汉城细辛叶绿体基因组数据研究

目录中文摘要……………1英文摘要……………3前言……………5文献综述……………6正文……………10分析讨论……………16结论……………17参考文献……………18致谢……………12个人简历……………13摘要目的：汉城细辛是细辛的药用植物来源之一，研究汉城细辛的叶绿体基因组全序列意在补充马兜铃科细辛属药用植物叶绿体基因组的相关信息，丰富叶绿体基因组库，为细辛的鉴定、植物亲缘关系判断、物种进化史、叶绿体农艺性状改良等相关研究打下基础。方法：选用文献查阅的方法。二、选用离心技术对叶绿体DNA进行提取。三、选用以高通量测序法为主对叶绿体DNA进行测序。四、选用MEGA6软件对包括汉城细辛在内的十一种植物建立系统发育树。结果：查阅文献确定了DNA的提取方法（离心技术）、测序方法（以高通量测序法为主）以及建立系统发育树所使用的的软件（MEGA6软件）。以高通量测序法为主进行测序得到汉城细辛叶绿体基因组图谱（详见图一）。使用MEGA6软件对包括汉城细辛在内的11种植物的系统发育分析得到系统发育树图（详见图二）。结论：汉城细辛完整叶绿体基因组长167,293bp，总GC含量为37.90％，总AT含量为62.10％，具有由SSC（21,415bp）和LSC（89,840bp）分开的一对IR（28,019bp）组成的典型四分体结构。汉城细辛cp基因组编码132个独特的基因，包括88个蛋白编码基因，36个tRNA基因和8个rRNA基因，以及41个在IR区复制的基因。选用MEGA6软件对包括汉城细辛在内的11种药用植物进行系统发育分析，汉城细辛与细辛的系统发育位置密切相关，其次为国外的细辛属植物和马蹄香。与图中马兜铃科植物北马兜铃、马兜铃、耳叶马兜铃、宝兴马兜铃、大叶马兜铃、寻骨风关系较远；灯盏细辛距离汉城细辛关系最远。关键词：汉城细辛，叶绿体，基因组

AbstractPurpose：AsarumsieboldiiMiq.f.isoneofthesourcesofAsarumsieboldiiMiq.'smedicinalplants.ThestudyonthecompletesequenceofAsarumsieboldiiMiq.f.'schloroplastgenomeisintendedtosupplementtherelevantinformationofthechloroplastgenomeofAristolochiaceaeandAsarum'smedicinalplants,enrichthechloroplastgenomelibrary,andlayafoundationfortheidentificationofAsarumsieboldiiMiq.f.,thejudgmentofplantrelationship,theevolutionhistoryofspecies,andtheimprovementofchloroplastagronomictraits.Materialandmethod：Methodsofliteraturereview.ThechloroplastDNAwasextractedbycentrifugation.ChloroplastDNAwassequencedmainlybyhigh-throughputsequencing.MEGA6softwarewasusedtoestablishphylogenetictreesof11plantsincludingasarumseouli.Results：LiteraturereviewconfirmedtheextractionmethodofDNA(centrifugaltechnique),sequencingmethod(mainlyhigh-throughputsequencingmethod)andsoftwareusedtoestablishphylogenetictree(MEGA6software).ThegenomemapofKoreanasarumchloroplastwasobtainedbyhigh-throughputsequencing(seefigure1).PhylogenetictreemapwasobtainedbyusingMEGA6softwareforphylogeneticanalysisof11plantsincludingasarumseongata(seefigure2fordetails).Conclusion：AsarumsieboldiiMiq.f.isoneofthemedicinalplantsourcesofAsarumsieboldiiMiq..ThestudyonthecompletesequenceofthechloroplastgenomeofAsarumsieboldiiMiq.f.isintendedtosupplementtherelevantinformationofthechloroplastgenomeoftheAristolochiaceaeandAsarummedicinalplant,enrichthechloroplastgenomelibrary,andlayafoundationfortheidentificationofAsarumsieboldiiMiq.f.,thejudgmentofplantrelationship,theevolutionhistoryofspecies,andtheimprovementofchloroplastagronomictraits.AsarumsieboldiiMiq.f.,Ahhh,completechloroplastgenelength167,293bp,ThetotalGCcontentis37.90%andthetotalATcontentis62.10%,withatypicaltetradstructureconsistingofapairofIR(28,019bp)separatedbySSC(21,415bp)andLSC(89,840bp).TheSeoulasarumcpgenomeencodes132uniquegenes,including88protein-codinggenes,36tRNAgenesand8rRNAgenes,and41genesthatreplicateintheIRregion.MEGA6softwarewasusedforphylogeneticanalysisof11medicinalplantsincludingAsarumsieboldiiMiq.f..AsarumsieboldiiMiq.f.iscloselyrelatedtothephylogeneticlocationofAsarumsieboldiiMiq.,followedbyAsarumsakawanumandSarumahenryi.ItisfarfromtheAristolochiaceae'sAristolochiacontorta,Aristolochiadebilis,Aristolochiatagala,Aristolochiamoupinensis,Aristolochiakaempferi,Aristolochiamollissima,Sarumahenryiinthepicture.ErigeronbreviscapusisthefurthestfromAsarumsieboldiiMiq.f..Keyword：chloroplasts,genomes,AsarumsieboldiiMiq.f.

