DB51∕T 3303-2025 鹅星状病毒病诊断与防控技术规范

ICS11.220

CCSB41

DB51

四川省地方标准

DB51/T3303—2025

鹅星状病毒病诊断与防控技术规范

2025-09-15发布2025-10-15实施

四川省市场监督管理局发布

DB51/T3303—2025

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4缩略语.............................................................................1

5实验室生物安全措施.................................................................1

6临床诊断...........................................................................2

7实验室诊断.........................................................................2

8鹅星状病毒病综合判定...............................................................3

9防控措施...........................................................................3

附录A（规范性）RNA提取及反转录.....................................................5

附录B（规范性）鹅星状病毒RT-PCR检测................................................6

附录C（规范性）鹅星状病毒RT-qPCR检测...............................................8

参考文献.............................................................................10

I

DB51/T3303—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由四川省农业农村厅提出、归口、解释并组织实施。

本文件起草单位：西南民族大学。

本文件主要起草人：张焕容、杨发龙、张凯、陈果。

II

DB51/T3303—2025

鹅星状病毒病诊断与防控技术规范

1范围

本文件规定了鹅星状病毒病的临床诊断、实验室诊断和防控措施，包括流行特征、临床症状、剖检

病变、分子生物学诊断、病毒分离鉴定等诊断依据，以及预防措施、疫情处置等防控技术。

本文件适用于鹅星状病毒病的诊断、预防和控制。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T45093水禽新型星状病毒病诊断技术

NY/T541兽医诊断样本采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

鹅星状病毒病gooseastrovirusdisease

又称“鹅痛风”，是由鹅星状病毒（GooseAstrovirus,GoAstV）感染雏鹅引发的一种病毒性传染病。

该病毒主要感染1周~3周龄雏鹅，病鹅主要表现为跛行、全身多组织器官表面广泛性尿酸盐沉积。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Ct值：循环阈值（CycleThreshold）

cDNA：互补DNA（ComplementaryDNA）

GoAstV：鹅星状病毒（GooseAstrovirus）

LMH：鸡肝癌细胞系（ChickenHepatomaCellLine）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSalineBuffer）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）

RT-qPCR：实时荧光定量反转录PCR（Real-TimeQuantitativeReverseTranscriptionPCR）

TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸缓冲液(Tris-aceticacid-EDTABuffer)

