2025年大学生物化学与分子生物学（蛋白提取）试题及答案

2025年大学生物化学与分子生物学（蛋白提取）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共40分）每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内。(总共20题，每题2分，每题给出的选项中，只有一项是符合题目要求的)1.以下哪种方法常用于蛋白质的粗提取？（）A.亲和层析B.离子交换层析C.盐析D.凝胶过滤层析2.在蛋白质提取过程中，为了保持蛋白质的活性，通常需要控制以下哪个条件？（）A.温度B.溶液pH值C.离子强度D.以上都是3.蛋白质提取时，破碎细胞的常用方法不包括（）A.超声破碎B.研磨C.离心D.酶解4.盐析法沉淀蛋白质的原理是（）A.中和电荷，破坏水化膜B.调节蛋白质溶液pH值到等电点C.降低蛋白质溶液的介电常数D.与蛋白质结合成不溶性蛋白盐5.以下哪种试剂可用于去除蛋白质溶液中的核酸杂质？（）A.蛋白酶KB.氯仿C.乙醇D.硫酸铵6.蛋白质提取过程中，透析的目的是（）A.去除小分子杂质B.浓缩蛋白质溶液C.分离不同分子量的蛋白质D.改变蛋白质的构象7.对于等电点为7.0的蛋白质，在pH为6.0的缓冲液中，该蛋白质带（）电荷。A.正B.负C.中性D.不确定8.以下哪种层析技术是根据蛋白质的分子量大小进行分离的？（）A.离子交换层析B.亲和层析C.凝胶过滤层析D.疏水层析9.在蛋白质提取中，加入蛋白酶抑制剂的目的是（）A.防止蛋白质被氧化B.抑制核酸酶的活性C.保护蛋白质不被蛋白酶降解D.促进蛋白质的溶解10.蛋白质提取时，使用的缓冲液中通常需要加入一定浓度的（）来维持溶液的渗透压。A.氯化钠B.蔗糖C.甘油D.尿素11.以下哪种方法可用于检测蛋白质提取液中蛋白质的浓度？（）A.紫外分光光度法B.荧光定量法C.高效液相色谱法D.以上都可以12.蛋白质提取过程中，超滤的作用是（）A.去除大分子杂质B.浓缩蛋白质溶液C.分离不同电荷的蛋白质D.改变蛋白质的活性13.对于富含二硫键的蛋白质，在提取时可加入以下哪种试剂来防止二硫键的氧化？（）A.巯基乙醇B.二硫苏糖醇C.还原型谷胱甘肽D.以上都是14.蛋白质提取时，选择缓冲液的pH值主要依据（）A.蛋白质的等电点B.提取方法C.实验目的D.以上都不是15.以下哪种层析技术可特异性地分离与配体结合的蛋白质？（）A.离子交换层析B.亲和层析C.凝胶过滤层析D.疏水层析16.在蛋白质提取中，加入去污剂的目的可能是（）A.破坏细胞膜结构，释放蛋白质B.增加蛋白质的溶解度C.防止蛋白质聚集D.以上都是17.蛋白质提取过程中，离心的主要作用是（）A.分离细胞碎片和蛋白质溶液B.浓缩蛋白质溶液C.改变蛋白质的构象D.去除蛋白质溶液中的小分子杂质18.对于热稳定的蛋白质，可采用以下哪种方法进行提取？（）A.加热提取B.高温灭菌后提取C.常温提取D.低温提取19.蛋白质提取时，使用的缓冲液中加入EDTA的目的是（）A.抑制核酸酶的活性B.防止金属离子对蛋白质的影响C.调节溶液的pH值D.增加蛋白质的溶解度20.以下哪种方法可用于蛋白质的初步纯化，去除大部分杂质蛋白？（）A.离子交换层析B.亲和层析C.盐析D.凝胶过滤层析第II卷（非选择题，共60分）(总共5题，每题12分，答题要求：请根据题目要求，详细作答，阐述原理及过程等)21.请简述盐析法提取蛋白质的原理及操作步骤。22.蛋白质提取过程中，如何选择合适的缓冲液？23.说明亲和层析法分离蛋白质的原理，并举例说明其应用。24.材料：从某植物叶片中提取蛋白质，已知该植物叶片细胞中含有较多的色素。请设计一个蛋白质提取方案，包括主要步骤及注意事项。25.材料：现有一种新发现的蛋白质，其等电点为5.5，分子量约为50kDa。请设计一个从细胞中提取并初步纯化该蛋白质的实验方案。答案1.C2.D3.C4.A5.B6.A7.A8.C9.C10.A11.D12.B13.D14.A15.B16.D17.A18.A19.B20.C21.盐析法提取蛋白质的原理是通过加入高浓度的中性盐，使蛋白质在溶液中的溶解度降低而沉淀析出。操作步骤：首先将蛋白质样品溶解在适量的缓冲液中，然后缓慢加入硫酸铵等盐类，边加边搅拌，使盐浓度逐渐升高。达到一定盐浓度后，蛋白质会沉淀下来，通过离心收集沉淀的蛋白质。之后可根据需要对沉淀的蛋白质进行复溶等后续处理。22.选择合适的缓冲液需要考虑以下因素：一是根据蛋白质的等电点，使缓冲液pH值远离蛋白质的等电点，以保证蛋白质处于稳定的带电状态；二是要考虑缓冲液的离子强度，避免过高或过低影响蛋白质的稳定性和活性；三是缓冲液不能与蛋白质发生化学反应；四是要根据提取方法和实验目的选择合适的缓冲体系，如含有特定离子或添加剂有助于蛋白质的溶解、保护等。23.亲和层析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质与配体之间的特异性亲和力。配体固定在层析介质上，当含有目标蛋白质的样品通过层析柱时，目标蛋白质与配体特异性结合，而其他杂质蛋白则不结合直接流出。然后通过改变洗脱条件，如改变pH值、离子强度或加入竞争配体等，使目标蛋白质与配体解离，从而被洗脱下来。例如，利用抗原与抗体的特异性结合可分离特定的抗原蛋白。24.首先将植物叶片剪碎，加入适量含有蛋白酶抑制剂的缓冲液，采用研磨或超声破碎等方法破碎细胞。然后加入氯仿等试剂去除色素。接着进行离心，取上清液。向上清液中加入硫酸铵进行盐析，沉淀蛋白质。离心收集沉淀后，用适量缓冲液复溶蛋白质，再通过透析去除小分子杂质，得到初步提取的蛋白质。注意事项：操作过程中要尽量保持低温，防止蛋白质变性；所用试剂要纯净，避免引入杂质；各步骤要轻柔操作，防止蛋白质损失。2先将细胞破碎，可采用超声破碎、研磨等方法。破碎后的细胞悬液加入含有合适pH值缓冲液（pH值略高于5.5），并加入蛋白酶抑制剂。然后进行