前言叶绿体是细胞器的一种，存在于植物细胞和真核藻类。大多数叶绿体基因组结构包括四个区域：大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)和逆向重复区A(IRA)、逆向重复区B(IRB)。叶绿体基因组的特点是具相同或相关功能的基因组成复合操纵子结构。这一特点有利于叶绿体基因的表达与调控。通过质体基因工程实验，实验中植物的根和叶表现出较高的耐盐性，到目前为止，转基因作物的耐盐性最高。目前，一些转基因通过叶绿体基因工程获得昆虫和病原抗性、抗旱性、植物修复性、耐盐性、CMS等农艺性状，转基因叶绿体技术已被用于在植物中表达药物蛋白或食用疫苗。汉城细辛是细辛的药用植物来源之一，研究汉城细辛叶绿体基因组完整序列可以丰富叶绿体基因组库，为细辛的鉴定、植物亲缘关系判断、物种进化史、叶绿体农艺性状改良等相关研究提供必要的科学依据。

马兜铃科药用植物叶绿体基因组相关研究1.叶绿体基因组研究进展 1.1结构与特征叶绿体是细胞器的一种，存在于植物细胞和真核藻类。叶绿体作为光合作用的场所，是世界上主要的食物来源，它们维持着地球上的生命。叶绿体中含有叶绿体基因，叶绿体基因组也称为叶绿体DNA(cpDNA)，根据调查表明cpDNA大多是以共价的（covalently）、环状的（circledna）、封闭的（closed）形式保存的(cccDNA)，其DNA双链大小接近噬菌体基因组大小。大多数叶绿体基因组结构包括四个区域：大单拷贝区(LargeSingleCopy，LSC)、小单拷贝区(SmallSingleCopy，SSC)和逆向重复区A(invertedrepeatregionA,IRA)、逆向重复区B(invertedrepeatregionB,IRB)。有些豆科植物只有一套RNA的编码基因，无逆向重复区（IR）[1]。所有的陆地植物的叶绿体基因组，除了几个罕见的之外，在大小、结构、基因含量和基因方面高度保守并具母系遗传的特性；鉴定cpDNA纯度的关键因素为叶绿体内部是否含有5-甲基胞嘧啶[2]。1.2叶绿体基因组测序技术叶绿体基因组首次发现在20世纪60年代，1986年日本名古屋大学基因研究中心陆续发布了双子叶植物烟草（155,941bp）[3]和单子叶植物水稻（134,525bp）[4]的完整叶绿体DNA测序结果。第1代用于测序的技术主要有Sanger[5]发明的双脱氧核糖核酸链末端终止法；第2代测序技术为循环阵列合成测序法也称为高通量测序法，而此测序法的复杂程度、花费的时间与预算等都有待提高；第3代测序技术——直接测序法，将基因组拍段重新排列成基因组探针，其结果更为精准。基因组测序技术的发展，使\t"/item/DNA%E6%B5%8B%E5%BA%8F%E6%96%B9%E6%B3%95/_blank"基因的表达呈现数字化，为后续研究提供坚实基础。2.药用植物叶绿体基因组应用2.1叶绿体基因组的农艺性状改良通过对克服抗昆虫核转基因植物的观察发现：叶绿体转基因植物表达出非常高水平的抗虫性[6]。叶绿体基因组被一种抗菌肽所改造，开发抗细菌和抗真菌植物病原体，由于质体基因组的母系遗传，叶绿体衍生的除草剂抗性克服了核转基因植物的外交的问题。测试叶绿体基因组的可用性，在选择不使用抗生素或在选择过程完成后切除抗生素耐药性基因，这为细胞表达外来基因提供了额外的条件[7]。通过质体基因工程，用胡萝卜进行实验，实验中胡萝卜的根和叶表现出较高的耐盐性，在细胞培养中BADH高度表达，转基因胡萝卜在高浓度的NaCl(高达400him)下生长表达BADH[8]，到目前为止，转基因作物的耐盐性最高，因此有可能培育出健壮的耐旱杂草，并将不受欢迎的多效性性状遗传给相关作物。叶绿体转化还应克服核转化导致外源基因表达水平较低的一些缺点，如通过位置效应或基因沉默抑制基因[9]。目前，一些转基因通过叶绿体基因工程获得昆虫和病原抗性、抗旱性、植物修复性、耐盐性、CMS等农艺性状，转基因叶绿体技术已被用于在植物中表达药物蛋白或食用疫苗[10]。