2025年核酸监测相关试题及答案

2025年核酸监测相关试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.核酸检测中，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）的关键步骤不包括以下哪项？A.病毒RNA提取B.逆转录生成cDNAC.引物与模板退火D.抗原抗体结合反应答案：D解析：RT-PCR的核心是通过逆转录将RNA转化为cDNA，再通过PCR扩增。抗原抗体结合是免疫检测（如抗原检测）的原理，与核酸检测无关。2.核酸检测样本采集时，口咽拭子的正确采样部位是？A.舌尖B.上颚C.双侧咽扁桃体及咽后壁D.牙龈答案：C解析：口咽拭子需擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，这些部位是病毒富集的主要区域，采样不准确会导致假阴性。3.用于核酸检测的病毒保存液中，胍盐的主要作用是？A.维持pH稳定B.灭活病毒，保护核酸C.促进细胞裂解D.防止细菌污染答案：B解析：胍盐（如异硫氰酸胍）是强变性剂，可破坏病毒结构使其灭活，同时抑制RNA酶活性，防止核酸降解。4.某实验室使用荧光定量PCR仪检测样本，Ct值为38，对照品Ct值为25（阳性阈值为35），该样本应判定为？A.阳性B.阴性C.灰区需复检D.无效答案：B解析：Ct值（循环阈值）与初始模板量成反比。通常阳性判定标准为Ct≤35，35<Ct≤40需结合其他指标复检，Ct>40一般判定为阴性。本题中样本Ct=38超过35，且无其他阳性证据，故判定为阴性。5.核酸检测实验室的“三区两通道”中，“三区”指的是？A.试剂准备区、样本处理区、扩增分析区B.清洁区、半污染区、污染区C.办公区、实验区、缓冲区D.采样区、检测区、报告区答案：A解析：根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》，核酸检测实验室应严格分区为试剂准备区、样本处理区（含核酸提取）、扩增分析区，各区独立避免交叉污染。6.下列哪种情况会导致核酸检测假阳性？A.样本采集后未及时冷藏B.扩增产物污染C.采样拭子未接触到感染部位D.试剂过期导致灵敏度下降答案：B解析：扩增产物（如PCR产物）是高浓度核酸片段，若污染实验室环境或样本，会导致非目标样本被误判为阳性（假阳性）。其他选项（A、C、D）主要导致假阴性。7.核酸检测中，内参基因（如人RPLP0基因）的作用是？A.验证样本中是否存在抑制剂B.提高检测灵敏度C.区分不同病毒亚型D.减少实验误差答案：A解析：内参基因检测人源管家基因（如RPLP0），若内参Ct值异常（如无扩增或Ct值过高），提示样本采集质量差（如采样量不足）或存在PCR抑制剂（如血红蛋白、黏液），需重新采样检测。8.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的核酸类型是？A.双链DNAB.单链正链RNA（+ssRNA）C.单链负链RNA（-ssRNA）D.双链RNA答案：B解析：冠状病毒属于套式病毒目，基因组为单链正链RNA（+ssRNA），可直接作为mRNA指导蛋白质合成。9.核酸检测试剂的分析灵敏度（LOD）通常指？A.试剂能检测到的最低病毒载量B.试剂在不同样本类型中的检测能力C.试剂对目标序列的特异性识别能力D.试剂在多次检测中的重复性答案：A解析：分析灵敏度（LimitofDetection,LOD）是指试剂能可靠检测到的最低目标核酸浓度，通常以拷贝数/毫升（copies/mL）表示。10.大规模核酸筛查中，混采检测（10:1混样）的适用条件不包括？A.低流行地区B.疑似病例筛查C.常态化监测D.无症状感染者筛查答案：B解析：混采检测适用于低风险、大规模筛查场景（如常态化监测、无症状人群），但疑似病例、密接等高风险人群需单采单检，避免混样导致的假阴性风险。11.核酸检测实验室生物安全等级要求为？