液体活检在肝纤维化诊断新进展

液体活检在肝纤维化诊断新进展演讲人01液体活检在肝纤维化诊断新进展02液体活检的技术原理与核心平台：从基础机制到技术革新03肝纤维化液体活检的临床应用进展：从实验室到临床实践的转化04液体活检在肝纤维化诊断中的挑战与应对策略05未来方向与展望：精准医学时代的肝纤维化全程管理06总结与展望：液体活检引领肝纤维化诊断新纪元目录01液体活检在肝纤维化诊断新进展液体活检在肝纤维化诊断新进展作为从事肝病临床与基础研究十余年的工作者，我深刻体会到肝纤维化诊断在临床实践中的痛点与挑战。肝纤维化是慢性肝病进展至肝硬化的关键环节，其早期诊断、准确分期及动态监测对延缓疾病进展、改善患者预后至关重要。然而，传统诊断手段如肝穿刺活检虽被视为“金标准”，却因有创性、取样误差及患者依从性差等问题难以广泛应用；影像学检查（如FibroScan、超声弹性成像）虽无创，但对早期纤维化敏感性不足，且易受肥胖、腹水等因素干扰。近年来，液体活检技术的兴起为肝纤维化诊断带来了革命性突破——通过检测外周血中的生物标志物，可实现无创、动态、精准的病情评估。本文将从技术原理、临床进展、挑战与未来方向等维度，系统阐述液体活检在肝纤维化诊断中的最新研究与应用，旨在为同行提供参考，共同推动这一领域的发展。02液体活检的技术原理与核心平台：从基础机制到技术革新液体活检的技术原理与核心平台：从基础机制到技术革新液体活检（LiquidBiopsy）是指通过采集血液、尿液等体液样本，分析其中circulatingbiomolecules的特征，从而反映疾病状态的一类技术。其核心优势在于“无创性”与“动态监测”，能够克服传统活检的局限性，为肝纤维化提供全程管理工具。在肝纤维化领域，液体活检的核心标志物主要来源于肝脏损伤与修复过程中的分子释放，包括循环游离DNA（cfDNA）、循环外泌体（Exosomes）、循环microRNA（miRNA）、循环蛋白标志物及循环细胞等。以下将分平台阐述其技术原理与肝纤维化中的生物学基础。（一）循环游离DNA（cfDNA）：片段化特征与甲基化模式的双重解读cfDNA是细胞凋亡或坏死释放到血液中的DNA片段，长度主要在166-200bp（核小体DNA）。在肝纤维化进程中，肝细胞损伤、肝星状细胞（HSC）活化及免疫细胞浸润均会导致cfDNA释放量及特征改变，成为液体活检的重要标志物。cfDNA的释放机制与肝纤维化的关联慢性肝损伤（如乙肝、丙肝、酒精性肝病）持续存在时，肝细胞反复坏死与凋亡，导致cfDNA总量显著升高。研究表明，肝纤维化患者血清cfDNA水平较健康人升高2-3倍，且与纤维化分期呈正相关（r=0.72，P<0.001）。其释放机制主要包括：（1）肝细胞坏死：炎症因子（如TNF-α、IL-1β）诱导肝细胞膜破裂，释放基因组DNA；（2）HSC活化：活化的HSC通过凋亡释放携带纤维化相关基因（如α-SMA、CollagenI）的cfDNA；（3）免疫细胞：肝脏浸润的淋巴细胞、巨噬细胞死亡时，可释放与免疫应答相关的cfDNA片段。cfDNA的释放机制与肝纤维化的关联2.cfDNA片段化特征：长度分布与末端基序的“指纹”cfDNA的片段化模式是近年研究的热点。与健康人相比，肝纤维化患者cfDNA呈现特征性片段缩短：主峰从166bp降至144bp，且小片段（<100bp）比例增加。这种改变可能与肝细胞损伤时的“凋亡小体”释放及DNaseI活性增强有关。此外，cfDNA末端基序（如磷酸化、甲基化）也具诊断价值。例如，肝纤维化患者cfDNA的5'端磷酸化水平显著升高（较健康人增加1.8倍），可能与肝细胞坏死的“被动释放”模式相关。通过高通量测序（NGS）结合生物信息学分析，可构建“片段化特征模型”，对肝纤维化分期准确率达85%以上。cfDNA的释放机制与肝纤维化的关联3.cfDNA甲基化标志物：表观遗传学的精准诊断DNA甲基化是表观遗传调控的重要方式，在肝纤维化进程中存在特异性改变。