2025 年大学化学生物学（分子生物学实验）试题及答案

2025年大学化学生物学（分子生物学实验）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______一、选择题（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填入括号内）1.在分子生物学实验中，用于提取DNA的常用试剂是（）A.乙醇B.氯仿C.酚D.SDS2.以下哪种技术可用于检测特定基因的表达水平（）A.PCRB.WesternblotC.NorthernblotD.Southernblot3.限制性内切酶切割DNA的位点通常是（）A.随机的B.特定的核苷酸序列C.富含AT的区域D.富含GC的区域4.构建基因表达载体时，常用的启动子是（）A.真核生物启动子B.原核生物启动子C.病毒启动子D.人工合成启动子5.用于蛋白质纯化的亲和层析技术，其原理是利用蛋白质与（）的特异性结合A.配体B.抗体C.金属离子D.分子筛6.在PCR反应中，TaqDNA聚合酶的作用是（）A.解开DNA双链B.合成引物C.延伸DNA链D.识别模板7.以下哪种方法可用于检测蛋白质与DNA的相互作用（）A.EMSAB.GSTpull-downC.Co-IPD.酵母双杂交8.基因克隆中，常用的载体不包括（）A.质粒B.噬菌体C.病毒D.染色体9.实时荧光定量PCR技术可用于（）A.基因定量分析B.基因突变检测C.基因表达谱分析D.以上都是10.蛋白质印迹法中，将蛋白质从凝胶转移到膜上的方法是（）A.电泳B.透析C.虹吸D.电转印二、多项选择题（总共5题，每题5分，每题有两个或两个以上正确答案，请将正确答案填入括号内）1.分子生物学实验中常用的缓冲液有（）A.Tris-HCl缓冲液B.PBS缓冲液C.醋酸缓冲液D.柠檬酸盐缓冲液2.基因工程操作中，常用的工具酶有（）A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.TaqDNA聚合酶D.碱性磷酸酶3.用于核酸分离的方法有（）A.琼脂糖凝胶电泳B.聚丙烯酰胺凝胶电泳C.离子交换层析D.凝胶过滤层析4.以下哪些技术可用于蛋白质的定性分析（）A.SDSB.WesternblotC.质谱分析D.等电聚焦电泳5.基因表达调控的研究方法包括（）A.基因敲除B.RNA干扰C.基因芯片技术D.染色质免疫沉淀技术三、判断题（总共10题，每题2分，请判断对错，对的打√，错的打×）1.分子生物学实验中，所有操作都必须在无菌条件下进行。（）2.PCR反应中不需要引物也能扩增DNA。（）3.限制性内切酶切割后的DNA片段末端一定是平端。（）4.蛋白质的一级结构决定其高级结构。（）5.基因表达载体只能导入原核细胞。（）6.Westernblot可用于检测蛋白质的分子量和表达量。（）7.核酸分子杂交技术只能用于检测DNA。（）8.蛋白质纯化过程中，纯度越高越好。（）9.基因克隆就是将目的基因与载体连接。（）10.实时荧光定量PCR技术比普通PCR技术更准确。（）四、简答题（总共3题，每题15分）1.请简述PCR技术的原理及操作步骤。2.如何构建一个基因表达载体？请说明主要步骤和相关元件的作用。简述蛋白质印迹法（Westernblot）的基本原理和操作流程。五、实验设计题（总共1题，25分）设计一个实验，从细胞中提取总RNA，并检测某一特定基因的表达水平。请详细说明实验步骤、所用试剂及仪器，以及如何分析实验结果。答案：一、选择题1.D2.C3.B4.B5.A6.C7.A8.D9.D10.D二、多项选择题1.AB2.ABCD3.AB4.ABCD5.ABCD三、判断题1.×2.×3.×4.√5.×6.√7.×8.×9.×10.√四、简答题1.PCR技术原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。操作步骤：包括变性、退火、延伸三个步骤的循环。2.构建基因表达载体步骤：首先获取目的基因，然后选择合适的载体，用限制性内切酶切割目的基因和载体，再用DNA连接酶将目的基因与载体连接。载体元件作用：启动子启动转录，终止子终止转录，多克隆位点用于插入目的基因，筛选标记用于筛选阳性克隆。3.Westernblot基本原理：通过电泳将蛋白质按分子量大小分离，然后转移到膜上，用特异性抗体与目的蛋白结合，再通过酶标二抗显色检测目的蛋白。操作流程：样品制备、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色。五、实验设计题实验步骤：细胞收集后用Trizol试剂提取总RNA，经氯仿抽提、异丙醇沉淀等步骤纯化RNA。用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA。以cDNA为模板，用实