A.BSL-1（一级生物安全实验室）B.BSL-2（二级生物安全实验室）C.BSL-3（三级生物安全实验室）D.BSL-4（四级生物安全实验室）答案：B解析：新型冠状病毒属于第二类病原微生物，根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》，其检测应在BSL-2实验室进行，涉及病毒培养时需在BSL-3实验室。12.核酸提取过程中，磁珠法与柱提法的主要区别是？A.磁珠法无需离心，自动化程度更高B.柱提法更适合处理大量样本C.磁珠法对核酸损伤更大D.柱提法提取的核酸纯度更低答案：A解析：磁珠法利用磁珠与核酸的特异性结合，通过磁分离替代离心步骤，更易实现自动化；柱提法需离心过柱，操作步骤多，适合小批量样本。13.某样本核酸检测结果为N基因阳性、ORF1ab基因阴性，最可能的原因是？A.样本中存在其他冠状病毒干扰B.检测试剂N基因引物失效C.样本病毒载量极低，仅部分基因扩增D.实验操作错误导致污染答案：C解析：SARS-CoV-2检测通常需检测两个靶基因（如N、ORF1ab）。若仅一个基因阳性，可能因病毒载量低（低于另一个基因的检测阈值），需结合Ct值、临床症状及复检结果综合判断。14.核酸检测报告的“检测时间”应填写？A.样本接收时间B.PCR扩增结束时间C.报告审核时间D.实验室收到样本后开始检测的时间答案：B解析：根据《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南（第四版）》，检测时间应为PCR扩增结束时间，以确保结果的时效性和可追溯性。15.下列哪项不符合核酸检测质量控制要求？A.每批次检测使用弱阳性对照B.样本提取和扩增区使用紫外灯消毒C.检测人员未进行生物安全培训直接上岗D.定期校准PCR仪温度传感器答案：C解析：检测人员必须经过生物安全培训并考核合格后方可上岗，其他选项（A、B、D）均为质量控制的常规措施。二、多项选择题（每题3分，共30分，少选、错选均不得分）1.核酸检测前处理步骤包括？A.样本编号登记B.样本离心（去除杂质）C.病毒灭活（如56℃30分钟）D.加样至提取仪答案：ABCD解析：前处理包括样本接收登记、离心（去除黏液等杂质）、灭活（生物安全要求）、上样至提取仪等步骤。2.影响核酸检测准确性的因素有？A.采样时机（如发病早期vs恢复期）B.采样人员操作规范C.样本运输温度（如未4℃保存）D.试剂批间差异答案：ABCD解析：采样时机（病毒载量峰值期更易检出）、操作规范（采样深度不足）、运输条件（温度过高导致核酸降解）、试剂质量（批间差异）均会影响结果准确性。3.荧光定量PCR的常用荧光标记方法包括？A.SYBRGreenⅠ（染料法）B.TaqMan探针法C.分子信标法D.胶体金标记法答案：ABC解析：胶体金标记法用于免疫层析检测（如抗原检测），不属于PCR荧光标记方法。4.核酸检测实验室的污染防控措施包括？A.各区严格单向流动（试剂准备区→样本处理区→扩增区）B.使用带滤芯的移液器吸头C.每日检测后用75%酒精擦拭台面D.扩增区与其他区共用离心机答案：ABC解析：扩增区需独立使用设备（如离心机），避免扩增产物污染其他区域，故D错误。5.混采检测（10:1）的注意事项包括？A.混采管需标注所有样本编号B.单管阳性后需对该管10份样本重新单检C.混采样本量需严格一致（如每管10份，每份100μL）D.高风险地区可扩大混采比例至20:1答案：ABC解析：高风险地区需降低混采比例（如5:1或单采），避免假阴性，故D错误。6.核酸检测中，“假阴性”的常见原因有？A.样本中病毒载量低于检测限（如潜伏期早期）B.采样部位错误（如口咽拭子仅擦拭舌头）C.提取过程中核酸丢失（如磁珠未充分结合）D.扩增仪温度校准偏差（如退火温度过高）答案：ABCD解析：病毒载量低、采样错误、提取效率低、仪器误差均可能导致假阴性。7.下列属于核酸检测生物安全要求的是？A.样本处理区佩戴N95口罩、护目镜、双层手套B.实验结束后，废弃样本需高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）C.实验室废水经含氯消毒剂（余氯≥5000mg/L）处理后排放D.检测人员可在样本处理区饮食答案：ABC解析：实验室任何区域禁止饮食，故D错误。8.新型冠状病毒变异株（如XBB）的核酸检测需注意？A.