CN108083989B 一种高纯度大麻二酚的制备方法 （烟台汉麻生物技术有限公司）

(12)发明专利(65)同一申请的已公布的文献号(73)专利权人烟台汉麻生物技术有限公司地址264670山东省烟台市高新区科技大道39号(72)发明人曲桂武崔明审查员王博一种高纯度大麻二酚的制备方法本发明属于医药化工领域，具体涉及一种高纯度大麻二酚的制备方法，其特征在于，以大麻的叶及植株顶部约占整株植株五分之一的部分为提取部位，采用大孔吸附树脂柱层析与聚酰胺柱层析联用技术进行纯化，采用混合溶剂体系进行结晶精制，从而保证在获得高纯度产品的前提下最大程度提高收率。按本发明提供的方法所得21.一种高纯度大麻二酚的制备方法，包括以下步骤：①溶剂提取：将大麻的提取部位晒干后粉碎成最粗粉，以95%乙醇为溶剂提取三次，每次溶剂用量为10～20倍量；合并提取液并过滤，50℃~70℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至室温；②大孔吸附树脂层析与聚酰胺层析联用：第一步柱层析采用大孔吸附树脂为层析介质，柱负载量为3～10g药材/mL树脂；先用45~55%的乙醇洗脱5～10个柱体积洗去大部分极性大的杂质，再用80～95%的乙醇洗脱3~5个柱体积洗脱目标成分；收集富含目标成分的洗脱液，50℃~70℃减压脱醇至溶液稍显浑第二步柱层析采用聚酰胺吸附树脂为层析介质，柱负载量为30～50mg大麻二酚/mL树脂；先用30～50%的乙醇洗脱3～5个柱体积去除杂质，再用50～80%的乙醇洗脱3～5个柱体积洗脱目标成分；收集富含目标成分的洗脱液，50℃~70℃减压浓缩至稠膏；③混合溶剂结晶精制：将稠膏溶于混合溶剂体系，制成大麻二酚饱和溶液，静置，得无比为1～5:1的比例组成；所述A为环己烷或正己烷，所述B为乙醇或甲醇；采用大孔吸附树脂柱层析与聚酰胺柱层析联用，其中所采用的大孔吸附树脂为HPD-2.根据权利要求1所述的高纯度大麻二酚的制备方法，其特征为：提取部位为大麻的叶及植株顶部占整株植株五分之一的部分。3技术领域[0001]本发明属于医药化工领域，具体涉及一种高纯度大麻二酚的制备方法。背景技术[0002]大麻CannabissativaLinn.是大麻科(Cannabinaceae)大麻属CannabisLinn.一年生草本植物，其成熟的雌株花、叶及茎制品称Marijuana。目前从植物大麻中分离出的大麻素(cannabinoids,CBs)已有80多种，主要包括四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol,THC)、大麻二酚(cannabidiol,CBD)、大麻酚(cannabinol,CBN)及大麻萜酚[0003]THC是大麻中重要的活性成分之一，具有良好的神经保护作用，并可用于治疗癌症引起的呕吐，但由于具有致幻作用，因此，只有那些生长期内花、叶中THC含量低于0.3%的大麻品种(即工业大麻)才被允许种植。[0004]20世纪40年代从大麻中分离得到的CBD是大麻中的另一种重要活性成分，也是大麻中重要的非成瘾性活性成分。体内实验发现CBD不但能拮抗THC激动大麻素I型受体作用，是一种在医药、食品领域极具应用前景的天然活性成分。[0005]尽量去除THC等具有致幻及成瘾作用成分，获取高纯度产品，是CBD开发应用的前CN105535111A分别公开了采用超临界或亚临界萃取技术制备富含CBD的火麻油或火麻浸膏的方法；CN107011125A公开了一种大麻二酚的方法，具体工艺包括二氧化碳超临界萃取得大孔吸附树脂、MCI树脂或十八烷基键合硅胶等，结晶溶剂为乙醇。[0006]植物大麻中酚类成分复杂，极性相似的成分较多，因此上述方法，即使是CN106831353A中采用乙醇结晶的工艺制备CBD,产品中也仍可检出THC等致幻或成瘾性成发明内容[0007]为解决上述技术问题，本发明提供一种高纯度CBD的制备方法，按该方法制备的产品，CBD纯度达98%以上，且THC仅痕量检出或未检出。[0008]本发明所提供的一种高纯度CBD的制备方法，其技术方案包括以下步骤：[0009]①溶剂提取：将大麻的提取部位晒干后粉碎成最粗粉，以95%乙醇为溶剂提取三次，每次溶剂用量为10～20倍量。合并提取液并过滤，50℃~70℃减压脱醇至溶液稍显浑4[0010]本发明中，溶剂提取所采用的提取部位是指大麻的叶及植株顶部约占整株植株五分之一的部分。[0012]第一步柱层析采用大孔吸附树脂为层析介质，柱负载量为3～10g药材/mL树脂。先用45～55%的乙醇洗脱5～10个柱体积洗去大部分极性大的杂质，再用80～95%的乙醇洗脱3～5个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，50℃~70℃减压脱醇至溶液[0013]上述第一步柱层析富集CBD,所采用的大孔吸附树脂包括但不仅限于HPD-417、[0014]第二步柱层析采用聚酰胺吸附树脂为层析介质，柱负载量为30～50mgCBD/mL树脂。