例如，基因（如PPARγ、TIMP3）的启动子区高甲基化可抑制其表达，促进HSC活化；而（如miR-122、miR-29）的低甲基化则增强其抗纤维化作用。通过甲基化测序技术，研究者发现肝纤维化患者血清中甲基化cfDNA（如methylated-ALB、methylated-GSTP1）水平显著升高，且与纤维化分期（S1-S4）呈正相关（AUC=0.89）。更值得关注的是，甲基化标志物具有“病因特异性”：乙肝相关肝纤维化中，HBVX基因（HBx）启动子区甲基化水平升高；而非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）相关肝纤维化中，SREBP1c基因甲基化水平与肝纤维化程度显著相关。这一特性为肝纤维化的病因分型提供了新思路。cfDNA的释放机制与肝纤维化的关联（二）循环外泌体（Exosomes）：细胞间通讯的“信使”与纤维化调控载体外泌体是直径30-150nm的细胞外囊泡，由细胞内多泡体（MVB）与细胞膜融合后释放，携带核酸（miRNA、lncRNA、DNA）、蛋白质及脂质等生物分子。在肝纤维化中，外泌体是肝细胞、HSC、kupffer细胞（KCs）等细胞间通讯的关键介质，其内容物可反映肝脏微环境的实时状态。外泌体的来源与肝纤维化中的生物学功能肝纤维化患者血清外泌体主要来源于：（1）肝细胞：损伤肝细胞释放的外泌体携带促炎因子（如IL-6、TNF-α），激活HSC；（2）HSC：活化HSC（aHSC）释放的外泌体富含α-SMA、CollagenI及TGF-β1，促进细胞外基质（ECM）沉积；（3）KCs：极化M1型KCs释放的外泌体携带miR-155，通过抑制SOCS6信号通路促进HSC活化。这些外泌体通过“细胞摄取”或“膜融合”将cargo传递至靶细胞，形成“损伤-激活-纤维化”的正反馈循环。外泌体miRNA：肝纤维化调控的“开关”miRNA是外泌体中最丰富的核酸成分，在肝纤维化调控中发挥核心作用。例如，aHSC来源的外泌体miR-21可通过靶向PTEN/Akt通路促进HSC增殖与胶原合成；而肝细胞来源的外泌体miR-122（占肝细胞miRNA的70%）可抑制HSC活化，其血清水平在肝纤维化中显著降低（较健康人下降60%）。通过二代测序（NGS）筛选，研究者构建了“外泌体miRNA诊断模型”（如miR-122/miR-21/miR-199a组合），对肝纤维化S2期以上的诊断敏感度达89%，特异性达85%。此外，外泌体miRNA还具有“动态监测”价值：抗纤维化治疗（如吡非尼酮）后，miR-122水平显著回升，miR-21水平下降，可作为疗效评估的早期指标。外泌体蛋白与脂质：纤维化进程的“直接反映”除miRNA外，外泌体蛋白也是重要的标志物。aHSC来源的外泌体高表达α-SMA、CollagenI及TGF-β1，其水平与肝纤维化分期呈正相关（r=0.78，P<0.001）；而肝细胞来源的外泌体表达ALB、CK18，其水平与肝功能储备相关。脂质组学研究发现，肝纤维化患者外泌体中磷脂酰胆碱（PC）和鞘磷脂（SM）比例显著降低，可能与肝细胞膜损伤及脂质代谢紊乱有关。通过质谱技术（LC-MS/MS）分析外泌体蛋白与脂质，可构建“多组学联合模型”，进一步提升诊断准确率（AUC=0.92）。（三）循环microRNA（miRNA）：肝纤维化调控网络的“关键节点”miRNA是一类长度约22nt的非编码RNA，通过靶向mRNA降解或抑制翻译调控基因表达。血清/血浆miRNA因稳定性高（被外泌体或蛋白包裹）、易于检测，成为肝纤维化液体活检的重要标志物。外泌体蛋白与脂质：纤维化进程的“直接反映”miRNA在肝纤维化中的调控机制肝纤维化进程中，miRNA的表达谱发生显著改变，形成复杂的调控网络：（1）促纤维化miRNA：如miR-21（靶向PTEN，促进HSC活化）、miR-221（靶向PUMA，抑制肝细胞凋亡）、miR-155（靶向SOCS1，增强TGF-β1信号）；（2）抗纤维化miRNA：如miR-122（靶向ADAM17，抑制EGFR通路）、miR-29（靶向CollagenI/III，抑制ECM沉积）、miR-200（靶向ZEB1/2，抑制上皮-间质转化）。