CN108314608B 一种大麻二酚的提取分离方法 （昆明医科大学第一附属医院）

(12)发明专利(65)同一申请的已公布的文献号(73)专利权人昆明医科大学第一附属医院地址650032云南省昆明市西山区西昌路295号专利权人昆明勘达迪比欧商贸有限公司(72)发明人王昆华徐玉高运辉王华伟俞珏华(74)专利代理机构昆明大百科专利事务所代理人苏芸芸desorptionbehaviouroftheflavonoidsfromGlycyrrhizaglabraL.leafonmacroporousadsorptioChemistry》.2014,第168卷第538-545页.一种大麻二酚的提取分离方法本发明公开了一种大麻二酚的提取分离方法，该方法采用醇提取后，采用碱性溶液增强大麻二酚的水溶性，用有机溶剂萃取富集大麻二酚，经聚酰胺树脂柱、中性氧化铝和键合硅胶柱2(1)以大麻的提取部位为原料，粉碎后采用质量浓度60-70%的乙醇溶液热回流提取2-3所述大麻的提取部位为枝叶或火麻仁；(2)在步骤(1)乙醇提取浓缩流浸膏中先加入流浸膏体积2-3倍的水，混匀后加入碱性溶液调节pH值为11-12,然后回流提取2-3次，合并过滤提取液，弃滤渣，滤液用稀盐酸调pH为7后加入滤液等体积的氯仿-石油醚溶液萃取3-4次，将大麻二酚萃取到有机溶剂相层中，(3)在步骤(2)的大麻二酚粗膏中加入质量浓度20-30%的乙醇，形成混悬液后过聚酰胺树脂柱，上样完后用纯净水洗脱杂质至流出液为无色，然后用质量浓度40-50%乙醇溶液洗聚酰胺树脂柱至流出液为无色，再用质量浓度70-80%的乙醇溶液洗脱收集大麻二酚，分瓶收集，薄层鉴别后合并含有大麻二酚目标物的洗脱液，浓缩回收乙醇，得聚酰胺层析大麻二酚浓缩物；(4)将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用中性氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，干法上样后，用氯仿-石油醚溶液洗脱除杂，然后用氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液洗脱大麻二酚，收集含大麻二酚目标物洗脱液，浓缩得到大麻二酚粗品；(5)将步骤(4)大麻二酚粗品用甲醇溶解，过氨基键合硅胶柱、氰基键合硅胶柱或苯基键合硅胶柱，加压柱层析，键合硅胶柱用质量浓度20%的甲醇溶液平衡后，使用质量浓度40%-50%的甲醇溶液洗2-3个柱体积，然后用质量浓度65-70%的甲醇溶液进行大麻二酚洗脱，薄层层析鉴别，洗脱到无大麻二酚斑点为止，对浓度65-70%的甲醇洗脱液进行薄层层析鉴别，合并含有大麻二酚的洗脱液，浓(6)将步骤(5)中浓缩物用丙酮溶解，加入几滴冰乙酸，混匀后静置敞口放置过饱和结所述步骤(4)中氯仿-石油醚溶液为氯仿和石油醚按体积比1:3混合制得；所述步骤(4)中氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液是氯仿、甲醇和四氢呋喃按体积比8:1:1或10:0.5:2的比例混合制得；所述步骤(5)中加压柱层析的压力为4公斤。2.根据权利要求1所述的大麻二酚的提取分离方法，其特征在于：步骤(1)中回流提取第一次提取添加原料质量7-8倍的乙醇溶液，其余提取添加原料质量5-6倍的乙醇溶液。3.根据权利要求1所述的大麻二酚的提取分离方法，其特征在于：碱性溶液为NaOH、三4.根据权利要求1所述的大麻二酚的提取分离方法，其特征在于：步骤(2)氯仿-石油醚溶液为氯仿和石油醚按体积比1:1-1:2混合制得。5.根据权利要求1所述的大麻二酚的提取分离方法，其特征在于：将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，上样后，水洗脱杂质，再用质量浓度70-80%乙醇洗脱杂质到无色后，用质量浓度50-60%四氢呋喃乙醇溶液洗脱大麻二酚，收3一种大麻二酚的提取分离方法技术领域[0001]本发明涉及一种大麻二酚的提取分离方法，属于植物化学成分提取领域。