牛肉膏简单吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏

溶化并与称量纸分别后，用玻璃棒取出称量纸。在溶化时，加入琼脂后应不断用玻璃棒搅

拌，防止琼脂糊底而导致烧杯裂开。待培育基冷却至50℃左右，并且培育基处于溶化状态

时起先倒平板。

4.下列有关倒平板操作的叙述，错误的是()

A.将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上

B.使打开的锥形瓶瓶口快速通过火焰

C.将培育皿打开，培育皿盖倒放在桌面上

D.等待平板冷却凝固后须要倒过来放置

解析：选C整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培育皿应放在火

焰旁，打开的锥形瓶瓶口应快速通过火焰，培育皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能

将培育皿盖完全打开，等待平板冷却凝固后须要倒过来放置。

核心要点(三)|纯化大肠杆菌

1.平板划线法

(1)操作步骤

⑥左手将皿盏打开一条缝隙,⑤将试管口通④将己冷却的接种

右手将沾有菌种的接种环迅过火焰，并寒环伸入菌液中，沾

速伸入平板内，划三至五条平上棉塞取一环菌液

行线，盖上皿赧.注意不要划

破培养基

平

⑥将

置

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从倒

板

培

入

第一区域划线的末端开始往第放

中

箱

二区域内划线.重笈以上操作，一养

培

在三、四、五区域内划线•注意养

不要将绘后一区的划线与笫一

区相连

(2)留意事项

①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。

②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③在做其次次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端起先划线，这样才能

使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

④划线时最终一区域不要与第一区域相连。

⑤划线用力要大小适当，防止用力过大将培育基划破。

(3)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的

项目第一次划线前灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧

杀死上次划线结束后接种

杀死接种环上残留的菌

避开接种环上可能存在的环上残留的菌种，使下次

目的种，避开细菌污染环境和

微生物污染培育物划线的菌种均来自上次划

感染操作者

线的末端

2.稀释涂布平板法

(1)操作步骤

①系列稀释操作：

a.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101〜1。6的依次编号。

b.用移液管吸取1mL培育的菌液，注入1很倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上

的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。

c.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入IO2倍稀释的试管中，重复b步的混

匀操作。依次类推，直到完成最终一支试管的稀释。

②涂布平板操作：

a.将涂布b.取少量菌液c.将沾有少量酒精(1.用涂布器将菌液均

器浸在盛(不超过0.1mL),的涂布器在火焰上勾地涂布在培养基表

有酒精的滴加到培养基引燃，特酒精燃尽面。涂布时可转动培养

烧杯中表面后，冷却8〜10s皿，使菌液分布均匀

(2)留意事项

①每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒

精灯火焰1〜2cm处。

②涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾

有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。

③不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

④酒精灯与培育皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体。

［名师点拨］平板划线法和稀释涂布平板法的比较

(1)单细胞菌落的获得:

利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取；利用稀释涂布平板法

接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。

(2)两种接种方法的应用：

两种方法都能将微生物分散到固体培育基表面，以获得单细胞菌落，达到分别纯

化微生物的目的；稀释涂布平板法还能对微生物进行计数，而平板划线法不能用于微生物

的

计数。

3.试验结果分析与评价

(1)未接种的培育基表面若有菌落生长，说明培育基被污染；若无，则说明未被污染。

(2)在接种大肠杆菌的培育基上可视察到独立的菌落。有光滑型菌落，菌落边缘整齐，

表面有光泽，潮湿、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干涩、边缘不整齐；还

有黏液型菌落，为含荚膜菌的菌落。

(3)培育12h和24h,菌落大小不同，培育24h,函落大，灰色深，光泽度强。

(4)若在培育基中视察到不同形态的菌落，缘由可能是菌液不纯、混入其他杂菌或在试

验操作过程中被杂菌污染。

［题组冲关］

5.下列关于平板划线操作的叙述，正确的是()

