红景天提取条件

目录1111摘要 III31072Abstract IV21639第1章前言 129189第2章文献综述 229422.1红景天简介 2200062.1.1植物介绍 2271732.1.2分布 2303842.1.3主要成分 2189872.2红景天的功效及作用 3215922.3红景天的提取工艺方法 361822.4本文的研究内容 454202.5本文的研究意义 413944第3章实验部分 5298033.1实验原料 5215673.2实验设备与试剂 5107953.2.1实验设备 5166113.2.2试剂 523563.3实验内容 6186923.3.1红景天提取工艺流程 6175953.3.2优选红景天的提取条件 6204303.3.3确定HPLC检测条件 7258233.3.4配制红景天苷标准液 8122893.3.5方法学的考察 8266403.3.6测定提取液中红景天苷的含量 926083.3.7分析结果的计算 916597第4章实验的结果与结果分析 1046144.1红景天提取条件的优选 1067884.2HPLC色谱条件的确定 11149874.3方法学考察 12258284.3.1红景天苷标准曲线的测定 12250264.3.2重复性实验的结果分析 13260764.3.3稳定性实验的结果分析 13240944.3.4精密度实验的结果分析 13188424.3.5加样回收率实验的结果分析 149363第5章结论 1511469参考文献 16PAGEPAGEIV红景天提取条件的优选摘要红景天，景天科大花红景天的入药部分为干燥根和根茎，性寒，味甘、涩关重要的意义。【关键词】提取工艺；红景天苷；正交实验；高效液相色谱法

OptimizationofExtractionConditionsofRhodiolaRoseaAbstractRhodiolaisaplantofthegenusrhodiola,havingdryrootsandrhizomesusedasmedic.Coldnature,sweetastringenttasteHaseffectsinpromotingbloodcirculation,stoppingbleeding,clearinglung,relievingcough,andstoppingbleeding.Modernpharmacologicalresearchshowsthatrhodiolaroseahasanti-fatigue,anti-anoxia,anti-agingandregulatoryandprotectiveeffectsoncardiovascularandcerebrovasculardiseasesandthecentralnervoussystem.Salidrosideisitsmainactiveingredient.Inordertoadapttothelarge-scaleindustrialproductionofrhodiolaroseaincordycepsmilitariszengshantablet,itisofgreatsignificancetooptimizeatestmethodforefficientlyextractingsalidroside,theactiveingredientinrhodiolarosea.Inthispaper,theeffectofethanolconcentrationontheextractionofrhodiolaroseawasstudied.Orthogonalexperimentwasdesigned.Theexperimentalfactorsweresolventdosage,extractiontimeandextractiontimes,respectively.Theextractionamountofdifferentextractionmethodswerecomparedandtheextractionmethodwiththehighestextractionamountwasselected.Themostsuitableextractionconditionswere70%ethanolandthesolid-liquidratiowas1:8.Extractionwasperformedfor2hoursatatimefor3timesintotal.Undertheexperimentalconditions,theextractionamountofrhodiolaroseawas270.50mg.Thecontentdeterminationmethodofsalidrosidewasestablishedandtheextractionconditionsweredetermined.Accuracy,stability,repeatabilityandsamplerecoveryexperimentsareperformedinthismethod.Itisaccurateandfeasibleaboutthismethod.【Keywords】extractionprocess,salidroside,Orthogonaltest,HPLC第第17页前言。红景天为景天科红景天属100种，主产于东北、华北和西南地区。红景天也被认为是开发新型抗疲劳药物，抗缺氧药物和抗衰老药物的重要药用植物[2-4]。中国传统医学的组成是非常复杂的常规方法，例如薄层色谱法不能满足现代中国医学的要求，因为它的精度，准确度，灵敏度和重现的需求。高效液相色谱法是因为它的高效率，稳定性和可靠性传统的中国医药研究中最重要的分析方法。近年来，出现了对高效液相色谱监测中国传统医学的许多研究。因为高效液相色谱法与经典的液相色谱和气相色谱法组合的优势，它们已达到或在效率，选择性和分析方面超过它们。