背景技术[0002]大麻(Cannabissativa)是一种古老的具有药用开发价值的栽种植物，大麻二酚(cannabidiol,简称CBD)是植物大麻中的主要化学成分，是大麻中的非成瘾性成分，具有抗对神经系统的保护作用；CBD通过对环氧合酶和脂氧合酶的双重抑制来发挥止痛和抗炎作用，且效果强于人们所熟知和广泛运用的阿司匹林；人类大脑中的GABA神经递质有镇静效癫痫发作，还可以帮助提高其他抗癫痫药物的疗效；内源性大麻素是帮助抑郁症病人降低焦虑情绪的一种重要物质，存在于人体内，CBD能够帮助内源性大麻素维持在一个合理的水[0003]溶剂萃取法是提取植物中多酚类物质最常用的方法，常见的大麻二酚提取采用的是醇提水沉，大孔树脂硅胶柱层析分离纯化而得；现有的大麻提取工艺是目标物在粗提取利于推广应用。发明内容[0004]为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种收率高、产品纯度高的大麻二酚的提取分离方法。[0005]本发明方法具体步骤如下：[0006](1)以大麻的提取部位为原料，粉碎后采用质量浓度60-70%的乙醇溶液热回流提取2-3次，每次回流提取1.5-2.5小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，得乙醇提取浓缩流[0007](2)在步骤(1)乙醇提取浓缩流浸膏中先加入流浸膏体积2-3倍的水，混匀后加入碱性溶液调节pH值为11-12,然后回流提取2-3次，滤渣中再无大麻二酚浸出，合并过滤提取液，弃滤渣，滤液用稀盐酸调pH为7后加入滤液等体积的氯仿-石油醚溶液萃取3-4次，将大麻二酚萃取到有机溶剂相层中，收集合并有机溶剂相层[0008](3)在步骤(2)的大麻二酚粗膏中加入质量浓度20-30%的乙醇，形成混悬液后过聚酰胺树脂柱，上样完后用纯净水洗脱杂质至流出液为无色，然后用质量浓度40-50%乙醇溶液洗聚酰胺树脂柱至流出液为无色，再用质量浓度70-80%的乙醇溶液洗脱收集大麻二酚，分瓶收集，薄层鉴别后合并含有大麻二酚目标物的洗脱液，浓缩回收乙醇，得聚酰胺层析大麻二酚浓缩物；[0009](4)将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用中性氧化铝干法拌样，上中性氧化铝4柱，干法上样后，用氯仿-石油醚溶液洗脱除杂，然后用氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液洗脱大麻二酚，收集含大麻二酚目标物洗脱液，浓缩得到大[0010](5)将步骤(4)大麻二酚粗品用甲醇溶解，过氨基键合硅胶柱、氰基键合硅胶柱或苯基键合硅胶柱，加压柱层析，键合硅胶柱用质量浓度20%的甲醇溶液平衡后，使用质量浓度40%-50%的甲醇溶液洗2-3个柱体积，然后用质量浓度65-70%的甲醇溶液进行大麻二酚洗脱，薄层层析鉴别，洗脱到无大麻二酚斑点为止，对浓度65-70%的甲醇洗脱液进行薄层层析[0011](6)将步骤(5)中浓缩物用丙酮溶解，加入冰乙酸，混匀后静置敞口放置结晶，抽[0012]所述大麻的提取部位为画叶、枝叶、火麻仁等含有大麻二酚的部位。[0013]所述步骤(1)中回流提取第一次提取添加原料质量7-8倍的乙醇溶液，其余提取添加原料质量5-6倍的乙醇溶液。[0015]所述步骤(2)氯仿-石油醚溶液为氯仿和石油醚按体积比1:1-1:2混合制得。[0016]所述步骤(4)中氯仿-石油醚溶液为氯仿和石油醚按体积比1:3混合制得。[0017]所述步骤(4)中氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液是氯仿、甲醇和四氢呋喃按体积比8:1:1或10:0.5:2的比例混合制得。