A.运用己灭菌的接种环、培育皿，在操作过程中不须要再灭菌

B.打开含菌种的试管，需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后需立刻塞上棉塞

C.将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线即可

I).最终将平板倒置，放在培育箱中培育

解析：选D在平板划线时，已灭过菌的接种环在每次划线后，必需用灼烧灭菌法灭

菌，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前,

都需将试管口通过酒精灯火焰灼烧灭菌；在平板内划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼

烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端起先往其次区域划线，并按此操作接着往

三、四、五区域划线；接种完成后，需将平板倒置放入培育箱，以防培育皿皿盖上的水珠

落入培育基，造成污染。

6.下列关于微生物接种的描述，正确的是()

A.平板划线法只用于固体培育基的接种，而稀释涂布平板法只用于液体培育基的接种

B.平板划线法不能用于微生物的计数，而稀释涂布平板法可用于微生物的计数

C.利用平板划线法不能得到单菌落，而利用稀释涂布平板法能得到单菌落

D.平板划线法所用的接种工具不须要灭菌，而稀释涂布平板法所用的接种工具须要

灭菌

解析：选B这两种接种方法都可用于固体培育基的接种，都能用于形成单菌落，接

种工具都要进行严格灭菌处理。

课后层级演练，步步提升能力

［随堂基础巩固］

1.下列关于培育基的说法，正确的是（）

A.任何培育基都必需含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子

B.培育基只有两类：液体培育基和固体培育基

C.固体培育基中加入少量水即可制成液体培育基

D.配制培育基时要留意各种养分的浓度和比例

解析：选D不同微生物对养分物质的需求不同，如自养微生物的培育基不须要加

碳源，自生固氮菌的培育基不须要加氮源。按不同的分类标准，培育基可有不同的种类

和作用，其中固体培育基是在液体培育基里加入琼脂等凝固剂配制而成的。配制培育基

时要留意各种养分的浓度和比例。

2.下列操作与消毒灭菌无关的是（）

A.接种前用酒精灯火焰灼烧接种环

B.接种前用酒精擦拭双手

C.将平板倒置，放入培育箱中培育

I）.接种在酒精灯的火焰旁完成

解析：选C接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必需严格地消毒灭菌。A、

B、D三项都是试验操作过程中消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培育箱中培育与灭

菌无关。

3.采纳干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照耀等几种方法，可分别杀死哪

些部位的杂菌（）

A.接种环、吸管、培育基、接种室

B.吸管、接种环、培育基、接种箱

C.培育基、吸管、接种环、接种箱

D.培育皿、吸管、培育基、双手

解析：选B干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160〜170℃下加热1〜2h,

适用于耐高温且须要保持干燥的物品，如玻埼器皿（吸管、培育皿）和金属用具等；灼烧灭菌

是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭

菌锅，一般在压力为100kPa,温度为121°C的条件下，维持15〜30min,主要用于培育

基灭菌；紫外线照耀适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、趣净工作台等，

运用前用紫外线照耀约30mino

4.不同的微生物对养分物质的须要各不相同。下列有关一种以CO?为唯一碳源的自养

微生物养分的描述，不正确的是（）

A.氮源物质为该微生物供应必要的氮元素

B.碳源物质也是该微生物的能源物质

C.无机盐是该微生物不行缺少的养分物质

D.水是该微生物的养分要素之一

解析：选B由题干以CO?为唯一碳源可知，该微生物可以利用CO2合成有机物，CO2

不能为微生物供应能量，其能源来自于光能或氧化无机物释放出的化学能。

5.将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入37C恒温箱的目的是（）

A.对比视察培育基有没有被微生物利用