文献综述红景天简介植物介绍红景天，别名蔷薇红景天，[5]，因有很强的生命力，特殊的适应性，使得其可以在恶劣的环境中生存下去，被称为“高原人参”，“雪山仙草”[1，6-7]。分布[8]多，野生资源尤为丰富，共有70余种[9-12]。主要成分此前，不同种类的红景天中已经可以提取出近50种化学物质[13]；红景天中的主要活性成分为红景天苷，甙元酪醇，\t"/item/%E7%BA%A2%E6%99%AF%E5%A4%A9%E6%8F%90%E5%8F%96%E7%89%A9/_blank"络塞维等物质[14]；此外，红景天还含有13种无机元素，18种氨基酸，它们的根还含有维生素D，维生素E，维生素C，维生素A和维生素B1等[15-16]。红景天苷是红景天中主要的活性成分之一，味甜，溶于水和甲醇，可溶于乙醇，难溶于丙酮，于其他苷类物质溶解性相似，下图是它的化学结构式。红景天属植物中普遍含有的天然苷类物质即为红景天苷[17]，具有消除忧郁，保护心血管，增强免疫力等功效[18]。所以，一般认为红景天属药材中红景天苷含量的多少，是用来评价该属植物药材质量的重要指标之一[19-21]。图2.1 红景天苷分子结构图红景天的功效及作用抗疲劳：红景天提取物可以促进运动时ATP的合成或再合成，有助于环节疲劳，增加体能，从而被认为是理想的抗疲劳物质[22,23]。对从红景天中提取的物质进行了抗疲劳作用的研究，观察到，提取物有效增加长了小鼠的运动时间，使得血清尿素氮含量下降，肝糖原含量上升[24]。抗缺氧：高原反应是高海拔地区的一类常见疾病，病因为对低氧环境的不适应，从而出现呼吸困难，头痛，食欲减退等症状。研究证明红景天可以延长常压下小鼠缺氧的存活时间，并可以缓解垂体和肾上腺皮质系统的变化。也可以降低机体耗氧速度，增加血液载氧能力，将肾上腺功能从衰竭状态恢复到正常水平[25]。增强免疫：红景天对机体提高免疫力起到了辅助作用，研究证明了红景天提取物可以提升免疫功能低下小鼠的免疫力，提高了T淋巴细胞的转化率以及增加吞噬细胞活力，能显著提高脾淋巴细胞对NK细胞的杀伤力[26]。红景天的提取工艺方法因为红景天有着多种对人体有益的药理作用，越来越得到重视。所以，如何更有效的提纯红景天中有效成分的研究尤为重要。超声波提取法：超声波提取法是在溶剂萃取的过程中引入超声波加以辅助，超声波会对混合物进行搅拌，并伴产生高速、强烈的空化效应，使细胞被破坏，提高效率。浸提法：也称液固萃取法，将原料中的某些成分转移至溶剂相中，通过一系列的手段回收有机溶剂，使混合物分离。回流法：回流法指利用挥发性有机溶剂对药材进行提取，对浸提液加热后冷却，重复该过程直至有效成分被完全提取为止。目前更多的研究是由酒精回流进行醇提。本文的研究内容本文以红景天原药材为研究对象，采用醇提的方法，验证了料液比，乙醇浓度，提取时间和提取次数四个因素对红景天苷提取效果的影响，并通过正交实验来得到最使用的的提取红景天苷的方法。建立一种用于高效液相色谱的分析，红景天的测定方法。这种方法的可行性，通过稳定性试验中，精密测试，准确性测试和样品回收试验研究。本文的研究意义红景天的主要入药部位为根和茎，气芳香、味甘、苦，性寒，无毒，具有活血益气，通脉平喘之效。在我国民间已有悠久的药用历史，常用红景天的根茎熬汤或制成药酒饮用，用于消除疲劳，御寒。药理学研究得知，红景天可以抗疲劳、抗缺氧、延缓衰老，同时对心脑血管等有调节和保护作用。目前,单一和复合中成药，如红景天胶囊，以红景天为制药原料的颗粒剂和口服液料，已成为许多制药公司的主要产品。本研究旨在传统的提取方法上，通过优化提取工艺，得出提取效果最佳的条件，为终试大生产提供技术指导，为申报项目提供数据资料，为制定一定的企业标准提供了有力的参考。