选择覆盖保守区域（如N基因）的检测试剂B.定期评估试剂对变异株的交叉反应性C.变异株出现后需立即更换所有检测试剂D.若检测靶基因（如S基因）在变异株中缺失，可能导致“靶标失败”（TargetFailure）答案：ABD解析：变异株出现后需评估现有试剂的适用性，而非立即更换所有试剂，故C错误。9.核酸检测质量控制的关键环节包括？A.样本采集与运输的规范性B.试剂的存储条件（如-20℃保存的引物避免反复冻融）C.仪器的定期校准（如PCR仪温度均匀性）D.检测结果的双人审核答案：ABCD解析：质量控制需覆盖全流程，包括样本、试剂、仪器、人员操作及结果审核。10.大规模核酸筛查的组织要点包括？A.合理设置采样点（每1000人设置1个采样台）B.采样人员培训（如穿脱防护服、样本保存）C.建立样本转运“绿色通道”（4小时内送达实验室）D.结果反馈时间不超过24小时（急诊样本6小时）答案：ABCD解析：大规模筛查需从采样点设置、人员培训、转运时效到结果反馈全流程优化，确保效率与准确性。三、判断题（每题1分，共10分，正确填“√”，错误填“×”）1.核酸检测中，咽拭子比鼻拭子采样更痛苦，因此鼻拭子更常用。（）答案：×解析：鼻拭子因能采集到更深部的病毒（鼻腔后段），敏感性更高，是高风险人群的首选；口咽拭子痛苦较小，适用于大规模筛查。2.病毒保存液分为灭活型和非灭活型，灭活型保存液可直接用于病毒分离培养。（）答案：×解析：灭活型保存液含胍盐等变性剂，会破坏病毒结构，无法用于病毒分离；非灭活型保存液（如病毒运输培养基）可保留病毒活性，用于培养。3.荧光定量PCR中，Ct值越小，说明样本中初始病毒载量越高。（）答案：√解析：Ct值是PCR扩增达到荧光阈值的循环数，初始模板量越多，达到阈值所需循环数越少（Ct值越小）。4.核酸检测实验室的空气流向应为“污染区→半污染区→清洁区”。（）答案：×解析：为避免污染扩散，空气应从清洁区（试剂准备区）向污染区（扩增区）单向流动，即“清洁区→半污染区→污染区”。5.混采检测中，若10:1混采管结果为阴性，可直接报告该管所有样本阴性。（）答案：√解析：混采管阴性说明管内所有样本均未检出目标核酸，可直接报告阴性；若阳性则需对该管样本重新单检。6.核酸提取完成后，可将提取产物长时间（>2小时）置于室温，不影响后续扩增。（）答案：×解析：提取的核酸（尤其是RNA）易被环境中的RNA酶降解，需及时进行扩增（2小时内）或-20℃保存。7.检测试剂的“批内差异”是指同一批次试剂在不同实验室的检测结果差异。（）答案：×解析：批内差异指同一批次试剂在同一实验室重复检测的结果一致性；不同批次或实验室的差异属于“批间差异”或“实验室间差异”。8.核酸检测报告中需注明检测方法（如“荧光定量PCR”）和检测试剂名称及批号。（）答案：√解析：根据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》，报告需包含检测方法、试剂信息等，确保结果可追溯。9.新型冠状病毒核酸检测中，阴性结果可完全排除感染。（）答案：×解析：阴性结果可能因采样时机（如潜伏期）、操作误差等导致假阴性，需结合流行病学史、临床症状及其他检测（如抗原、抗体）综合判断。10.核酸检测实验室的医疗废物（如防护服、拭子）需分类收集，使用双层黄色医疗废物袋，鹅颈结封装。（）答案：√解析：生物安全实验室的医疗废物需双层包装，鹅颈结封装，防止泄漏，符合《医疗废物管理条例》要求。四、简答题（每题6分，共30分）1.简述RT-PCR检测新型冠状病毒的基本流程。答案：RT-PCR检测流程包括以下步骤：（1）样本采集与处理：使用咽拭子/鼻拭子采集样本，放入病毒保存液中，4℃运输至实验室；（2）样本灭活（可选）：若使用非灭活保存液，需56℃孵育30分钟灭活病毒；（3）核酸提取：通过磁珠法或柱提法从样本中提取病毒RNA；（4）逆转录（RT）：以病毒RNA为模板，逆转录酶催化生成cDNA；（5）PCR扩增：加入特异性引物、探针及PCR反应体系，进行变性（95℃）、退火（55-60℃）、延伸（72℃）循环，实时监测荧光信号；（6）结果分析：根据Ct值判定阳性（Ct≤35）、阴性（Ct>40）或灰区（35<Ct≤40需复检）；（7）报告审核：双人核对结果，生成检测报告。