CN108401902B 一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法 （黑龙江省科学院大庆分院）

(19)中华人民共和国国家知识产权局地址163319黑龙江省大庆市高新区博学大街45号高媛所(普通合伙)23209代理人荣玲A01H4/00(2006.01)forcloningofhemp(CannabissativaL.)byshoottipculture.《Pak.J.Bot.》.2forcloningofhemp(CannabissativaL.)byshoottipculture.《Pak.J.Bot.》佟金凤等.大麻试管苗生根培养基的优化.14438-14440页.Lataetal..InvitromasspropagatiofCannabissativaL.:Aprotocolmeta-topolinandtheassessmentofeco-physiological,biochemicalandgeneticfidelityofmicropropagatedplants.《JournalofAppliedResearchonMandAromaticPlants》.2016,第1-9页.审查员郝永利pH5.7～5.9,培养温度为23～25℃,光照强度8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度21.一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖25～30g/L,琼脂7～8g/L,pH5.7～5.9,培养温度为23～25℃,光照强度1800～2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8～10天，得到大麻无菌苗茎尖；步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖25～30g/L,琼脂7～8g/L,pH5.7～5.9,培养温度为23～25℃,光照强度1800～2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15～20天，得到大麻茎尖再生植株；步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为20～30天，得到生根的植株；步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/L的NH₄NO₃、120～170mg/L的KH₂PO₄、1200～1500mg/L的KNO₃、350~400mg/L的CaCl₂·2H₂0、300～350mg/L的MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、2H₂0、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的烟酸；步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1550mg/L的NH₄NO₃、130mg/L的KH₂PO₄、1250mg/L的KNO₃、370mg/L的CaCl₂·2H₂0、330mg/L的MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸，激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。2.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤1中乙醇浸泡的时间为2～3min,无菌水冲洗次数3～4次，升汞溶液浸泡处理时间6～7min。3.根据权利要求1所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,3所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。4一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法技术领域[0001]本发明属于植物的人工栽培技术领域；具体涉及一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。背景技术生草本植物。大麻是世界也是中国最古老、历史最悠久的栽培作物之一，大麻浑身是宝，可等十几个产业链。[0003]由于大麻中含有一种致幻成瘾的活性成分一四氢大麻酚(THC),易被不法分子用来非法生产毒品，造成社会危害，许多国家把大麻也一并列为禁种作物，导致许多珍贵的种质资源遗失，对大麻的研究远远落后于其他经济作物。大麻有雌雄异株和雌雄同株之分，但由于同一群体内不同个体间表现多样性，种质杂合度高，遗传背景非常复杂且遗传学与分子生物学的基础研究也比较少，通过引种、系选、杂交、杂种优势、诱变等方法存在周期长、田间选择难度大、抗源不足等问题。为了加速育种工作，许多研究者也利用温室进行育种，但由于光照不足、苗期温度过高等条件的影响，导致大麻幼苗徒长而出现倒伏死亡现象的发生，这也会给育种工作带来困难。生物技术是解决这些问题的有效途径，即可加速种质资源改良进程，稳定优良性状，又可解决温室育种的弊端。[0004]在以往大麻再生体系的研究中，整个再生过程周期较长。申请号为200610088353.7的中国专利，将种子消毒后接种于发芽培养基，30天后才将茎尖接种到侧芽培养基中，40天后获得侧芽，生根培养需要60天，培养周期长。选用种子消毒后接种培养基产生的无菌苗的下胚轴为外植体，从种子接种到生根获得新的植株需要100多天的时间，影响实验周期的紧密性。发明内容[0005]本发明目的是提供一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法。[0006]本发明通过以下技术方案实现：[0007]一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：[0008]步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；[0009]步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖25～30g/L,琼脂7～8g/L,pH5.7～5.9,培养温度为23～25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8～10天，得到大麻无菌苗茎尖；[0010]步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含5激素的MS培养基，蔗糖25～30g/L,琼脂7～8g/L,pH5.7～5.9,培养温度为23～25℃,光照强度1800～2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15～20天，得到大麻茎尖再生植株；[0011]步骤4、生根培养：将步骤3得到的茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的MS培养基或含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为20～30天，得到生根的植株。[0012]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2~3min,无菌水冲洗次数3～4次，升汞溶液浸泡处理时间6～7min。[0013]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1500～1650mg/L的~350mg/L的MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的烟酸。[0014]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH₄NO₃、微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂0、0.25mg/L的Na₂Mo0₄的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。[0015]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括1500~CaCl₂·2H₂0、300～350mg/L的MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L0.025mg/L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的烟酸，激素为1.0～2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0～2.0mg/L激动素。[0016]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,6所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸，激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。[0017]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3或4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸，激素为2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、2.0mg/L激动素。[0018]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括700~800mg/L的NH₄NO₃、60～80mg/L的KH₂PO₄、602H₂0、150～175mg/L的MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1~0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5～1.0mg/L的盐酸吡哆醇、0.5～1.0mg/L的烟酸，激素为0.1~0.15mg/L吲哚丁酸、0.05～0.1mg/Lα-萘乙酸。[0019]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂0、0.25mg/L的Na₂Mo0₄·2H₂0、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸，激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.05mg/Lα-萘乙酸。[0020]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂0、0.25mg/L的Na₂Mo0₄·2H₂0、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸，激素为0.15mg/L吲哚丁酸、0.1mg/Lα-萘乙酸。[0021]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括750mg/7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/7L的ZnSO₄·7H₂0、0.25mg/L的Na₂Mo0₄·2H₂0、0.025mg/L的CuSO₄·5H₂0和0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸，激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.075mg/Lα-萘乙酸。[0022]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，所述的“大麻”包括雌雄异株和雌雄同株的工业大麻。[0023]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，利用茎尖组织培养快速繁殖得到再生植株，实验周期短，整个周期只需43～60天，生根效果好，根系变粗且长势较好，提高移栽成活率。[0024]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为85.67±1.53%,根粗为9.67±0.42mm,移栽成活率为[0025]本发明所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，能够加速种质资源改良进程，稳定优良性状，又可解决温室育种的弊端。