2025年核酸检测常态化面试题库及答案

2025年核酸检测常态化面试题库及答案

一、单项选择题（总共10题，每题2分）1.核酸检测中，常用的PCR技术是由谁首次提出的？A.詹姆斯·沃森B.弗雷德里克·桑格C.肯尼斯·梅勒D.肯尼斯·穆利斯答案：D2.核酸检测中，用于扩增DNA片段的关键酶是？A.RNA聚合酶B.蛋白酶C.DNA聚合酶D.腺苷酸激酶答案：C3.在核酸提取过程中，常用的有机溶剂是？A.乙醇B.氯仿C.乙醚D.丙酮答案：B4.核酸检测中，用于检测样本是否合格的指标是？A.Ct值B.阳性率C.阴性率D.特异性答案：A5.核酸检测中，用于提高检测灵敏度的方法之一是？A.增加样本量B.降低退火温度C.使用更长的引物D.增加PCR循环数答案：D6.核酸检测中，常用的荧光标记物是？A.FITCB.HRPC.Cy5D.AlexaFluor488答案：C7.核酸检测中，用于去除样本中抑制剂的方法是？A.离心B.过滤C.活性炭吸附D.超滤答案：C8.核酸检测中，用于评估检测准确性的指标是？A.灵敏度B.特异性C.阳性预测值D.阴性预测值答案：B9.核酸检测中，常用的样本保存方法是？A.低温冷冻B.室温保存C.高温干燥D.乙醇保存答案：A10.核酸检测中，用于检测样本中病毒载量的方法是？A.定量PCRB.半定量PCRC.定性PCRD.实时PCR答案：A二、填空题（总共10题，每题2分）1.核酸检测中，PCR技术的全称是聚合酶链式反应。2.核酸检测中，常用的引物长度为18-22个碱基。3.核酸检测中，退火温度通常在55-65℃之间。4.核酸检测中，Ct值表示扩增到一定荧光信号所需的循环数。5.核酸检测中，常用的核酸提取方法包括化学裂解法和机械破碎法。6.核酸检测中，荧光标记物可以用于实时监测PCR反应进程。7.核酸检测中，抑制剂可以影响PCR反应的效率。8.核酸检测中，特异性是指检测方法只识别目标核酸的能力。9.核酸检测中，样本保存的目的是为了保持核酸的完整性。10.核酸检测中，定量PCR可以用于测定样本中病毒载量。三、判断题（总共10题，每题2分）1.核酸检测中，PCR技术只能用于扩增DNA片段。（×）2.核酸检测中，Ct值越小，表示病毒载量越高。（×）3.核酸检测中，荧光标记物可以提高检测的特异性。（×）4.核酸检测中，抑制剂会影响PCR反应的特异性。（×）5.核酸检测中，样本保存时可以使用乙醇。（×）6.核酸检测中，定量PCR只能用于定性检测。（×）7.核酸检测中，PCR反应的退火温度越高，特异性越好。（×）8.核酸检测中，样本提取过程中可以使用氯仿。（√）9.核酸检测中，Ct值越大，表示病毒载量越高。（×）10.核酸检测中，荧光标记物可以用于实时监测PCR反应进程。（√）四、简答题（总共4题，每题5分）1.简述核酸检测中PCR技术的原理和步骤。答案：PCR技术原理是通过模拟DNA复制过程，在体外特异性地扩增目标DNA片段。步骤包括：①变性，将双链DNA加热至95℃使其解旋成单链；②退火，将温度降至55-65℃，引物与目标DNA片段结合；③延伸，将温度升至72℃，DNA聚合酶在引物处延伸DNA链。重复以上步骤30-40次，目标DNA片段呈指数级扩增。2.简述核酸检测中常用的核酸提取方法及其优缺点。答案：常用的核酸提取方法包括化学裂解法和机械破碎法。化学裂解法通过使用裂解缓冲液和有机溶剂去除蛋白质和其他杂质，优点是操作简单，缺点是可能影响核酸质量。