这些miRNA通过调控HSC活化、肝细胞损伤、ECM代谢等关键环节，影响肝纤维化进程。外泌体蛋白与脂质：纤维化进程的“直接反映”miRNA在肝纤维化中的调控机制2.miRNA标志物的筛选与验证通过miRNA芯片或NGS技术，研究者已筛选出数十个与肝纤维化相关的miRNA标志物。例如，在慢性乙肝患者中，miR-29c水平与肝纤维化分期呈负相关（r=-0.71，P<0.001），其诊断S2期以上纤维化的AUC为0.87；在NAFLD相关肝纤维化中，miR-34a水平显著升高（较健康人增加3.2倍），与肝脂肪变及纤维化程度相关。为提升诊断效能，多组学联合策略被广泛应用：如miR-122/miR-29/miR-34a组合模型对肝纤维化S3期的诊断敏感度达92%，特异性达88%。此外，miRNA检测技术不断优化：数字PCR（dPCR）可实现对低丰度miRNA的绝对定量，而纳米材料（如金纳米颗粒、石墨烯）的引入则显著提升了检测灵敏度（可达fmol/L级别）。外泌体蛋白与脂质：纤维化进程的“直接反映”循环蛋白标志物：传统指标的优化与新型标志物的探索循环蛋白标志物是肝纤维化诊断的传统领域，如透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）等，被称为“肝纤维化四项”。近年来，随着蛋白质组学技术的发展，新型蛋白标志物不断涌现，为肝纤维化诊断提供了更丰富的选择。传统蛋白标志物的局限性优化传统“肝纤维化四项”虽在临床广泛应用，但存在特异性不足、易受肝功能影响等问题。例如，HA在肝硬化中显著升高，但也在急性肝损伤中一过性升高；LN在肝纤维化早期即升高，但慢性肝炎活动期也可升高。为提升诊断效能，研究者通过机器学习算法（如随机森林、支持向量机）构建了“联合模型”：如HA+PCⅢ+Ⅳ-C+APRI（AST/PLT比值指数）模型，对肝纤维化S2期以上的诊断AUC提升至0.86，较单一指标提高15%-20%。此外，新型检测技术（如化学发光免疫分析、时间分辨免疫荧光）的应用，也提升了传统标志物的检测精度（CV值<10%）。新型蛋白标志物的发现与应用蛋白质组学技术（如LC-MS/MS、抗体芯片）的应用，发现了多个与肝纤维化相关的新型蛋白标志物：（1）TIMP-1（金属蛋白酶组织抑制剂1）：抑制MMPs活性，促进ECM沉积，其血清水平与肝纤维化分期呈正相关（r=0.82，P<0.001）；（2）OPG（骨保护素）：调节破骨细胞分化，在肝纤维化中高表达，与HSC活化相关；（3）Glypican-3（GPC3）：肝细胞癌相关蛋白，近年研究发现其在早期肝纤维化中即升高，可能参与肝细胞再生与纤维化进程。例如，TIMP-1/GPC3联合模型对肝纤维化S1期的诊断敏感度达85%，显著优于传统指标。此外，炎症因子（如IL-6、TNF-α）、趋化因子（如MCP-1、CXCL10）也与肝纤维化进展相关，可作为辅助诊断标志物。03肝纤维化液体活检的临床应用进展：从实验室到临床实践的转化肝纤维化液体活检的临床应用进展：从实验室到临床实践的转化液体活检技术在肝纤维化诊断中的临床应用，经历了从“标志物发现”到“验证优化”，再到“临床落地”的过程。目前，其在早期诊断、分期评估、动态监测及预后判断等方面已取得显著进展，部分技术进入临床转化阶段。早期诊断：捕捉“隐匿性”肝纤维化的蛛丝马迹肝纤维化早期（S1-S2）症状隐匿，传统诊断手段敏感性不足，导致多数患者确诊时已进展至中晚期（S3-S4）。液体活检因能检测到微量分子改变，为早期诊断提供了可能。