2.2叶绿体是生物制药的反应器第一次观察到叶绿体缺失突变体是在单细胞藻类衣藻中[11]。第一个外源基因的表达是在分离的黄瓜质体[12]和通过粒子轰击的方法在培养烟草细胞的质体[13]和可再生植物组织中观察到的。后来在烟草中观察到，叶绿体表达载体自主复制或通过整合到质体基因组，来稳定表达抗生素耐药基因。[14]叶绿体转基因植物有许多优点，包括生产成本低、储存和运输便捷、热稳定性强等。当治疗性蛋白口服给药时，植物细胞通过生物胶囊保护胃中的抗原，除了发展全身和粘膜免疫外，不需要昂贵的纯化和无菌注射。叶绿体基因工程提供了几个优势，包括高水平的转基因表达、通过母系遗传的转基因拦阻和在单个转化中的多基因表达。叶绿体中的伴侣蛋白和酶促进了复杂的多亚基蛋白的组装，并通过二硫键调节了人类血液蛋白的折叠。叶绿体的功能的派生疫苗抗原和治疗性蛋白质已经被几个化验证明,包括巨噬细胞裂解试验,GM1神经节苷脂绑定化验,应承担的保护海拉细胞或人类肺癌细胞对脑心肌炎病毒,系统性免疫反应,防止病原体的挑战,和增长或抑制细胞培养。[15]因此，转基因叶绿体是理想的生物反应器生产的功能，人类和动物治疗蛋白在环境中友好共存的方式。3.马兜铃科药用植物叶绿体研究进展3.1细辛属（Asarum）细辛（AsarumsieboldiiMiq.）--马兜铃科(Aristolochiaceae)细辛属（Asarum）的药用植物。细辛药用部位是细辛（AsarumsieboldiiMiq.）、辽细辛（AsarumsieboldiiMiq.）、汉城细辛（AsarumsieboldiiMiq.f.）的干燥根及根茎，根状茎直立或横走，其根和根茎具三棱，对温度有抵抗力。其主要药用成分是挥发油，具祛风散寒、温肺化痰、通窍镇痛的作用。可用于治疗鼻塞、鼻窦炎、风湿、齿龈炎、口腔炎、头痛等；是止痛水、牙痛药等中成药的主要原料。细辛中挥发油成分还可刺激头发生长，治疗脱发症状。3.1.1细辛细辛（AsarumsieboldiiMiq.）叶绿体基因组根据第一代测序技术，使用Illumina公司MiSeq平台和高质量成对的叶绿体基因组ca.1.7Gb。测得完整基因组长193,356bp,RefSeq:NC_037190.1,具有典型的三部结构，由大单拷贝区（LSC）和一对逆向重复区(IR)组成。它包括78个蛋白编码基因(protein-codinggenes)，30个rRNA基因，4个tRNA基因。GC总含量为36.2％，AT总含量为63.8％，总识别基因编码112个，其中12个基因在IRs的SSC区中复制。[16]3.1.2辽细辛辽细辛（AsarumsieboldiiMiq.）叶绿体基因组使用MEGA6平台进行系统发育分析。完整基因组序列长159,944bp，GC总含量为38.5%，与SSC(16,677BP)和LSC(88,253bp)形成一个单独的IR(27,261bp)，由四个典型结构组成。有152个独特的基因编码,其中包括103个蛋白质编码基因(protein-codinggenes)，8个rRNA基因，41个tRNA基因。含有两个内含子的ycf3.15基因含有一个基因内区:trnF-AAA,trnY-ATA,trnDATC,psbA,atpF,trnI-TAT,trnN-ATT,rpoC1,rpl2,ycf2,ycf15,ndhB、ndhA、ycf1和rps12。[17]3.2马兜铃属（Aristolochia）马兜铃（AristolochiadebilisSieb.）--马兜铃科(Aristolochiaceae)马兜铃属（Aristolochia）药用植物，草质藤本、攀援植物。马兜铃入药部位为马兜铃（AristolochiadebilisSieb.）和北马兜铃（AristolochiacontortaBge.）的干燥成熟果实[18]；北马兜铃（AristolochiacontortaBge.）的根、茎分别可做为青木香、天仙藤入药。其主要成分为马兜铃酸，使用不当可导致肾衰竭等肾脏疾病。果实作为马兜铃入药，止咳平喘、消痣清肠、清肺平气，是鸡鸣定喘丸的主要原料。