B.对比分析培育基是否被杂菌污染

C.没必要放入未接种的培育基

D.为了下次接种时再运用

解析：选B对未接种的培育基进行培育，起到比，圾作用，可确定培育基是否被杂菌

污染。

6.下列有关平板划线操作的描述，不正确的是（）

A.将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红

B.接种环在平板上划线的位置是随机的

C.在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰

D.最终一区的划线不能与第一区相连

解析：选B将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红；接种环在平板上划

线的位置不是随机的；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰；最终一

区的划线不能与第一区相连。

7.下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：

甲乙

（1）图甲是利用法进行微生物接种，器乙是利用法进行微生

物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_______和;对这两种接种工具进行

灭菌和消毒的方法依次是和酒精消毒。

（2）平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步削减，每次划线都要从

起先，平板划线结束后，最终一次划的线不能与第一次划的线

⑶接种操作为什么肯定要在火焰旁边进行?

（4）下图是接种后培育的效果图解，其接种方法是_____（填“图甲”或“图乙”）,,

（5）假设用图乙所示方法接种培育结束后，发觉培育基上菌落连成一片，可能的缘由是

什么？____________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

解析：（1）图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方

法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。（2）平板划线时，每次划线前都要从上一次划线

的末端起先，最终一次划线不能与第一次划线相连。（3）由于在酒精灯火焰旁边存在着无菌

区域，因此接种常在火焰旁边进行。（4）培育基上的菌落分布匀称，接种方法为稀释涂布平

板法。

（5）采纳稀释涂布平板法进行菌种分别时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单

个细胞。

答案：（1）平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌（2）上一次划线的末

端相连（或相接、相交、交叉等）（3）火焰旁边存在着无菌区域（4）图乙（5）稀释倍数不

够，菌液的浓度太高

［课时跟踪检测］

一、选择题

1.下列对常用的无菌操作的描述，错误的是（）

A.无菌操作的目的是防止杂菌污染

B.对操作者进行消毒的方法是用酒精擦拭双手

C.试验操作过程应在酒精灯火焰旁边进行

D.玻璃器皿（吸管、培育皿）可用酒精擦拭进行灭菌

解析：选D无菌技术的主要目的是防止培育物被其他外来微生物污染。对操作者应

用较温柔的方法进行消毒。试验操作过程应在酒精灯火焰旁边进行，防止瓶口空气中的微

生物污染培育基。时无菌操作用到的玻璃器皿要用十慈灭菌法灭菌。

2.培育基、培育皿、接种环、试验操作者的双手、空气、牛奶所采纳的灭菌或消毒方

法依次是（）

①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴

氏消毒

B.①@

解析：选A培育基用高压蒸汽灭菌；培育皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼

烧灭菌达到快速彻底地灭菌的效果；试验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精

擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的养分成分，可采纳巴氏消毒。

3.（江苏新旁）做“微生物的分别与培育”试验时，下列叙述正确的是（）

A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培育基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培育皿中菌落时，应标记在皿底上