早期诊断：捕捉“隐匿性”肝纤维化的蛛丝马迹早期肝纤维化的“预警信号”在慢性乙肝患者中，血清cfDNA片段化模型（144bppeakratio）对S1期肝纤维化的诊断敏感度达82%，特异性达79%，显著优于FibroScan（AUC=0.75）；在NAFLD患者中，外泌体miR-122/miR-29组合模型对早期纤维化（S1-S2）的诊断AUC达0.88，且不受BMI、血糖水平影响。此外，循环内皮细胞（CEC）计数（反映血管损伤）在早期肝纤维化中即升高（较健康人增加2.5倍），可作为“血管纤维化”的早期标志物。早期诊断：捕捉“隐匿性”肝纤维化的蛛丝马迹不同病因肝纤维化的“差异化诊断”肝纤维化病因多样（乙肝、丙肝、酒精、NAFLD等），液体活检标志物具有“病因特异性”，可实现精准分型：（1）乙肝相关肝纤维化：HBVcccDNA相关cfDNA（如HBVXgenecfDNA）水平与纤维化分期呈正相关，其诊断S2期以上纤维化的AUC=0.91；（2）酒精性肝纤维化：血清乙醇代谢产物（如乙醛）诱导的蛋白加合物（如CEACAM1）水平升高，联合miR-34a模型，诊断准确率达88%；（3）NAFLD相关肝纤维化：外泌体GPC3、脂质组学标志物（如LysoPC16:0/0:0）组合模型，对代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）相关纤维化的诊断AUC=0.89。这种“病因特异性”为个体化治疗提供了依据。分期评估：替代肝穿刺的“无创金标准”肝穿刺活检是肝纤维化分期的“金标准”，但因其有创性，仅15%-20%的患者接受活检。液体活检通过多标志物联合模型，可实现对不同分期的精准评估，部分技术达到或接近活检水平。分期评估：替代肝穿刺的“无创金标准”轻中度纤维化（S1-S2）的精准识别对于轻中度纤维化，液体活检标志物展现出高敏感性。例如，在慢性丙肝患者中，cfDNA甲基化模型（methylated-PPARγ/methylated-TIMP1）对S2期的诊断敏感度达89%，特异性达85%；在NAFLD患者中，血清miR-122/miR-29/miR-199a组合模型区分S1与S0期的AUC=0.87。此外，影像学-液体活检联合模型（如FibroScan+miR-122）可进一步提升分期准确率（AUC=0.92），减少“假阴性”结果。分期评估：替代肝穿刺的“无创金标准”重度纤维化与肝硬化（S3-S4）的早期预警重度纤维化与肝硬化是肝功能失代偿和肝癌的高危阶段，早期识别对干预至关重要。液体活检标志物在晚期纤维化中表现出显著变化：例如，血清外泌体α-SMA水平在S3期较S2期升高2.3倍，在S4期（肝硬化）进一步升高4.1倍；cfDNA片段化特征（小片段比例）在肝硬化中达峰值（较健康人增加3.5倍）。通过“机器学习联合模型”（如cfDNA+外泌体miRNA+传统蛋白），对S3期以上纤维化的诊断AUC达0.94，与肝穿刺活检一致性（Kappa=0.82）良好。动态监测：抗纤维化治疗的“疗效晴雨表”肝纤维化治疗的核心目标是延缓或逆转纤维化进程，而疗效评估需依赖动态监测。传统方法（如肝穿刺、影像学）因时间间隔长（需3-6个月）、有创性，难以满足频繁监测需求。液体活检因可重复性强、检测便捷，为疗效评估提供了理想工具。动态监测：抗纤维化治疗的“疗效晴雨表”抗纤维化治疗的“早期应答标志物”抗纤维化药物（如吡非尼酮、安络化纤丸、FXR激动剂）治疗后，液体活检标志物可在短期内（1-2周）发生改变，早于影像学或生化指标的变化。例如，吡非尼酮治疗4周后，患者血清miR-29水平较基线升高1.8倍，miR-21水平降低1.5倍，且与治疗12个月后肝纤维化逆转率呈正相关（r=0.76，P<0.001）；FXR激动剂（如奥贝胆酸）治疗后，外泌体TGF-β1水平显著下降，反映HSC活化受到抑制。这些“早期应答标志物”可帮助医生及时调整治疗方案，避免无效用药。动态监测：抗纤维化治疗的“疗效晴雨表”治疗抵抗与复发的“预警信号”部分患者对抗纤维化治疗无应答或停药后复发，液体活检可识别这类高危人群。