实验部分实验原料红景天药材，由指导教师秦爱霞提供。实验设备与试剂实验设备试剂红景天苷标准品，中国食品药品鉴定研究所食用酒精95%，福晨化学试剂厂甲醇，美国Fisher水，纯净水实验内容红景天提取工艺流程采用醇提热回流法进行红景天苷的提取，工艺流程如图所示:优选红景天的提取条件乙醇浓度的考察红景天苷属于糖苷类物质，按苷键原子属于氧苷中的醇苷，苷类物质属于极性比较大的物质，多数苷类物质在水中或在乙醇中溶解较好，有些也可以溶于三氯甲烷或乙酸乙酯。大量的报告已经报道，乙醇提取方法具有更多的提取物和更少的杂质。因此，传统的乙醇回流提取方法来提取红景天。设计50%，70%，90%三个浓度乙醇对红景天药材进行提取，以红景天苷为指标，对乙醇浓度进行初步考察，具体实验方法如下：将红景天药材充分混匀后，取质量相同的3份，重量均为200g，各加入药材8倍量的乙醇，浓度分别为50%，70%，90%，回流2小时进行提取，滤过，对滤液进行减压，回收乙醇（60℃，-0.06Mpa），然后真空干燥（60℃，-0.08Mpa），最后放入干燥器中使之冷却，准确称重，测定红景天苷含量。红景天醇提条件的优选以红景天苷提取量为考察指标，基础为单因素试验，溶剂用量为因素A，提取时间为因素B，提取次数为因素C，选择以上三个因素进行正交试验，设计三因素四水平正交试验，因素水平如下：称取红景天药材9份，每份200g，按照表3.3安排试验，试验安排见下表：确定HPLC检测条件在该实验中，使用安捷伦1100系列高效液相色谱仪。检测器是紫外检测器。通过WondasilC18色谱柱（250×4.6mm，5μm）选择柱，柱温设定在25℃，并使用流动相为甲醇-水相，体积比为15:85，根据《中国药典》2010版中描述的红景天苷检测的色谱条件，将波长设定为275nm，进样体积为5μL，流速为1.000mL/min，通过调整流动相的比例来使其在不同的时间出峰。配制红景天苷标准液称取5.71mg的红景天苷标准品，加入适量甲醇使之溶解，并定容至10mL，即得红景天苷标准溶液，浓度为0.571mg/mL。用配得的红景天苷母液稀释成一系列浓度梯度的红景天苷稀释液。方法学的考察回归方程的测定按照已经得到的色谱条件，对此前配制的红景天苷稀释液进行液相色谱测定，设横坐标（x）为红景天苷标准品溶液浓度、纵坐标（y）为峰面积，对其进行线性回归，得到线性回归方程。重复性实验选取同一批次的5份浓度为0.342mg/mL的红景天苷标准品溶液，测定峰面积，计算相对标准偏差RSD。稳定性实验在给定的色谱条件下，对同一红景天苷样品溶液（0.571mg/mL）分别在0小时、1小时、2小时、4小时、8小时测定其峰面积，将结果代入公式中计算相对标准偏差RSD。精密度实验实验对浓度为0.342mg/mL的对照品溶液进行进样操作，同一对照品重复5次，在给既定谱条件下，测得峰面积，代入如下公式中，计算标准偏差和相对标准偏差，用来检测此仪器的稳定性。（1）（2）加样回收率实验样本回收率是一个重要的质量控制方法和用于判断分析结果的准确性的定量指标。在实验中，有必要确定红景天的回收率并计算RSD值。 测定提取液中红景天苷的含量将红景天进行粉碎，得到红景天粉末，精密称定1.0g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，称定重量，超声30分钟，放至室温后再称定重量，添加甲醇至之前的重量，混合均匀，使用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，进样5μL，测定峰面积，将测得的峰面积代入回归方程中，即得红景天苷的含量。分析结果的计算