3.2.1马兜铃马兜铃（AristolochiadebilisSieb.）测得完整叶绿体基因组为159,793bp是一个典型的四方结构的环状分子，RefSeq:NC_036153.1。具一个大单拷贝区(LSC)89,609bp和一个小单拷贝区(SSC)19,834bp，被一对逆向重复区(IRs)隔开，每个重复序列长度为25,175bp。GC含量为38.3%，每个基因组131个基因中包括85个蛋白编码基因，37个tRNA，8个rRNA和1个伪基因(ycf1)。其中6个蛋白编码基因,7个tRNA基因和所有rRNA基因在IR区域重复。[19]3.2.2北马兜铃北马兜铃（AristolochiacontortaBge.）完整的叶绿体基因组长度为160,576bp，RefSeq:NC_036152.1其结构与马兜铃（AristolochiadebilisSieb.）一致为一个典型的四方结构的环状分子。分为一个大单拷贝区（LSC）89,781bp，一个小单拷贝区(SSC)19,877bp和两个逆向重复区（IRs），每个长度25,459bp。有38.3％的GC碱基对，每个叶绿体中含有18个内含子基因基因组，包括atpF、rpoC1、ycf3、rps12、rpl2、rpl16、clpP、petB、petD、rps16、ndhA、ndhB和6个tRNA。[20]综上所述，通过叶绿体基因工程可以获得昆虫和病原抗性、抗旱性、植物修复性、耐盐性、CMS等农艺性状，转基因叶绿体技术已被用于在植物中表达药物蛋白或食用疫苗生物制药的反应器中，同时叶绿体转基因技术在各领域应用发挥着重要作用。[21]而对于马兜铃科细辛属的叶绿体基因组测序尚未完善，需进一步探究。

正文实验方法文献查阅1.1查阅了叶绿体基因组相关文献，确定了叶绿体测序的必要性。1.2查阅了DNA提取方法的相关文献，确定使用离心技术对叶绿体DNA进行提取。1.3查阅了叶绿体基因组测序方法相关文献，确定使用高通量测序方法进行测序。1.4查阅了建立系统发育树的相关文献，确定使用MEGA6软件对系统发育进行分析并建立系统发育树。汉城细辛叶绿体DNA的提取2.1材料2.1.1样品（汉城细辛AsarumsieboldiiMiq.f）采集地点：辽宁省大洼县样品数量：12.1.2实验仪器台式冷冻离心机（3-18K，Sigma），梯度PCR仪（ApplideBiosysterms），水平电泳槽（Bio-RAD），电泳仪（powerpacuniversal，Bio-RAD），凝胶成像系统（SynGeneGboxF3,GeneCompanyLimited），恒温水浴锅（HH-S型，巩义市予华仪器有限责任公司）。2.1.3试剂2×CTAB提取缓冲液（PH8.0），20╳TAE缓冲液（上海Sangon公司），溴酚蓝染色剂，琼脂糖（Solarbio公司），TaqMasterMix（康为世纪），引物（invitrogen公司），DNALadder2000（近岸蛋白质科技有限公司），其余的试剂皆为分析纯。2.2汉城细辛叶绿体DNA的提取2.2.1取汉城细辛植物新鲜组织约100mg或干重组织约30mg，加入液氮中充分研磨。2.2.2将研磨好的粉末讯速转移至之前准备好的装有700μL65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇使其最终的浓度为0.1％），快速混匀后，把离心管放在65℃水浴1h，水浴过程中要颠倒离心管以混合样品数次。2.2.3加入700μL氯仿，混匀充分，12,000rpm(~13,400×g)进行离心5min。2.2.4将上一步所得上层水相转入新离心管中，加入700μL缓冲液GP2，混匀充分。2.2.5将混匀充分的液体转入吸附柱CB3中，12,000rpm(~13,400×g)进行离心30s，弃去废液。（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心）。2.2.6向吸附柱CB3加入500μL缓冲液GD，12,000rpm(~13,400×g)进行离心30，弃去废液，将吸附柱CB3放入收集管中。