2.列举3种核酸检测质量控制的关键措施，并说明其作用。答案：（1）设置阴/阳性对照：每批次检测加入阴性对照（无核酸模板）和弱阳性对照（接近LOD的核酸），用于监测实验是否存在污染（阴性对照阳性提示污染）或试剂灵敏度（弱阳性对照未检出提示试剂失效）。（2）内参基因检测：检测人源管家基因（如RPLP0），若内参无扩增或Ct值过高，提示样本采集质量差（如采样量不足）或存在PCR抑制剂（如血红蛋白），需重新采样。（3）仪器校准：定期校准PCR仪的温度传感器（如使用温度验证模块），确保变性、退火温度准确，避免因温度偏差导致扩增效率下降（假阴性）或非特异性扩增（假阳性）。3.说明大规模核酸筛查中“10:1混采检测”的优势与潜在风险。答案：优势：（1）提高效率：10份样本混合检测，可将检测通量提升10倍，适用于低风险地区大规模筛查；（2）降低成本：减少试剂、耗材及人力消耗，适合常态化监测；（3）缩短报告时间：批量处理样本，加快结果反馈。潜在风险：（1）假阴性风险：若混采管中某份样本病毒载量极低（接近LOD），混合后浓度被稀释，可能导致Ct值超过阈值（假阴性）；（2）复检成本：混采管阳性需对10份样本重新单检，若阳性率较高（如>1%），复检工作量可能抵消混采优势；（3）样本混淆：混采管需严格标注所有样本编号，操作失误可能导致结果与样本对应错误。4.简述核酸检测实验室生物安全防护的主要要求。答案：（1）实验室等级：新型冠状病毒检测需在BSL-2实验室进行，涉及病毒培养时需在BSL-3实验室；（2）个人防护装备（PPE）：样本处理区需佩戴N95口罩、护目镜/面屏、双层手套、防护服（如一次性隔离衣）；（3）操作规范：样本灭活（非灭活样本需56℃30分钟）、使用生物安全柜（BSC）进行开盖、加样等操作，避免气溶胶扩散；（4）废物处理：医疗废物双层黄色袋封装，高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）后按医疗废物处理；废水经含氯消毒剂（余氯≥5000mg/L）处理后排放；（5）环境消毒：每日检测后用75%酒精或0.2%含氯消毒液擦拭台面，紫外灯照射（30分钟以上）消毒空气；（6）人员培训：检测人员需经过生物安全培训，考核合格后方可上岗，定期进行应急演练（如样本泄漏处理）。5.分析核酸检测结果“N基因阳性、ORF1ab基因阴性”的可能原因及处理建议。答案：可能原因：（1）病毒载量极低：样本中病毒RNA含量仅够N基因扩增（N基因拷贝数高于ORF1ab基因），ORF1ab基因因浓度低于检测限未扩增；（2）检测试剂特异性问题：试剂对ORF1ab基因的引物/探针与病毒变异株不匹配（如变异导致结合位点突变）；（3）实验误差：如加样错误（仅N基因体系加样成功）、扩增仪孔位故障（ORF1ab基因所在孔未加热）。处理建议：（1）复检：使用同一试剂重新检测原样本，若结果一致，需结合临床信息（如症状、接触史）判断；（2）换用不同试剂检测：若其他试剂检测两个基因均阳性，提示原试剂可能存在靶标不匹配；（3）采样复查：若临床高度怀疑感染，重新采集样本（鼻拭子优先）进行检测；（4）变异株监测：若多次出现单基因阳性，需将样本送疾控中心进行全基因组测序，确认是否为变异株（如S基因缺失的奥密克戎亚型）。五、案例分析题（每题10分，共20分）案例1：某社区开展全员核酸筛查，采用10:1混采检测。实验室反馈某混采管结果为阳性（Ct=32），但复核时发现该管10份样本中单检结果均为阴性（Ct>40）。问题：（1）可能导致该现象的原因是什么？（2）实验室应如何处理此类情况？答案：（1）可能原因：①混采管污染：混采管在运输或实验室处理过程中被扩增产物（如其他阳性样本的PCR产物）污染，导致混采管假阳性；②样本交叉污染：采样时，某份样本的拭子接触到其他阳性样本，或混采管加样时移液器未更换吸头，导致污染；③试剂误差：混采检测时试剂灵敏度较高（如LOD=100copies/mL），单检时因试剂批次差异或操作误差，未达到检测限；④样本保存不当：混采管保存时间过长（如超过24小时未检测），病毒RNA降解，单检时无法检出。（2）处理措施：①追溯全流程：检查混采管的采样记录、运输时