例如，治疗12周后，血清cfDNA片段化模式未改善的患者，后续肝纤维化进展风险较应答者增加3.2倍；停药后miR-122水平快速下降的患者，6个月内复发率达65%，而miR-122维持稳定者复发率仅18%。通过“动态监测模型”（如miR-122变化率+cfDNA水平），可实现个体化治疗方案的调整，延长患者无进展生存期。预后判断：肝硬化与肝癌风险的“分层评估”肝纤维化是肝硬化和肝癌的主要危险因素，预后判断对临床决策至关重要。液体活检标志物可反映肝脏微环境的“恶性潜能”，为风险分层提供依据。预后判断：肝硬化与肝癌风险的“分层评估”肝硬化并发症的“风险预测”肝硬化患者每年失代偿发生率为5%-15%，早期识别高危人群可进行干预。研究表明，血清外泌体miR-221水平与肝硬化食管静脉曲张破裂出血风险呈正相关（HR=2.8，95%CI:1.9-4.1）；cfDNA片段化特征（>200bp片段比例）与自发性细菌性腹膜炎风险相关（AUC=0.86）。通过“多标志物风险模型”（如miR-221+cfDNA+Child-Pugh分级），可预测1年内失代偿风险，AUC达0.89。预后判断：肝硬化与肝癌风险的“分层评估”肝癌发生的“早期预警”肝纤维化-肝硬化-肝癌（HCC）是慢性肝病进展的经典路径，液体活检可在HCC早期甚至“癌前病变”阶段发出预警。例如，肝硬化患者血清中HBV整合cfDNA（如HBVTERTpromoterintegration）水平升高，其发生HCC的风险较未升高者增加5.3倍；外泌体GPC3、miR-122联合模型可识别“肝硬化伴高级别异型增生结节”患者，诊断HCC的敏感度达87%，较AFP（敏感度58%）显著提高。此外，循环肿瘤DNA（ctDNA）甲基化标志物（如methylated-RASSF1A）在HCC诊断中的AUC=0.91，为肝癌的早期筛查提供了新工具。04液体活检在肝纤维化诊断中的挑战与应对策略液体活检在肝纤维化诊断中的挑战与应对策略尽管液体活检技术在肝纤维化诊断中展现出巨大潜力，但其临床转化仍面临标准化、特异性、成本与认知等多重挑战。解决这些问题需要基础研究、临床应用与产业界的协同努力。标准化问题：从“实验室检测”到“临床常规”的障碍液体活检的标准化是临床转化的核心瓶颈，包括样本采集、处理、检测与分析等全流程。不同实验室使用的样本采集管（如EDTA管vsStreck管）、保存温度（4℃vs-80℃）、提取试剂盒（磁珠法vs柱法）及检测平台（NGSvsdPCR）差异，导致结果可比性差。例如，同一cfDNA样本在不同实验室检测的变异系数（CV）可达20%-30%，严重影响诊断一致性。标准化问题：从“实验室检测”到“临床常规”的障碍建立标准化操作流程（SOP）为解决标准化问题，国际权威机构（如ISBER、CLSI）已发布液体活检SOP指南，涵盖样本采集（如采集后2小时内分离血浆）、预处理（如离心速度、次数）、核酸提取（如磁珠法标准化）及数据分析（如生物信息学流程）等环节。国内也成立了“肝病液体活检标准化联盟”，推动多中心协作，建立“参考物质”（如cfDNA标准品、外泌体校准品），实现检测结果的可追溯性。标准化问题：从“实验室检测”到“临床常规”的障碍推动质量控制（QC）与质量保证（QA）实验室需建立内部QC体系（如每日检测阳性对照、阴性对照）及外部QA计划（如参加室间质评）。例如，美国CAP（CollegeofAmericanPathologists）已开展“液体活检室间质评”，覆盖cfDNA、外泌体等项目，帮助实验室提升检测精度。此外，“数字化质控”平台（如基于区块链的样本追踪系统）可实现全流程数据透明化，减少人为误差。特异性问题：鉴别诊断与背景干扰的优化液体活检标志物在肝纤维化中存在一定程度的“非特异性”，即在其他疾病（如急性肝炎、肝癌、自身免疫性肝病）中也可能异常，导致假阳性。