5实验室生物安全措施

实验操作应在生物安全二级及以上实验室进行，按照GB19489的规定执行。

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6临床诊断

6.1流行特征

病鹅、隐性带毒鹅、带毒种蛋是主要传染源，自然感染潜伏期3d左右，既可垂直传播，也可水平

传播，1月龄以内各品种鹅均易感，最早可在3日龄发病，以5日龄～20日龄最为常见，发病率为60%～90%，

死亡率为30%～50%，严重时可达60%。

6.2临床症状

病鹅精神沉郁，食欲减退或废绝，消瘦，翅下垂，关节肿大，双腿瘫痪倒地，排白色稀便，泄殖腔

周围稀便污染。

6.3剖检病变

患病鹅心、肝、脾、肺、肾、胃肠道等器官表面，各关节周围及关节腔内，甚至血管周围，可见白

色尿酸盐沉积。

6.4临床诊断结果判定

同时符合6.1、6.2和6.3可判定为鹅星状病毒病疑似病例。

7实验室诊断

7.1器材

同GB/T45093。

7.2样品采集与处理

按照NY/T541要求，采集病鹅的泄殖腔棉拭子，或采集死亡鹅及濒死鹅的肝、脾、肾等实质性器官。

棉拭子采集后立即置于含有RNA保存液的离心管中，-20℃或以下保存；实质器官样品取5 g～10 g，置于

RNA保存液中，-20℃或以下保存。所有样品应在48h内完成运输。随后，按照附录A或使用等效的商业

试剂盒提取RNA，并反转录合成cDNA。

7.3RT-PCR检测

以7.2的cDNA为模板，采用附录B规定的方法检测。

7.4RT-qPCR检测

以7.2的cDNA为模板，采用附录C规定的方法检测。

7.5病毒分离培养

7.5.1病毒分离样品的处理

取10g～20g在7.2或7.3中检测为阳性的病死鹅肝、脾、肾等组织样品剪碎，与无菌生理盐水按1:5

（W/V)比例混合并磨碎，反复冻融三次，8000r/m、4℃离心15min后取上清，0.22µm滤膜过滤除菌

后备用。

7.5.2细胞分离病毒

2

DB51/T3303—2025

7.5.2.1LMH细胞准备

当LMH细胞培养至80%汇合度后，备用于病毒分离。

7.5.2.2病毒分离培养

吸弃细胞培养液，用无菌PBS洗涤细胞3次后，将7.5.1处理好的样品1mL接种到25cm2细胞瓶的单

层细胞上，在CO2培养箱中37℃感作，期间每间隔约15min水平轻轻晃动细胞瓶，感作1h后弃去接种液，

添加细胞维持培养液，在CO2培养箱继续培养。连续培养5d，每天观察细胞状态；待细胞液变黄，-80℃

反复冻融3次，经5000r/m离心10min，取上清，其中300μL用于提取RNA并反转录成cDNA后作为模板，

用7.2或7.3的方法检测，其余上清置-80℃保存。

7.5.3鹅胚分离病毒

7.5.3.1鹅胚准备

将鹅星状病毒抗原抗体双阴性的非免疫鹅胚置于孵化器中37℃下孵育至11日龄～13日龄，用于病毒

分离。

7.5.3.2鹅胚接种

取7.5.1中处理的样品液每胚0.5mL接种鹅胚尿囊腔，同时设生理盐水接种对照胚，置于孵化器中

37℃下孵育并每天观察鹅胚2次～3次。弃去24h内死亡鹅胚，其余鹅胚死亡后及时收获胚体和尿囊液。

未死亡鹅胚观察5d后，于4℃冰箱过夜后收获胚体和尿囊液，取300μL尿囊液按附录A提取RNA并反转录

合成cDNA后作为模板，用7.3或7.4的方法检测，其余尿囊液和胚体置-80℃保存。

7.6实验室诊断结果判定

7.6.1结果判定总则

临床样品或经LMH细胞、鹅胚分离的病毒样品，经RT-PCR或RT-qPCR检测，检测过程中必须设置阳性

对照和阴性对照，且对照结果有效，方可对样品检测结果进行判定。符合7.6.2或7.6.3中任一标准，即

可判定为实验室诊断阳性。

7.6.2RT-PCR检测判定标准

扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，出现约330bp的特异性扩增条带，与阳性对照扩增条带片段大小