解析：选D在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待

压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培育皿

打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火

焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培育中，一般在皿底上用记号笔做标记。

4.下列有关平板划线法操作的叙述，不正确的是（）

A.第一步灼烧接种环是为了避开接种环上可能存在的微生物污染培育物

B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种

C.在每一区域内划线时，接种环上的菌种干脆来源于菌液

D.划线结束后，灼烧接种环能刚好杀死接种环上的菌种，避开细胞污染环境和感染操

作者

解析：选C在用平板划线法分别大肠杆菌的试验中，接种环取菌种前灼烧的目的是

为了避开接种环上可能存在的微生物污染培育物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死

上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避开细菌污染环境和感染操

作者。从其次次划线起先，每次划线时接种环上的菌种干脆来源于上次划线的末端。

5.为了保持菌种的纯净须要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是（）

A.对于频繁运用的翦种，可以采纳临时保藏的方法

B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培育基上

C.临时保藏菌种简单被污染或产生变异

D.对于须要长期保存的菌种，可以采纳低温一4C保藏的方法

解析：选D对于须要长期保存的菌种，可采纳甘油管藏法，即在3mL甘油瓶中加入

1mL甘油后灭菌，将1mL培育的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在一20℃

的冷冻箱中保存。

6.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（）

①可以用相同的培育基②都须要运用接种针进行接种③都须要在酒精灯火焰

旁进行接种④都可以用来计数活菌

A.®®B.③④

C.①③D.②④

解析：选C平板划线法或稀释涂布平板法都运用固体培育基；平板划线法采纳接种

针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采纳涂布器进行操作；进行接种操作时，要进行

无菌操作，须要在酒精灯火焰旁接种，避开空气中的微生物污染培育基；平板划线法一般

用于分别菌体而不能计数活菌。

7.下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的是（）

选项项目硝化细菌乳酸菌根瘤菌衣藻

能源乳酸光能

ANH3N2

B碳源糖类等糖类等

CO2co2

氮源；

CNH3N2N2NO

自养需飙异养厌自养需自养需

D代谢类型

型氧型氧型氧型

解析：选B从能源来看，硝化细菌的能源是氧化氮气为硝酸盐过程释放的能量，乳

酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌须要NH；、NO7;从代谢类型看，

根瘤菌为异养需氧型；从碳源看，硝化细菌与衣藻需CO2,乳酸菌和根瘤菌须要糖类等有

机物。

8.下面是微生物平板划线示意图，划线的依次为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是（）

A.在五个区域中划线前后都要对接种环和培育基进行灭菌

B.划线操作时完全打开皿盖，划完马上盖上

C.接种时不能划破培育基，否则难以达到分别单菌落的目的

D.第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数

解析：选C在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培育

皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线，

盖上皿盖；留意接种时不能划破培育基，否则难以达到分别单菌落的目的；第1区和第5

区的划线不能相连。

9.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是

A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释

B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培育基表面连续划线的操作

C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培育基进行培育

D,都可在培育基表面形成单个的菌落

解析：选D平板划线法不须要进行梯度稀释，稀释涂布平板法须要将不同稀释度的

菌液涂布到固体培育基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都可在培育基表面形成单

菌落。

10.某探讨小组从有机废水中分别微生物用于废水处理，下列叙述正确的是()

A.培育基分装到培育皿后进行灭菌

B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C.接种后的培育皿须放在光照培育箱中培育

D.培育过程中每隔一周视察一次

解析：选B在配制培育基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环

进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培育皿应放置在恒温培

育箱中培育；微生物生长、繁殖较快，在培育过程中一般要隔天视察一次。

二、非选择题

11.在培育基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是

一个纯化的细菌菌落。试验基本步骤如下：

配制培育基I—|灭菌、倒平板|一一频

请回答下列有关问题：

(1)配制培育基时，各成分含量确定的原则是。不论何种培

育基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是o

(2)倒平板的相宜温度是50℃左右,缘由是_________________________。待平板冷凝后,

要将平板倒置，这样既可使培育基表面的水分更好地挥发，又可防止___________________.

(3)纯化菌株时，若运用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的

;若运用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的o

ABCD

(4)划线的某个平板培育后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其次划线

区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有

(5)若用大肠杆菌进行试验，运用过的培育基及培育物必需经过_______处理后才能丢

弃，以防止培育物的扩散。

解析：培育基中各成分含量要依据微生物的生长须要来确定。微生物生长须要肯定的

pH,所以培育基装瓶前须要调整pH。由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头海管，

D为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具应是B,平板划线法应选择的接种工具是A。

由题意分析可知，造成此现象的缘由可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到

高温的接种环而死亡：二是划其次划线区域第一条线时未从第一区域末端起先。有的大肠

杆菌会释放一种剧烈的毒素，因此，运用过的培育基及其培育物必需经过灭菌处理后才能

丢弃，以防止培育物的扩散。

答案：(1)所培育微生物对各养分成分的须要量调整pH(2)温度过高会烫手，过低

培育基又会凝固皿盖上的水珠落入培育基，造成污染(3)BA(4)①