临床免疫学检验知识点总结

临床免疫学检验知识点总结临床免疫学检验依托免疫学原理与技术，对机体免疫状态、疾病标志物及病原体感染等进行精准检测，其结果是疾病诊断、治疗监测及预后评估的核心依据。本文从基础理论、技术方法、核心检测项目及质量控制维度，系统梳理临床免疫学检验的关键知识点，为检验实践与临床决策提供实用参考。一、临床免疫学检验基础理论（一）免疫系统组成免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子协同构成：免疫器官：中枢免疫器官（骨髓、胸腺）负责免疫细胞的发生与分化；外周免疫器官（淋巴结、脾脏、黏膜相关淋巴组织）是免疫应答的“战场”，启动并放大免疫反应。免疫细胞：T细胞（介导细胞免疫，分Th、Tc、Treg等亚群）、B细胞（分泌抗体，主导体液免疫）、NK细胞（天然杀伤肿瘤/病毒感染细胞）、树突状细胞（DC，专职抗原提呈）及单核-巨噬细胞（吞噬、抗原提呈）是核心效应细胞。免疫分子：抗体（IgG、IgM等）、补体（C3、C4等，参与免疫溶解与调理）、细胞因子（如IL-2、IFN-γ，调节免疫应答）及黏附分子（介导细胞间相互作用）共同调控免疫过程。（二）免疫应答类型免疫应答分为固有免疫（天然免疫）和适应性免疫（获得性免疫）：固有免疫是“第一道防线”，通过吞噬细胞、NK细胞及补体快速应答，无抗原特异性，但可启动适应性免疫（如DC提呈抗原）。适应性免疫具有抗原特异性与记忆性，包括：体液免疫：B细胞分化为浆细胞，分泌抗体（如IgG中和毒素、IgM激活补体），清除游离抗原。细胞免疫：T细胞直接杀伤靶细胞（如Tc细胞杀伤肿瘤细胞）或分泌细胞因子（如Th1细胞分泌IFN-γ激活巨噬细胞），清除胞内病原体或肿瘤细胞。（三）抗原与抗体抗原：需同时具备免疫原性（诱导免疫应答）和反应原性（与抗体/致敏淋巴细胞结合），如病原体、肿瘤抗原、自身抗原等。根据来源分为外源性（如细菌）和内源性（如肿瘤细胞）抗原。抗体（免疫球蛋白，Ig）：基本结构为“Y”型，含2条重链和2条轻链，可变区（结合抗原）和恒定区（介导效应功能）决定其特性：IgG：血清含量最高，唯一能通过胎盘，是再次免疫应答的“主力抗体”（如抗HBs），抗感染作用最强。IgM：分子量最大（五聚体），是初次免疫应答的“先锋抗体”，天然血型抗体（如抗A、抗B）多为IgM。IgA：分血清型（单体）和分泌型（sIgA，二聚体），sIgA存在于黏膜分泌物（唾液、乳汁），抵御局部感染（如手足口病病毒）。IgD：主要表达于B细胞表面，参与B细胞活化。IgE：与肥大细胞、嗜碱性粒细胞结合，介导Ⅰ型超敏反应（如过敏原特异性IgE引发哮喘）。二、临床免疫学检验常用技术（一）凝集试验利用抗原-抗体结合导致颗粒性抗原（红细胞、乳胶颗粒）凝集的原理，分为：直接凝集：抗原为颗粒本身，如血型鉴定（红细胞与抗A/抗B抗体凝集）、肥达试验（伤寒杆菌与患者血清凝集，辅助诊断伤寒）。间接凝集：将可溶性抗原/抗体吸附于载体（乳胶、红细胞），如类风湿因子检测（乳胶凝集，RF与IgG包被的乳胶颗粒凝集）、梅毒螺旋体抗体检测（间接血凝）。（二）沉淀试验基于可溶性抗原-抗体结合形成沉淀的原理，适用于小分子抗原/抗体检测：单向琼脂扩散：抗原在含抗体的琼脂中扩散，形成沉淀环，环径与抗原浓度正相关，用于定量检测Ig、补体（如血清IgG定量）。双向琼脂扩散：抗原、抗体分别在琼脂中扩散，相遇形成沉淀线，用于定性分析（如检测ANA的抗原谱）。免疫比浊：抗原-抗体复合物形成导致浊度变化，通过比浊仪定量，如血清蛋白、CRP检测，分为速率法（检测复合物形成速率）和终点法（检测最终浊度）。（三）免疫标记技术通过标记物（酶、荧光素、发光物质）放大信号，提高检测灵敏度：酶联免疫吸附试验（ELISA）：临床最常用，分三种类型：双抗体夹心法：检测抗原（如HBsAg），需包被抗体和酶标抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”夹心。间接法：检测抗体（如抗HBs），包被抗原，加样后用酶标二抗结合。竞争法：检测小分子抗原/抗体（如地高辛、抗药物抗体），通过抗原/抗体竞争结合酶标抗体，信号与待测物浓度负相关。