例如，血清HA在急性肝损伤中一过性升高，易与早期肝纤维化混淆；外泌体miR-21在肝癌中也高表达，需与肝纤维化鉴别。特异性问题：鉴别诊断与背景干扰的优化多组学标志物联合策略单一标志物的特异性有限，通过“多组学联合”可提升诊断准确性。例如，“cfDNA片段化+外泌体miRNA+传统蛋白”联合模型，对肝纤维化与急性肝炎的鉴别AUC达0.93，较单一指标提高25%-30%；“甲基化cfDNA+循环蛋白”模型可有效区分肝纤维化与肝癌（AUC=0.91）。此外，机器学习算法（如深度学习、随机森林）可整合多维度数据，自动筛选最优标志物组合，减少主观偏倚。特异性问题：鉴别诊断与背景干扰的优化病因特异性标志物的开发针对不同病因肝纤维化，开发“病因特异性”标志物是提升特异性的关键。例如，乙肝相关肝纤维化中，HBVDNA整合标志物（如HBVXgeneintegration）具有高度特异性；酒精性肝纤维化中，乙醇代谢产物加合物（如CEACAM1）与酒精摄入量相关；NAFLD相关肝纤维化中，脂质组学标志物（如LysoPC16:0/0:0）与代谢紊乱直接相关。这些标志物可结合通用标志物，构建“病因-分期”联合诊断模型。临床转化障碍：成本、可及性与医生认知的挑战液体活检技术的临床转化还面临成本高昂、基层可及性差及医生认知不足等问题。例如，NGS-based液体活检检测单次费用约3000-5000元，部分患者难以承受；基层医院缺乏检测设备与专业技术人员，导致技术应用受限；部分临床医生对液体活检的认知仍停留在“科研阶段”，对其临床价值存疑。临床转化障碍：成本、可及性与医生认知的挑战技术创新降低成本随着技术进步，液体活检检测成本持续下降。例如，dPCR技术较NGS成本降低50%（单次检测约1000-2000元）；微流控芯片技术可实现“样本进-结果出”的自动化检测，减少人工成本；纳米材料（如金纳米颗粒）的应用可提升检测灵敏度，降低样本用量。此外，“批量检测”模式（如多样本并行检测）可进一步降低单次检测成本。临床转化障碍：成本、可及性与医生认知的挑战推动分级诊疗与基层普及政府与医疗机构需加强合作，推动液体活检技术在基层的普及。例如，建立“区域中心实验室-基层医院”的检测网络，基层医院采集样本，中心实验室集中检测，结果实时反馈；开发“便携式检测设备”（如基于微流控的POCT设备），适用于基层医院；开展“液体活检技术培训班”，提升基层医生对技术的认知与应用能力。临床转化障碍：成本、可及性与医生认知的挑战加强临床证据与指南推广高质量的临床证据是推动临床应用的基础。需开展多中心、大样本的前瞻性研究（如纳入1000例慢性肝病患者），验证液体活检标志物的诊断效能；推动液体活检写入临床指南（如《中国肝纤维化诊断与治疗指南》《亚太肝病学会指南》），明确其在不同场景（如早期诊断、疗效监测）中的推荐等级；通过学术会议、继续教育等方式，向临床医生普及液体活检的最新进展与临床价值。05未来方向与展望：精准医学时代的肝纤维化全程管理未来方向与展望：精准医学时代的肝纤维化全程管理液体活检技术在肝纤维化诊断中的应用仍处于快速发展阶段，未来将在技术创新、多组学整合、临床拓展等方面取得更大突破，推动肝纤维化管理进入“精准化、个体化、全程化”新时代。技术创新：单细胞液体活检与空间多组学的突破当前液体活检主要检测“群体平均水平”，而单细胞液体活检可解析单个细胞的分子特征，实现“单细胞分辨率”的诊断。例如，单细胞测序技术可分离循环肝细胞（CHC）、HSC来源外泌体，分析其基因表达谱，识别“活化HSC亚群”，为肝纤维化分期提供更精准信息；空间转录组学技术可结合组织学定位，分析肝脏微空间中不同细胞的分子互作，揭示纤维化发生的“空间机制”。这些技术将推动液体活检从“群体诊断”向“单细胞诊断”跨越。多组学整合：从“单一标志物”到“多维度分子图谱”肝纤维化是多因素、多阶段、多通路参与的复杂过程，单一组学标志物难以全面反映疾病状态。未来，“多组学整合”将成