2.2.7向吸附柱CB3加入600μL漂洗液PW，12,000rpm(~13,400×g)进行离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。2.2.8重复操作步骤7。2.2.9将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)进行离心2min，弃去废液，将吸附柱CB3置于室温中放置45min，彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。（这一步的目的是去除吸附柱中残余的漂洗液，漂洗液中的乙醇残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验）。2.2.10将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液TE，室温放置5min，12,000rpm(~13,400×g)进行离心2min，将溶液收集到离心管中。（洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过少影响回收效率。洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响，若用ddH₂O做洗脱液应保证PH值在7.0－8.5范围之内，PH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保持在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min,12,000rpm(~13,400×g)进行离心2min）。3.汉城细辛叶绿体DNA的测序3.1基因组组装先使用SOAPdenovo进行初步组装，得到contig序列。再用BLAT将组装得到的长序列定位到近缘物种的叶绿体参考基因组上，得到contig序列之间的相对位置；根据其相对位置对contig进行拼接并校正组装错误，得到叶绿体基因组全长框架图。再使用GapCloser软件用高质量的短序列对框架图序列上的gap进行填补，之后用一代测序对剩余的gap及可疑区域进行补充和确证，再对LSC、SSC、IR区域连接处进行验证，最终得到一条环形的叶绿体基因组完成图序列。3.2基因组注释使用CpGAVAS对叶绿体基因组序列进行注释3.3基因组图谱根据注释结果确定使用OrganellarGenomeDRAW，绘制叶绿体基因组图谱。4.确立构建系统发育树的十一种种植物查阅《中国药典》、《辽宁植物志》、《中国植物志》、《东北植物志》。确定研究以下十一种植物在系统发育上与辽细辛的位置关系（1）北马兜铃（Aristolochiacontorta）NC_036152.1；（2）马兜铃（Aristolochiadebilis）NC_036153.1；（3）耳叶马兜铃（Aristolochiatagala）NC_041455.1；（4）宝兴马兜铃（Aristolochiamoupinensis）NC_041454.1；（5）大叶马兜铃（Aristolochiakaempferi）NC_041452.1；（6）寻骨风（Aristolochiamollissima）NC_041457.1；（7）马蹄香（Sarumahenryi）NC_039933.1；（8）国外的细辛属植物（Asarumsakawanum）AP017908.1；（9）细辛（Asarumsieboldii）NC_037190.1；（10）汉城细辛（Asarumsieboldiinew）（11）灯盏细辛（Erigeronbreviscapus）NC_043882.1。二、实验结果确定实验方法得到DNA的方法，测序方法，系统发育树的方法确定样品为大连市大洼县的汉城细辛新鲜叶片。确定使用离心技术提取汉城细辛叶绿体DNA，并将所得DNA进行鉴别，确定其为汉城细辛叶绿体基因组DNA。