机械破碎法通过物理方法破碎细胞，优点是核酸质量较好，缺点是操作复杂。3.简述核酸检测中Ct值的含义及其影响因素。答案：Ct值表示扩增到一定荧光信号所需的循环数，Ct值越小，表示病毒载量越高。影响因素包括样本中病毒载量、PCR反应条件、样本处理等。4.简述核酸检测中荧光标记物的作用及其常用类型。答案：荧光标记物可以用于实时监测PCR反应进程，常用类型包括FAM、HEX、Cy5等。FAM适用于检测小片段DNA，HEX适用于检测中等片段DNA，Cy5适用于检测长片段DNA。五、讨论题（总共4题，每题5分）1.讨论核酸检测中提高检测灵敏度的方法及其应用场景。答案：提高检测灵敏度的方法包括增加样本量、使用更长的引物、增加PCR循环数等。应用场景包括临床诊断、病原体检测等，特别是在病毒载量较低时，提高灵敏度可以确保检测结果的准确性。2.讨论核酸检测中样本保存的重要性及其影响因素。答案：样本保存的重要性在于保持核酸的完整性，影响因素包括温度、湿度、保存时间等。低温冷冻可以有效地保存核酸，但需要注意避免反复冻融，以免影响核酸质量。3.讨论核酸检测中抑制剂的去除方法及其对检测结果的影响。答案：去除抑制剂的方法包括活性炭吸附、超滤等。抑制剂会影响PCR反应的效率，导致检测结果不准确，因此去除抑制剂是确保检测准确性的重要步骤。4.讨论核酸检测中定量PCR的应用及其优势。答案：定量PCR可以用于测定样本中病毒载量，优势在于可以精确测定病毒载量，适用于临床诊断、流行病学调查等。定量PCR可以提供更详细的病毒感染信息，有助于制定更有效的防控措施。答案和解析一、单项选择题1.D2.C3.B4.A5.D6.C7.C8.B9.A10.A二、填空题1.聚合酶链式反应2.18-22个碱基3.55-65℃4.扩增到一定荧光信号所需的循环数5.化学裂解法和机械破碎法6.实时监测PCR反应进程7.影响PCR反应的效率8.检测方法只识别目标核酸的能力9.保持核酸的完整性10.测定样本中病毒载量三、判断题1.×2.×3.×4.×5.×6.×7.×8.√9.×10.√四、简答题1.PCR技术原理是通过模拟DNA复制过程，在体外特异性地扩增目标DNA片段。步骤包括：①变性，将双链DNA加热至95℃使其解旋成单链；②退火，将温度降至55-65℃，引物与目标DNA片段结合；③延伸，将温度升至72℃，DNA聚合酶在引物处延伸DNA链。重复以上步骤30-40次，目标DNA片段呈指数级扩增。2.常用的核酸提取方法包括化学裂解法和机械破碎法。化学裂解法通过使用裂解缓冲液和有机溶剂去除蛋白质和其他杂质，优点是操作简单，缺点是可能影响核酸质量。机械破碎法通过物理方法破碎细胞，优点是核酸质量较好，缺点是操作复杂。3.Ct值表示扩增到一定荧光信号所需的循环数，Ct值越小，表示病毒载量越高。影响因素包括样本中病毒载量、PCR反应条件、样本处理等。4.荧光标记物可以用于实时监测PCR反应进程，常用类型包括FAM、HEX、Cy5等。FAM适用于检测小片段DNA，HEX适用于检测中等片段DNA，Cy5适用于检测长片段DNA。五、讨论题1.提高检测灵敏度的方法包括增加样本量、使用更长的引物、增加PCR循环数等。应用场景包括临床诊断、病原体检测等，特别是在病毒载量较低时，提高灵敏度可以确保检测结果的准确性。2.样本保存的重要性在于保持核酸的完整性，影响因素包括温度、湿度、保存时间等。低温冷冻可以有效地保存核酸，但需要注意避免反复冻融，以免影响核酸质