2025年核酸检测笔试题及答案

2025年核酸检测笔试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.新型冠状病毒核酸检测中，咽拭子采样的正确操作应避免接触以下哪个部位？A.双侧扁桃体B.咽后壁C.舌头D.悬雍垂答案：C2.采用10:1混采模式时，若某管混采样本检测结果为阳性，后续处理流程中第一步应为？A.立即上报疾控部门B.对该管10名样本单独检测C.重新提取该管核酸并复检D.核查样本采集时间及保存条件答案：D3.核酸提取过程中，若使用磁珠法，关键步骤“结合-洗涤-洗脱”的核心原理是？A.磁珠与核酸的电荷吸附B.磁珠表面硅羟基与核酸的氢键结合C.磁珠对蛋白质的特异性结合D.磁珠对盐离子的中和作用答案：B4.实时荧光PCR检测中，扩增曲线“平台期”未出现的常见原因是？A.模板浓度过高B.引物设计错误C.荧光染料失效D.扩增循环数不足答案：A5.核酸检测实验室生物安全二级（BSL-2）区域中，必须配备的基础防护设备是？A.正压防护服B.生物安全柜C.高压蒸汽灭菌器D.紫外线消毒车答案：B6.新冠病毒ORF1ab基因与N基因同时阳性时，结果判读应为？A.阳性B.弱阳性C.灰区D.无效答案：A7.样本保存液（病毒保存液）的主要成分不包括？A.胍盐（如异硫氰酸胍）B.牛血清白蛋白（BSA）C.EDTAD.Tris-HCl缓冲液答案：B8.核酸检测实验室分区管理中，“扩增产物分析区”与“试剂准备区”之间的压差要求是？A.正压（前者高于后者）B.负压（前者低于后者）C.无压差要求D.动态平衡答案：B9.某样本检测结果显示Ct值为38，且扩增曲线呈“拖尾”现象，最可能的原因是？A.样本中存在PCR抑制物B.引物二聚体干扰C.模板浓度极低D.荧光通道设置错误答案：C10.混采样本采集时，若某受检者已接种新冠疫苗（灭活疫苗），采样时间应至少间隔？A.2小时B.4小时C.6小时D.无特殊要求答案：D（注：灭活疫苗不含活病毒，不影响核酸检测）11.核酸提取仪日常维护中，需重点检查的项目是？A.加样针的液面感应功能B.离心转子的平衡度C.冰箱温度稳定性D.计算机操作系统版本答案：A12.实验室质量控制中，“室内质控”的核心目的是？A.验证检测系统的准确性B.确保不同实验室结果可比性C.监控检测过程的稳定性D.评估操作人员的技术水平答案：C13.核酸检测报告中，“未检出”的规范表述应为？A.阴性B.新冠病毒核酸检测结果阴性C.未检测到新冠病毒核酸D.检测结果正常答案：B14.运输4℃保存的核酸样本时，若运输时间超过48小时，应采取的措施是？A.加入冰袋维持2-8℃B.冷冻至-20℃运输C.立即离心后分离血清D.无需特殊处理答案：B15.某实验室连续3次检测同一阳性对照品，Ct值均比预期高3-5个循环，最可能的原因是？A.对照品保存不当（反复冻融）B.扩增程序中退火温度过高C.移液器校准偏差（吸液量不足）D.荧光激发光强度衰减答案：C二、多项选择题（每题3分，共30分。每题至少2个正确选项，错选、漏选均不得分）1.咽拭子采样时，可能导致假阴性的操作包括？A.采样前30分钟受检者饮水B.拭子仅接触舌面未到达咽后壁C.拭子在咽部停留时间不足5秒D.采样后立即将拭子浸入保存液答案：BC2.核酸检测实验室“三区两通道”中的“三区”指？A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增分析区D.消毒清洗区答案：ABC3.实时荧光PCR检测中，“内标”的作用包括？A.监测样本采集是否合格（如是否含人类细胞）B.排除PCR抑制物干扰C.提高检测灵敏度D.验证扩增效率答案：ABD4.生物安全柜使用时需遵循的规范包括？A.操作前开机运行10分钟B.物品摆放遵循“清洁区→污染区”单向原则C.手臂进出时避免快速移动D.操作结束后立即关闭电源答案：ABC5.核酸检测结果复核的适用场景包括？A.单基因阳性（如仅ORF1ab阳性）B.Ct值≥35的弱阳性样本C.同一受检者前后两次检测结果矛盾D.混采管初筛阳性答案：ABCD6.样本运输过程中需记录的关键信息有？A.运输起始时间与到达时间B.运输温度（实时监测数据）C.运输人员姓名及联系方式D.样本数量及编号答案：ABD7.实验室发生离心管破裂（样本泄漏）时，应急处理步骤包括？A.立即停止离心，待转子完全静止后开盖B.佩戴双层手套、护目镜清理泄漏物C.用0.55%含氯消毒液覆盖污染区域30分钟D.更换离心转子后继续使用答案：ABC8.影响PCR扩增效率的因素包括？A.引物/探针的特异性B.dNTP浓度C.Taq酶的热稳定性D.模板的纯度答案：ABCD9.核酸检测质量控制品应具备的特性是？A.基质与检测样本相似（如咽拭子保存液）B.靶标浓度覆盖检测线性范围C.稳定性（-20℃保存6个月无降解）D.含高浓度人类基因组DNA答案：ABC10.混采检测中，“20:1”模式相比“10:1”模式的优势与风险分别是？A.提高检测效率B.降低单个样本检测成本C.假阳性风险增加D.对检测灵敏度要求更高答案：ABD三、判断题（每题1分，共10分。