荧光免疫技术：直接法：荧光素标记抗体，直接检测抗原（如检测组织切片中的病原体抗原）。间接法：荧光素标记二抗，用于自身抗体检测（如ANA，通过核型判断疾病类型）。流式荧光技术：多色荧光标记，同时检测多种抗原/抗体（如细胞因子谱分析）。化学发光免疫分析：利用化学发光物质（如鲁米诺）或电化学发光（如三联吡啶钌）放大信号，灵敏度高、线性范围宽，用于激素（如TSH）、肿瘤标志物（如AFP）检测。免疫印迹（WesternBlot）：结合电泳分离与免疫检测，用于确证试验（如HIV抗体确证，通过条带判断特异性抗体）。（四）流式细胞术通过荧光标记抗体检测细胞表面/胞内标志物，分析细胞亚群及功能：临床应用：淋巴细胞亚群分析（CD4/CD8比值，评估免疫缺陷）、白血病免疫分型（通过CD系列抗原区分细胞来源）、造血干细胞计数（CD34+细胞）。三、核心检测项目及临床意义（一）感染性疾病检测病毒性感染：乙肝五项（HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc）：HBsAg阳性提示感染；抗HBs阳性为保护性抗体；“大三阳”（HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性）提示病毒复制活跃；“小三阳”（HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性）多为低复制或非复制期。HIV检测：初筛用ELISA/化学发光，确证用WB，检测抗体（p24、gp41、gp120等条带）。EBV抗体：抗VCA-IgM阳性提示急性感染（传染性单核细胞增多症）。细菌性感染：抗链球菌溶血素O（ASO）：升高提示近期链球菌感染（如风湿热）。结核感染检测：T-SPOT.TB（检测结核特异性T细胞）比结核抗体更特异，用于潜伏结核筛查。（二）自身免疫性疾病检测抗核抗体谱（ANA）：ANA荧光核型：均质型（SLE、药物性狼疮）、斑点型（混合性结缔组织病）、核膜型（SLE）等，结合抗体谱（抗dsDNA、抗Sm、抗SSA）可明确诊断。抗CCP抗体：类风湿关节炎（RA）特异性≥95%，早于RF出现，提示关节破坏风险。自身免疫性肝病：抗平滑肌抗体（ASMA）：自身免疫性肝炎（AIH）标志物，与肝损伤程度相关。抗线粒体抗体（AMA）：原发性胆汁性胆管炎（PBC）特异性抗体，M2型最具诊断价值。（三）肿瘤标志物检测胚胎抗原：AFP（肝癌、生殖腺肿瘤），CEA（消化道肿瘤，辅助判断预后）。糖链抗原：CA125（卵巢癌，也见于子宫内膜异位症），CA19-9（胰腺癌，胆道炎时也可升高）。酶类：PSA（前列腺癌，游离PSA/总PSA比值<0.16提示恶性可能）。（四）变态反应检测特异性IgE检测：通过ImmunoCAP等方法检测食物（如牛奶、花生）、吸入性（如尘螨、花粉）过敏原，指导脱敏治疗。嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）：反映嗜酸性粒细胞活化，辅助诊断哮喘、过敏性鼻炎。（五）移植免疫检测HLA分型：PCR-SSP法检测HLA-A、B、DR等位点，用于器官移植配型（如肾移植需HLA相合）。群体反应性抗体（PRA）：检测受者体内抗HLA抗体，PRA>50%提示高致敏，移植排斥风险高。四、临床免疫学检验质量控制（一）分析前质量控制标本采集：血清标本需避免溶血（红细胞释放过氧化物酶干扰ELISA）、脂血（影响比浊），脑脊液标本需无菌采集。运输与保存：标本应在2~8℃运输，24小时内检测；长期保存需-20℃（短期）或-80℃（长期），避免反复冻融。（二）分析中质量控制试剂与仪器：试剂需在有效期内，新批号需与旧批号平行验证；酶标仪定期校准波长（450nm、630nm），化学发光仪校准光路。室内质控：使用定值质控品（如伯乐、罗氏），绘制Levey-Jennings质控图，采用13s（单次超出±3s）、22s（两次超出±2s）等失控规则，失控时需查找原因（如试剂污染、加样错误）。操作规范：严格执行SOP，移液器定期校准（加样体积误差<5%），避免交叉污染（如ELISA加样后更换吸头）。（三）分析后质量控制结果审核：结合临床信息（