一致，且阴性对照无扩增条带的，判为阳性。

7.6.3RT-qPCR检测判定标准

样品Ct值小于30.0，扩增曲线典型，熔解曲线在80℃左右出现明显峰值的，判为阳性；

样品Ct值在30.0～35.0之间，若重复双孔检测中任一孔检测阳性，判定为阳性。

8鹅星状病毒病综合判定

病鹅症状与6.1、6.2和6.3中所描述相符或部分相符，且实验室诊断结果阳性者，判定为鹅星状病

毒病。

9防控措施

3

DB51/T3303—2025

9.1预防措施

9.1.1加强饲养管理

减少各种应激因素，如鹅舍温度、湿度突然变化，光照骤变、噪音、惊吓等。避免饲喂发霉和变质

饲料，饲料应易消化，做到蛋白质、维生素和矿物质等的科学搭配。粪便和垫料应及时清理和处理，确

保鹅舍干净卫生，通风良好。

9.1.2日常消毒

应定期对鹅舍、器具、饮水系统和通道进行消毒。常用消毒剂包括酚类、酸类、碱类、含氯制剂、

复合碘制剂和季铵盐类等。人员进出应更换鞋靴，通过消毒池或喷雾方式消毒。

9.2疫情处置

9.2.1隔离

疑似或确诊患病鹅应立即隔离饲养，严禁与健康鹅接触。隔离区设置专人管理，限制人员、车辆进

入隔离区，防止疫情扩散。

9.2.2紧急消毒

对病鹅污染的场所、用具、物品等彻底消毒。对鹅舍地面和粪便沟槽清洁后消毒，可采用3%～5%

的来苏尔溶液喷雾消毒，或用20%的生石灰涂墙和地面消毒。饲养用具、料槽和水槽等可采用5%～10%

的热碱水或3%的苛性钠溶液或3%～5%的来苏尔溶液洗涤消毒，消毒后2h～6h，用清水洗净，待干燥后

方可使用。运动场地清除粪便和杂草后，用5%～10%的热碱水或者撒上生石灰消毒。

9.2.3无害化处理

病死鹅必须按照农业农村部关于《病死及病害动物无害化处理技术规范》进行无害化处理。

4

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A

A

附录A

（规范性）

RNA提取及反转录

A.1Trizol法提取核酸

A.1.1取300µL样品处理液置于1.5mL去酶EP管中，加入700µLTrizol，剧烈混合15s，冰上静置10

min，加入200µL氯仿，剧烈混合15s，冰上静置10min，4℃12000r/m离心15min。

A.1.2取500µL上清液至新的EP管，加入500µL异丙醇，上下颠倒混匀10次，冰上静置10min，4℃12000

r/m离心15min。

A.1.3弃上清，加入1mL75%DEPC冰乙醇洗涤一次，4℃12000r/m离心10min；A.1.4尽量吸除上

清，室温干燥5min~10min，用20µLDEPC水溶解，-80℃保存。

注：也可采用等效的RNA提取试剂盒提取RNA。

A.2反转录

采用商品化试剂盒，反转录反应体系总体积为20µL，具体包括：RNA模板7µL、DEPC处理水6µL、

5×反应缓冲液4µL、反转录酶混合物3µL。将配制好的反应体系置于PCR扩增仪中，按照以下程序进

行反转录反应：25℃10min，55℃15min，85℃5min，4℃保温或立即取出，进行后续检测或-20℃

保存。

5

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B

B

附录B

（规范性）

鹅星状病毒RT-PCR检测

B.1引物（10μmol/L）

B.1.1上游引物F:5'-AAGCCTCTTTTCTGGCGGATAC-3'。

B.1.2下游引物R:5'-GACACAAGCCTATCATCGCCATAG-3'。

B.2鹅星状病毒RT-PCR检测方法及结果判定

B.2.1反应体系及条件

PCR扩增反应体系总体积为30μL，包括2×PCR预混液15μL、上游和下游引物（10μmol/L）各

1μL、cDNA模板3μL，以及无菌ddH2O补足至30μL。各组分于冰上配制并充分混匀后，置于PCR扩增

仪中进行扩增反应。扩增程序为：94℃预变性5min，随后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30s、

62℃退火30s和72℃延伸45s，最终在72℃延伸10min后结束反应。

B.2.2扩增产物电泳检测

B.2.2.11.0%琼脂糖凝胶板的制备及放置：按琼脂糖与1×TAE缓冲液（W/V）配制1.0%浓度的琼脂糖

凝胶，同时依据样品数选用适宜的梳子；将1.0%琼脂糖凝胶倒入放置在水平台面上并插好梳子的凝胶

盘中，胶板厚5mm左右。待凝胶冷却凝固后拔出梳子（胶中形成加样孔），放入电泳槽中，加1×TAE

缓冲液没过胶面。

B.2.2.2加样：取6μL～8μLPCR扩增产物和2μL加样缓冲液混匀后加入一个加样孔。每次电泳同

时设DNA分子质量标准、阴性对照和阳性对照。

B.2.2.3电泳：电压80V～100V或电流40mA～50mA，电泳25min～30min。

B.3试验成立条件

电泳结束后，取出凝胶置于凝胶成像仪（或紫外透射仪）上观察。阳性对照电泳结果应出现约330bp

扩增条带，同时阴性对照无扩增条带。

阳性和阴性对照应成立，否则，检测结果判定为无效。

B.4结果判定

符合8.3的条件，被检样品扩增产物电泳出现约330bp目标条带，则判为鹅星状病毒核酸阳性；若

样品无扩增条带，则为阴性。若对照未达标，则本次检测结果无效，应重新进行实验。

鹅星状病毒RT-PCR检测电泳图如图B.1所示。

6

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标引序号说明：

M——2000bpDNA分子质量标准；

1——阴性对照；

2——阳性病料；

3——阳性对照。

图B.1鹅星状病毒RT-PCR检测判定标准图例

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C

C

附录C

（规范性）

鹅星状病毒RT-qPCR检测

C.1引物（10μmol/L）

C.1.1上游引物F:5'-TGAAGCAACAGACAGAACGG-3'。

C.1.2下游引物R:5'-GGACAGGAAAAAGTAACGCA-3'。

C.2鹅星状病毒RT-qPCR检测方法及结果判定

C.2.1反应体系及条件

RT-qPCR反应体系总体积为20μL，包括2×FastSYBRGreenqPCRMasterMixUDG10μL、上游

和下游引物（10μmol/L）各0.4μL、模板1μL，加入无菌ddH2O补足至20μL。反应体系配制后，混匀

并瞬时离心，置于荧光定量PCR仪中进行扩增。扩增程序设定为：95℃预变性5s，60℃退火30s，共40

个循环。扩增结束后，进行熔解曲线分析，程序为：95℃15s，60℃60s，95℃15s，以验证扩增

产物的特异性。

C.2.2结果判定

C.2.2.1阈值设定

检测结束后，根据收集的荧光曲线和Ct值直接读取检测结果，Ct值为每个反应管的荧光信号达到设

定的阈值时所经历的循环数。阈值设定原则是根据仪器噪音情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性

样品扩增曲线的最高点为准。

C.2.2.2质控标准

阳性对照Ct值<30.0，并出现典型的扩增曲线，熔解曲线于80℃左右出现明显的峰值。

阴性对照无Ct值，且无典型扩增曲线；或阴性对照Ct值>35.0，出现扩增曲线，但熔解曲线于80℃

左右未出现明显的峰值。

阳性和阴性对照应成立，否则，检测结果判定为无效。

C.2.2.3结果描述及判定

样品检测无Ct值；或虽有Ct值，但熔解曲线于80℃左右未出现明显的峰值，判定为阴性。

Ct值<30.