正确填“√”，错误填“×”）1.核酸检测样本采集时，若受检者出现咳嗽，应立即停止采样并更换拭子。（×）（解析：咳嗽不影响采样，需避免拭子触碰其他部位。）2.病毒保存液（含胍盐）可灭活病毒，因此样本处理区无需在生物安全柜中操作。（×）（解析：胍盐虽灭活病毒，但样本可能含其他病原体，仍需在生物安全柜中处理。）3.实时荧光PCR仪的“ROX”通道用于校正孔间荧光信号差异。（√）4.核酸提取完成后，若暂不检测，可将DNA/RNA置于4℃保存24小时。（√）5.实验室分区标识仅需在入口处张贴，区域内无需重复标注。（×）（解析：分区标识需在每个区域入口及关键位置明确标注。）6.混采管阳性时，只需对该管10名受检者重新采样检测，无需复核原管。（×）（解析：需先复核原管，排除检测误差后再重新采样。）7.扩增产物分析区的空气流向应为“非污染区→污染区”。（√）8.移液器校准周期为6个月，若使用频率低可延长至12个月。（×）（解析：校准周期需严格遵循设备说明书，一般不超过12个月，高频使用需缩短。）9.检测结果为“阴性”时，报告中无需注明“仅对本次检测样本负责”。（×）（解析：所有检测报告均需注明责任范围。）10.实验室废弃的一次性防护服应作为“感染性废物”，使用双层黄色医疗垃圾袋封装。（√）四、简答题（每题6分，共30分）1.简述核酸检测中“假阳性”的常见原因及预防措施。答案：常见原因：①扩增产物污染（气溶胶扩散）；②样本交叉污染（加样时吸头带液）；③试剂污染（阳性对照或标准品混入其他区域）；④仪器污染（扩增仪孔间残留）。预防措施：①严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区物理隔离）；②使用带滤芯吸头；③定期清洁实验室（紫外线照射+含氯消毒液擦拭）；④设置阴性对照（水对照、空白对照）；⑤使用UNG酶（尿嘧啶-N-糖基化酶）降解含dUTP的扩增产物。2.请列出咽拭子采样的标准操作步骤（需包含关键细节）。答案：①准备：核对受检者信息，佩戴N95口罩、手套、护目镜，打开采样管并固定；②采样：受检者头后仰，张口发“啊”音（必要时用压舌板），将拭子越过舌根，快速擦拭双侧扁桃体及咽后壁（各2-3次）；③处理：拭子避免触碰口腔其他部位，立即将拭子头浸入病毒保存液，折断拭杆（保留1cm在管内），旋紧管盖；④记录：标注样本编号、采集时间，放入密封袋。3.实时荧光PCR检测中，如何通过扩增曲线判断结果有效性？答案：①有效曲线：指数期明显（斜率≥1.5），平台期平稳（荧光值≥阈值线2倍），Ct值在15-38之间（根据试剂说明书调整）；②无效曲线：无指数期（Ct值无）、平台期未形成（Ct值＞40）、曲线呈“锯齿状”（仪器信号干扰）、引物二聚体（Ct值＜15且荧光值低）；③需复检的情况：单基因阳性、Ct值接近灰区（如35-40）、曲线形态异常但Ct值在有效范围内。4.简述核酸检测实验室“室内质控”的具体内容及频率。答案：内容：①阳性对照（覆盖检测线性范围的低、中、高浓度）；②阴性对照（无核酸模板的水对照）；③内标对照（监测样本质量及抑制物）；④重复性测试（同一份样本重复检测3次，Ct值偏差≤1.5）。频率：每批次检测需包含阴、阳性对照；内标对照随样本同步检测；重复性测试每工作日至少1次；异常结果时增加质控频率。5.混采样本检测中，若某20:1混采管初筛阳性，后续处理流程是什么？答案：①复核原管：使用原管核酸重复检测，确认是否为检测误差；②若复核阳性，收集该管20名受检者信息（姓名、联系方式、采样时间）；③单采复检：对20名受检者单独采集咽拭子（1:1检测），同时采集原混采管对应的受检者咽拭子（用于溯源）；④结果上报：单采阳性者立即上报疾控部门，启动流调；⑤记录归档：保存原管核酸、单采样本、检测记录至少3个月。五、案例分析题（每题10分，共20分）案例1：某实验室在常规检测中发现，连续3天检测的“弱阳性样本”（Ct值35-38）数量较平时增加3倍，且这些样本均来自同一社区采样点。问题：（1）可能的原因有哪些？（2）应采取哪些排查措施？答案：（1）可能原因：①采样操作不规范（如拭子未接触咽后壁，样本量不足）；②样本保存不当（运输时间过长，保存温度高于8℃）；③采样拭子质量问题（吸附能力差）；④检测试剂灵敏度下降（批次间差异）；⑤社区实际感染率上升（需结合流行病学判断）。（2）排查措施：①调取该社区采样点视频，核查采样人员操作（是否接触正确部位、停留时间）；②检查样本运输记录（起始时间、温度监测数据）；③更换该批次采样拭子，用已知阳性样本验证吸附能力；④使用同一批弱阳性样本，用不同品牌试剂复检；⑤联系疾控部门，统计该社区近期新增病例及密接情况；⑥对实验室环境进行污染排查（扩增区空气采样、设备表面拭子检测）。案例2：某实验室夜间检测时，一台实时荧光PCR仪突然断电，重启后显示“温度模块故障”，此时已有100份样本完成核酸提取，等待上机。问题：（1）可能造成的影响是什么？（2）应如何处理以减少损失？答案：（1）影响：①已提取的核酸（RNA）易降解（室温放置超过2小时降解率＞50%）；②若仪器短