确定使用高通量测序方法对汉城细辛叶绿体基因组进行测序、分析得到汉城细辛叶绿体基因组图谱（图一）。确定使用MEGA6软件对包括汉城细辛在内的十一种植物进行植物系统发育分析的方法。使用高通量测序法（主要测序方法）得到的汉城细辛叶绿体基因组图谱（图一）图一汉城细辛叶绿体基因组图谱由图谱得到汉城细辛完整叶绿体基因组长167,293bp，总GC含量为37.90％，总AT含量为62.10％，具有由SSC（21,415bp）和LSC（89,840bp）分开的一对IR（28,019bp）组成的典型四分体结构。汉城细辛cp基因组编码132个独特的基因，包括88个蛋白编码基因，36个tRNA基因和8个rRNA基因，以及41个在IR区复制的基因。使用MEGA6软件对汉城细辛等11种植物建立系统发育树（图二）图二十一种植物系统发育树图注：从上到下依次为植物北马兜铃（Aristolochiacontorta）NC_036152.1；马兜铃（Aristolochiadebilis）NC_036153.1；耳叶马兜铃（Aristolochiatagala）NC_041455.1；宝兴马兜铃（Aristolochiamoupinensis）NC_041454.1；大叶马兜铃（Aristolochiakaempferi）NC_041452.1；寻骨风（Aristolochiamollissima）NC_041457.1；马蹄香（Sarumahenryi）NC_039933.1；国外的细辛属植物（Asarumsakawanum）AP017908.1；细辛（Asarumsieboldii）NC_037190.1；汉城细辛（Asarumsieboldiinew）灯盏细辛（Erigeronbreviscapus）NC_043882.1。由图可得汉城细辛与细辛的系统发育位置密切相关，其次为国外的细辛属植物和马蹄香。与图中马兜铃科植物北马兜铃、马兜铃、耳叶马兜铃、宝兴马兜铃、大叶马兜铃、寻骨风关系较远；灯盏细辛距离汉城细辛关系最远。

分析讨论基因图谱通过高通量测序法得到的基因图谱（图一）显示汉城细辛具有88个蛋白编码基因，这些是已经得到的基因。下一步可以研究这些基因具体的表达过程等内容。并且也得到了汉城细辛的132个独特的编码基因，可以就此研究它的鉴别等相关内容。系统发育树从图二中可以看出在这十一种植物中距离细辛所属马兜铃科药用植物细辛与本次研究的汉城细辛关系最为密切；菊科飞蓬属灯盏细辛与汉城细辛关系最远。可以大致的结合文献看出它的一个进化位置。三、研究意义从文献以及各种资料来看，细辛属植物甚至包括整个马兜铃科药用植物来讲，马兜铃科的叶绿体基因相关信息十分缺少。因此，研究汉城细辛的叶绿体基因组，对补充基因组库很有意义。

结论汉城细辛完整叶绿体基因组长167,293bp，总GC含量为37.90％，具有由SSC（21,415bp）和LSC（89,840bp）分开的一对IR（28,019bp）组成的典型四分体结构。汉城细辛cp基因组编码132个独特的基因，包括88个蛋白编码基因，36个tRNA基因和8个rRNA基因，以及41个在IR区复制的基因。细辛完整叶绿体基因组编码152个独特的基因，包括103个蛋白编码基因，41个tRNA基因和8个rRNA基因，以及44个在IR区复制的基因。1个基因含有2个内含子：ycf3。15个基因含有1个内含子：trnF-AAA，trnY-ATA，trnD-ATC，psbA，atpF，trnI-TAT，trnN-ATT，rpoC1，rpl2，ycf2，ycf15，ndhB，ndhA，ycf1，rps12。[22]使用MEGA6软件对包括汉城细辛在内的11种药用植物的系统发育分析，得汉城细辛与细辛的系统发育位置密切相关，其次为国外的细辛属植物和马蹄香。与图中马兜铃科植物北马兜铃、马兜铃、耳叶马兜铃、宝兴马兜铃、大叶马兜铃、寻骨风关系较远；灯盏细辛距离汉城细辛关系最远。

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