再生医学 Western blot 技术员岗位考试试卷及答案

再生医学Westernblot技术员岗位考试试卷及答案一、单项选择题（每题2分，共10题，20分）1.Westernblot中封闭的目的是（）A.增强抗体结合B.减少非特异性结合C.提高蛋白活性D.标记蛋白答案：B2.转膜时常用的膜是（）A.滤纸B.醋酸纤维素膜C.PVDF膜D.玻璃纤维膜答案：C3.用于检测蛋白条带的化学发光底物是（）A.DABB.鲁米诺C.伊红D.苏木精答案：B4.蛋白质样品在进行SDS前需要进行（）处理。A.离心B.加热变性C.透析D.超滤答案：B5.SDS在SDS中的作用是（）A.分离蛋白B.使蛋白带上负电荷C.调节pHD.稳定缓冲液答案：B6.一抗孵育的温度通常是（）A.4℃B.37℃C.25℃D.60℃答案：A7.考马斯亮蓝染色的作用是（）A.检测核酸B.检测蛋白C.检测多糖D.检测脂肪答案：B8.通常用于配制分离胶的试剂是（）A.丙烯酰胺B.甲叉双丙烯酰胺C.A和BD.过硫酸铵答案：C9.Westernblot实验中，加样顺序是（）A.蛋白marker、样品B.样品、蛋白markerC.随意D.先加缓冲液答案：A10.封闭液中常用的成分是（）A.BSAB.葡萄糖C.氯化钠D.乙醇答案：A二、多项选择题（每题2分，共10题，20分）1.Westernblot实验中需要用到的仪器有（）A.电泳仪B.转膜仪C.成像系统D.离心机答案：ABCD2.以下哪些是影响Westernblot结果的因素（）A.抗体质量B.蛋白上样量C.转膜效率D.封闭时间答案：ABCD3.转膜过程中可能出现的问题有（）A.转膜不完全B.膜上有气泡C.电流过大D.缓冲液渗漏答案：ABCD4.用于蛋白上样缓冲液的成分有（）A.SDSB.甘油C.溴酚蓝D.DTT答案：ABCD5.选择一抗时需要考虑的因素有（）A.种属来源B.特异性C.效价D.克隆性答案：ABCD6.二抗选择需要注意（）A.与一抗种属匹配B.标记物C.浓度D.保存条件答案：ABC7.蛋白质样品制备过程中可能用到的方法有（）A.超声破碎B.研磨C.化学裂解D.离心答案：ABC8.SDS胶的组成成分包括（）A.分离胶B.浓缩胶C.缓冲液D.催化剂答案：ABCD9.显色方法有（）A.化学发光法B.底物显色法C.荧光法D.放射性标记法答案：ABC10.Westernblot实验中的对照有（）A.阳性对照B.阴性对照C.空白对照D.内参对照答案：ABD三、判断题（每题2分，共10题，20分）1.Westernblot可以检测蛋白质的表达量和分子量。（）答案：对2.转膜时间越长越好。（）答案：错3.一抗可以反复使用。（）答案：对4.SDS只能分离蛋白质。（）答案：错5.封闭时间过短会导致非特异性条带增多。（）答案：对6.化学发光检测比底物显色检测更灵敏。（）答案：对7.蛋白样品可以长期保存在室温。（）答案：错8.二抗的浓度对结果没有影响。（）答案：错9.考马斯亮蓝染色可以区分不同的蛋白质。（）答案：错10.Westernblot实验中不需要考虑实验环境。（）答案：错四、简答题（每题5分，共4题，20分）1.简述Westernblot的基本原理。答案：利用SDS分离不同分子量蛋白质，通过转膜将凝胶上的蛋白转移到固相膜上，用封闭液封闭膜上非特异性结合位点，依次与一抗、二抗孵育，二抗标记物与底物反应显色，根据条带位置和强度分析蛋白分子量和表达量。2.转膜过程中需要注意哪些问题？答案：要注意膜与凝胶的贴合，避免有气泡；控制好转膜电流和时间，电流过大易发热影响转膜效果，时间不足则转膜不完全；缓冲液要足量且成分正确；转膜装置要安装正确，防止短路。3.如何选择合适的一抗？答案：首先考虑种属来源，确保与待检测样本匹配；关注抗体特异性，保证能准确识别目标蛋白；查看效价，选择效价高的抗体以保证检测灵敏度；还需留意克隆性，单克隆抗体特异性强，多克隆抗体亲和力高，根据需求选择。4.简述SDS在SDS中的作用。答案：SDS即十二烷基硫酸钠，能与蛋白质结合，使蛋白质带上大量负电荷，掩盖其原本电荷性质，消除电荷差异对蛋白质迁移率的影响，使蛋白质在电场中仅依据分子量大小进行分离，从而实现对不同分子量蛋白质的有效分离。五、讨论题（每题5分，共4题，20分）1.若Westernblot结果出现杂带过多，可能的原因有哪些及如何解决？答案：原因可能是封闭不充分，可延长封闭时间或更换封闭液；抗体浓度过高或特异性差，需调整抗体浓度或更换抗体；样本处理不当，有蛋白降解，要优化样本制备流程，加蛋白酶抑制剂。解决时应逐一排查，重新实验验证。2.在Westernblot实验中，内参的作用是什么，如何选择合适的内参？答案：内参用于校正上样量，保证实验结果的准确性和可比性，消除加样误差和蛋白总量差异对结果的影响。选择内参要考虑其在样本中稳定表达，与目标蛋白分子量有差异以便区分，且抗体质量可靠，常用的有GAPDH、β-actin等。3.对比化学发光法和底物显色法在Westernblot中的优缺点。答案：化学发光法优点是灵敏度高，能检测到低表达蛋白，线性范围宽，成像快；缺点是试剂较贵，需暗室操作，发光信号持续时间有限。底物显色法优点是操作简单，成本低，结果可长期保存；缺点是灵敏度低，线性范围窄，背景可能较高。4.如何提高Westernblot实验结果的重复性？