[0018]本发明方法中步骤(4)可替换为：将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，上样后，水洗脱杂质，再用质量浓度70-80%乙醇洗脱杂质到无色后，用质量浓度50-60%四氢呋喃乙醇溶液洗脱大麻二酚，收集洗脱液，浓缩得到大麻二酚[0019]本发明方法的优点和技术效果：[0020]本发明方法中添加碱性溶液目的为了使大麻二酚水溶性增强，回流时提取到水里，同时使得四氢大麻酚成盐，萃取时候容易去除，碱性物质的添加和有机溶剂萃取相结合的工艺去除了大麻乙醇提取物中的大极性成分杂质，比如毒品物质四氢大麻酚，提高了粗提物中目标物质的含量；采用聚酰胺树脂柱层析纯化基本不存在死吸附，很少失样品，而现有的硅胶工艺死吸附太大，样品损失太多，并且用有机溶剂洗脱成本太高；利用中性氧化铝对酚类物质的死吸附，把目标物死吸附在柱子，先溶剂过柱除杂再用碱性溶剂洗脱氧化铝死吸附的大麻二酚，有效富集大麻二酚，达到较好的除杂效果；采用氨基、氰基等填料加压快速闪式分离目标产物，柱层析分离速度更快，载样量更大些，分离度塔板数和所得样品纯度均高于C-18柱，和凝胶柱纯化对比时发现，凝胶柱层析也能得到高纯度化合物，然凝胶柱层析速度较慢；本发明方法操作简单，目标物质在整个工艺中流失量小，杂质去除完全，获得的产品纯度高大于98%,收率高，适于工业化推广应用。具体实施方式[0021]下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内[0022]实施例1:本大麻二酚的提取分离方法步骤如下：[0023](1)以大麻枝叶为原料，粉碎后采用质量浓度60%的乙醇溶液热回流提取2次，第一5次提取添加原料质量7倍的乙醇溶液，第二次提取添加原料质量5倍的乙醇溶液，每次回流[0024](2)在步骤(1)乙醇提取浓缩流浸膏中加入流浸膏体积2倍的水，混匀后加入氨水溶液调节pH值为11,然后回流提取2次，合并过滤提取液，弃滤渣，滤液用稀盐酸(质量浓度5%)调pH为7后加入滤液等体积的氯仿-石油醚溶液(体积比1:1)萃取3次，将大麻二酚萃取[0025](3)在步骤(2)的大麻二酚粗膏中加入质量浓度20%的乙醇，形成混悬液后过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂用量为0.2倍步骤(1)原料质量，装柱柱子高度和直径比为20:1,上样完后用纯净水洗脱杂质至流出液为无色，然后用质量浓度40%乙醇溶液洗聚酰胺树脂柱至流出液为无色，再用质量浓度70%的乙醇溶液洗脱收集大麻二酚，分瓶收集，薄层鉴别后合并含有大麻二酚目标物的洗脱液，浓缩回收乙醇，得聚酰胺层析大麻二酚浓缩物；[0026](4)将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用中性氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，中性氧化铝用量为浓缩物质量的30倍，干法上样后，用氯仿-石油醚溶液(体积比1:3)洗脱除杂，然后用氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液(体积比8:1:1)洗脱大麻二酚，收集含大麻二酚目[0027](5)将步骤(4)大麻二酚粗品用甲醇溶解，过氨基键合硅胶柱，加压柱层析(压力4公斤，氨基键合硅胶用量为上样量的20倍),氨基键合硅胶柱用质量浓度20%的甲醇溶液平衡后，使用质量浓度40%的甲醇溶液洗2个柱体积，然后用质量浓度68%的甲醇溶液进行大麻二酚洗脱，薄层层析鉴别，洗脱到无大麻二酚斑点为止，对浓度68%的甲醇洗脱液进行薄层[0028](6)将步骤(5)中浓缩物用丙酮溶解，加入几滴冰乙酸，混匀后静置敞口放置过饱[0029]实施例2:本大麻二酚的提取分离方法步骤如下：[0030](1)以大麻枝叶为原料，粉碎后采用质量浓度70%的乙醇溶液热回流提取3次，第一次提取添加原料质量7倍的乙醇溶液，第2、3次提取添加原料质量5倍的乙醇溶液，每次回流[0031](2)在步骤(1)乙醇提取浓缩流浸膏中加入流浸膏体积3倍的水，混匀后加入NaOH溶液调节pH值为12,然后回流提取2次，合并过滤提取液，弃滤渣，滤液用稀盐酸(质量浓度5%)调pH为7后加入滤液等体积的氯仿-石油醚溶