实验的结果与结果分析红景天提取条件的优选乙醇浓度考察结果试验结果表明，70%乙醇红景天苷提取量最大，确定用70%乙醇作为提取溶剂。正交实验结果由方差分析表可得，在影响红景天苷的提取结果的因素中，提取次数有着显著影响（P＜0.05），溶剂用量和提取时间的影响并不是很大，在表中可以看出，结果较佳的提取条件为A3B3C3；但直观分析A2≈A3、B2≈B3,结合生产成本等因素考虑，最优的提取条件为A2B2C3，即，1份红景天药材加入8倍量，浓度为70%的乙醇，进行回流提取，每次提取进行2小时，共提取3次。验证试验对优选出的提取条件A2B2C3进行验证试验，结果如下验证试验结果表明：三次红景天苷提取量平均270.50mg，提取工艺稳定，可行。HPLC色谱条件的确定在该实验中，使用C18反相柱，并吸附在柱中的目标物质通常是由极性有机溶剂的一定比例分离。该检测通过HPLC红景天的当前报告经常使用甲醇-水作为流动相。流动相比例和流率是影响在流动相和固定相之间的分配关系的重要因素。最后，甲醇：水=15:85是最好的流动相。在此测试条件下，红景天糖苷的峰是好的，而峰值时间是合适的。红景天苷标准的液相示于图4.1。方法学考察红景天苷标准曲线的测定得到了测定红景天苷含量的线性回归方程，为Y=1161.4x-10.21（n=5，R2=1)。其中X代表红景天苷的浓度（mg/mL），Y代表在275nm时的峰面积。重复性实验的结果分析选择5份红景天苷样品液，在此前测得的最佳HPLC色谱条件下，测得峰面积并计算RSD值，如下。由上表可知，红景天苷样品含量的RSD值为0.39%，可得出结论：该检测方法的重复性结果处于可用范围内。稳定性实验的结果分析对同一红景天苷样品溶液分别在0小时、1小时、2小时、4小时、8小时下，用HPLC法测其峰面积，代入公式中计算相对标准偏差值，结果如下。由上表可知，在8小时内的不同时间测定红景天苷的含量，结果差别不大，基本呈现稳定，RSD值为1.86%。精密度实验的结果分析对同一对照品溶液重复进样5次，使用的对照品浓度为0.342mg/mL，在最佳的HPLC色谱条件下，测定其峰面积，计算相对标准偏差RSD，结果见下表。由上表可知，红景天苷对照品溶液浓度变化基本不大，计算得出了0.10%的相对标准偏差值，可得出结论：该方法的精密度较好。加样回收率实验的结果分析测定红景天苷加样回收率并计算RSD值，见下表。由上表可知，该方法样品的平均回收率为98.92%，相对标准偏差值为0.56%，说明测定结果可信度高，方法可用。

结论本实验通过正交实验与高效液相二者相结合的方法，对红景天苷进行检测，确定了适当的色谱条件，并进行了重复性实验、稳定性实验、精密度实验以及加样回收率实验，由各实验结果可得出结论，这种方法检测红景天苷含量的精密度较高，稳定性较好，有效可行。为了研究乙醇浓度对红景天的提取的效果的影响，设计正交试验。选择料液比(1：6，1：8，1：10)；提取时间(1小时，2小时，3小时)；提取次数（1次，2次，3次）是由三个因素四个水平正交分析来分析。对红景天的最佳醇提取条件如下：乙醇浓度为70％，液料比为1：8，提取3次，每次提取2小时，在此条件下，红景天提取的平均量为270.50mg。

参考文献王珊珊.红景天提取物及其复方抗疲劳活性的研究[D].合肥工业大学,2017.中国科学院中国植物志编委会.中国植物志[M].（34卷）北京：科学出版社，1984：161.王曙，王锋鹏.红景天属植物化学成分研究概述[J].天然产物研究与开发1991，12(3):58-65.姜文华，孟晓婷，郝利铭，等.红景天素抗老化和抗痴呆效应的实验研究[J].白求恩医科大学学报，2001，27(2):127-129冯博，刘震，邢雁伟，等.传统中(藏)药物防治急性高原病研究进展[J].中国中药杂志，2013，38（12）:1876-1880.吴丹.红景天的临床功效和药理作用研究进展[J].中药临床学杂志，2010，2（4）：627-629袁林，吴军林，吴清平.红景天提高缺氧耐受力研究及应用进展[J].食品工业科技，2015，36（23）：376-379巩红冬.青藏高原东缘景天科藏药植物资源调查研究[J].中国中医药信息杂志，2016，23(2)：18-20.罗达尚.中华藏本草[M].北京：民族出版社，1997：110-112.吴征镒，路安民，汤彦承，等.中国被子植物科属综论[M].北京：科学出版社，2003：629-632.杜品.青藏高原甘南藏药植物志[M].兰州：甘肃科学技术出版社，2006：105-304.熊荣先，等.西藏红景天资源的调查[J].华西药学杂志，1995，10(3):187陈纪军，陈金素，陈泗英，等，红景天化学成分[J].云南植物研究，1999，21(4):525-530.倪付勇，陈重，许琼明等.高山红景天化学成分研究[J].中草药，2013，44（7）：798-800.董礼，李磊，廖志华，等.柴胡红景天化学成分研究[J].西北植物学报，2007，27(12):2564-2567.罗定强，赵翔宇，王军宪.小丛红景天化学成分研究[J].中药材，2005，28(2):98-99WuY,PiaoD，HanX,etal.Protectiveeffectsofsalidro