先用30～50%的乙醇洗脱3～5个柱体积去除杂质，再用50～80%的乙醇洗脱3～5个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，50℃~70℃减压浓缩至稠膏。[0016]上述结晶所采用的混合溶剂体系由A(环己烷或正己烷)与B(乙醇或甲醇)按(1~5):1(V/V)的比例组成。[0017]大孔吸附树脂层析与聚酰胺层析均是工业化生产中经常采用的分离纯化技术，但二者分离天然化合物的原理不同，在分离效果上可以互为补充。本发明将二者联用，去杂效[0018]本发明采用混合溶剂作为结晶溶剂，其目的是调节溶剂极性，在最大程度地形成CBD的过饱和溶液的同时尽量增大THC等杂质的溶解度，在保证产品纯度的同时提高结晶的附图说明[0019]图1是按本发明所提供的方法制备的CBD的液相色谱图。具体实施方式[0021]下面的实施例用以解释本发明，但是并非对本发明实质内容的限制。[0022]实施例1.高纯度CBD的制备[0023]①溶剂提取：取大麻顶部约占整株植株五分之一的部分，晒干后粉碎成最粗粉，以95%乙醇为溶剂提取三次，每次溶剂用量为10倍量。合并提取液并过滤，50℃减压脱醇至溶[0024]②两步柱层析：[0025]第一步柱层析：采用HPD-417型大孔吸附树脂为层析介质，柱负载量为5g药材/mL树脂。先用45%的乙醇洗脱7个柱体积洗去大部分极性大的杂质，再用85%的乙醇洗脱5个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，50℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至[0026]第二步柱层析：采用聚酰胺吸附树脂为层析介质，柱负载量为30mgCBD/mL树脂。5先用30%的乙醇洗脱3个柱体积去除杂质，再用80%的乙醇洗脱3个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，50℃减压浓缩至稠膏。[0027]③混合溶剂结晶：将稠膏溶于混合溶剂体系(环己烷：乙醇=3:1,V/V),制成CBD饱[0028]实施例2.高纯度CBD的制备[0029]①溶剂提取：取大麻顶部约占整株植株五分之一的部分，晒干后粉碎成最粗粉，以95%乙醇为溶剂提取三次，每次溶剂用量为15倍量。合并提取液并过滤，60℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至室温。[0030]②两步柱层析：[0031]第一步柱层析：采用HPD-450型大孔吸附树脂为层析介质，柱负载量为3g药材/mL树脂。先用55%的乙醇洗脱5个柱体积洗去大部分极性大的杂质，再用95%的乙醇洗脱3个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，60℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至室温；[0032]第二步柱层析：采用聚酰胺吸附树脂为层析介质，柱负载量为50mgCBD/mL树脂。先用50%的乙醇洗脱3个柱体积去除杂质，再用75%的乙醇洗脱5个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，60℃减压浓缩至稠膏。[0033]③混合溶剂结晶：将稠膏溶于混合溶剂体系(正己烷：甲醇=3:1,V/V),制成CBD饱[0034]实施例3.高纯度CBD的制备[0035]①溶剂提取：取大麻顶部约占整株植株五分之一的部分，晒干后粉碎成最粗粉，以95%乙醇为溶剂提取三次，每次溶剂用量为20倍量。合并提取液并过滤，70℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至室温。[0036]②两步柱层析：[0037]第一步柱层析：采用AB-8型大孔吸附树脂为层析介质，柱负载量为8g药材/mL树脂。先用55%的乙醇洗脱3个柱体积洗去大部分极性大的杂质，再用95%的乙醇洗脱3个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，70℃减压脱醇至溶液稍显浑浊，冷却至室[0038]第二步柱层析：采用聚酰胺吸附树脂为层析介质，柱负载量为45mgCBD/mL树脂。先用45%的乙醇洗脱5个柱体积去除杂质，再用80%的乙醇洗脱3个柱体积洗脱目标成分。收集富含目标成分的洗脱液，70℃减压浓缩至稠膏。[0039]③混合溶剂结晶：将稠膏溶于混合溶剂体系(正己烷：乙醇=2:1,V/V),制成CBD饱[0041]照高效液相色谱法(《中国药典》二部附录VD)测定。[0042]色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水-醋酸(25:50:25:0.4)为流动相；检测波长220nm;理论板数按大麻二酚计算不低于4000。[0043]测定法取本品适量，精密称定，加流动溶解并定量稀释制成每1ml约含0.2mg的溶液，精密量取20μ1,注入液相色谱仪，记录色谱图；另取大麻二酚对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即