液(体积比1:2)萃取4次，将大麻二酚萃取[0032](3)在步骤(2)的大麻二酚粗膏中加入质量浓度25%的乙醇，形成混悬液后过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂用量为0.2倍步骤(1)原料质量，装柱柱子高度和直径比为20:1,上样完后用纯净水洗脱杂质至流出液为无色，然后用质量浓度45%乙醇溶液洗聚酰胺树脂柱至流出液为无色，再用质量浓度75%的乙醇溶液洗脱收集大麻二酚，分瓶收集，薄层鉴别后合并含有大麻二酚目标物的洗脱液，浓缩回收乙醇，得聚酰胺层析大麻二酚浓缩物；[0033](4)将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用中性氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，中性氧化铝用量为浓缩物质量的30倍，干法上样后，用氯仿-石油醚溶液(体积比1:3)洗脱除杂，然后用氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液(体积比8:1:1)洗脱大麻二酚，收集含大麻二酚目6[0034](5)将步骤(4)大麻二酚粗品用甲醇溶解，过苯基键合硅胶柱，加压柱层析(压力4公斤，苯基键合硅胶用量为上样量的20倍),苯基键合硅胶柱用质量浓度20%的甲醇溶液平衡后，使用质量浓度50%的甲醇溶液洗2个柱体积，然后用质量浓度65%的甲醇溶液进行大麻二酚洗脱，薄层层析鉴别，洗脱到无大麻二酚斑点为止，对浓度65%的甲醇洗脱液进行薄层[0035](6)将步骤(5)中浓缩物用丙酮溶解，加入几滴冰乙酸，混匀后静置敞口放置过饱[0036]实施例3:本大麻二酚的提取分离方法步骤如下：[0037](1)以大麻枝叶为原料，粉碎后采用质量浓度65%的乙醇溶液热回流提取3次，第一次提取添加原料质量8倍的乙醇溶液，第2、3次提取添加原料质量6倍的乙醇溶液，每次回流[0038](2)在步骤(1)乙醇提取浓缩流浸膏中加入流浸膏体积2倍的水，混匀后加入三乙胺溶液调节pH值为11,然后回流提取3次，合并过滤提取液，弃滤渣，滤液用稀盐酸(质量浓度5%)调pH为7后加入滤液等体积的氯仿-石油醚溶液(体积比1:1.5)萃取3次，将大麻二酚萃取到有机溶剂相层中，收集合并有机溶剂相层，回收有机溶剂，得大[0039](3)在步骤(2)的大麻二酚粗膏中加入质量浓度30%的乙醇，形成混悬液后过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂用量为0.2倍步骤(1)原料质量，装柱柱子高度和直径比为20:1,上样完后用纯净水洗脱杂质至流出液为无色，然后用质量浓度50%乙醇溶液洗聚酰胺树脂柱至流出液为无色，再用质量浓度80%的乙醇溶液洗脱收集大麻二酚，分瓶收集，薄层鉴别后合并含有大麻二酚目标物的洗脱液，浓缩回收乙醇，得聚酰胺层析大麻二酚浓缩物；[0040](4)将步骤(3)聚酰胺层析大麻二酚浓缩物用中性氧化铝干法拌样，上中性氧化铝柱，中性氧化铝用量为浓缩物质量的30倍，干法上样后，用氯仿-石油醚溶液(体积比1:3)洗脱除杂，然后用氯仿-甲醇-四氢呋喃溶液(体积比10:0.5:2)洗脱大麻二酚，收集含大麻二[0041](5)将步骤(4)大麻二酚粗品用甲醇溶解，过氰基键合硅胶柱，加压柱层析(压力4公斤，氰基键合硅胶用量为上样量的20倍),氰基键合硅胶柱用质量浓度20%的甲醇溶液平衡后，使用质量浓度45%的甲醇溶液洗3个柱体积，然后用质量浓度70%的甲醇溶液进行大麻二酚洗脱，薄层层析鉴别，洗脱到无大麻二酚斑点为止，对浓度70%的甲醇洗脱液进行薄层[0042](6)将步骤(5)中浓缩物用丙酮溶解，加入几滴冰乙酸，混匀后静置敞口放置过饱[0043]实施例4:本大麻二酚的提取分离方法步骤如下：[0044](1)以大麻枝叶为原料，粉碎后采用质量浓度60%的乙醇溶液热回流提取3次，第一次提取添加原料质量7倍的乙醇溶液，第2、3次提取添加原料质量6倍的乙醇溶液，每次回流[0045]