附图说明[0026]图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片；[0027]图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片；[0028]图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片；[0029]图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片；[0030]图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片；[0031]图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片；[0032]图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片；[0033]图8为具体实施方式五方法制备的大麻生根植株根部照片。具体实施方式[0034]具体实施方式一：[0035]一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：[0036]步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；[0037]步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数10天，得到大麻无菌苗茎尖；[0038]步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数20天，得到大麻茎尖再生植株；8[0039]步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度[0040]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为3min,无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。[0041]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的[0042]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的[0043]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐[0044]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图1为具体实施方式一方法制备的大麻无菌苗照片，图2为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖苗照片，图3为具体实施方式一方法制备的大麻茎尖再生植株照片。从图1中能够看出种子培养10天后，无菌苗的生理状态很好，叶片舒展，挺拔；从图2中能够看出生长较好的茎尖，中心叶片再生良[0045]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图4为具体实施方式一方法制备的大麻生根植株根部照片，从图4中观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果如表1所示：本实施方式生根的植株生根率为62.00±4.00%,根粗为5.53±0.15mm,移栽成活率为[0046]表1具体实施方式一生根率、根粗和移栽成活率记录表9生根率(%)根粗(mm)移栽成活率(%)[0048]具体实施方式二：[0049]一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：[0050]步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；[0051]步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖25g/L,琼脂7g/L,pH5.7,培养温度为23～25℃,光照强度1800lux,每天16h光照、[0052]步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖25g/L,琼脂7g/L,pH5.7,培养温度为23～25℃,光照强度1800lux,[0053]步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度[0054]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为3min,无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。[0055]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90～95mg/L的肌醇、1.0～3.0mg/L的甘氨酸、0.1～0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、[0056]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·7H₂0、0.250.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐[0057]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸，激素为0.15mg/L吲哚丁酸、0.1mg/Lα-萘乙酸。[0058]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图5为具体实施方式二方法制备的大麻生根植株根部照片，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为75.00±3.00%,根粗为7.33±1.26mm,移栽成活率为63.33%。表2具体实施方式二生根率、根粗和移栽成活率记录表生根率(%)根粗(mm)移栽成活率(%)实施方式二具体实施方式三：一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；[0064]步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.9,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数8天，得到大麻无菌苗茎尖；[0065]步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.9,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15天，得到大麻茎尖再生植株；[0066]步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养时间为30天，得到生根的植株。[0067]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2min,无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。[0068]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1650mg/L的NH₄NO₃、微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的盐酸吡哆醇、1.0mg/L的烟酸。[0069]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括11MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的盐[0070]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括95mg/L的肌醇、3.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、1.0mg/L的[0071]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图6为具体实施方式三方法制备的大麻生根植株根部照片，观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果生根的植株生根率为78.00±3.00%,根粗为7.67±0.21mm,移栽成活率为70.00%。表3具体实施方式三生根率、根粗和移栽成活率记录表生根率(%)根粗(mm)移栽成活率(%)具体实施方式四：一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡，然后用无菌水冲洗至水体澄清，用无菌滤纸吸干种子表面水分，得到消毒后的大麻种子；[0077]步骤2、发芽培养：将步骤1消毒后的大麻种子接种于如下发芽培养基中，MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度2300lux,每天16h光照、[0078]步骤3、再生培养：将步骤2得到的大麻无菌苗茎尖接种到如下的再生培养基中：含激素的MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度1800~2300lux,每天16h光照、8h黑暗条件下培养，培养天数15天，得到大麻茎尖再生植株；[0079]步骤4、生根培养：将步骤3得到的大麻茎尖再生植株接种到如下的生根培养基中，含激素的1/2MS培养基，蔗糖30g/L,琼脂8g/L,pH5.8,培养温度为23～25℃,光照强度[0080]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤1中乙醇浸泡的时间为2min,无菌水冲洗次数4次，升汞溶液浸泡处理时间7min。[0081]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤2中的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成份组成，其中所述的大量元素包括1600mg/L的NH₄NO₃、微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的H₃BO₃、8.6mg/L的ZnSO₄·的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括92mg/L的肌醇、1.0mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸。[0082]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤3中的含激素的MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括93mg/L的肌醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.2mg/L的盐酸硫胺素、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.6mg/L的烟酸，激素为1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L激动素。[0083]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，步骤4中的含激素的1/2MS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成份、激素组成，其中所述的大量元素包括MgSO₄·7H₂0,所述的微量元素包括0.83mg/L的KI、22.3mg/L的MnSO₄·4H₂0、6.2mg/L的0.025mg/L的CoCl₂·6H₂0,所述的铁盐为硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,所述的有机成份包括90mg/L的肌醇、1mg/L的甘氨酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的烟酸，激素为0.1mg/L吲哚丁酸、0.075mg/Lα-萘乙酸。[0084]本实施方式所述的一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，图7为具体实施方式四方法制备的大麻生根植株根部照片，从图7中观察根系生长情况，用尺测量十个根的粗度，并记录；所得到的生根植株按照常规方法进行移栽，统计移栽成活率，得到的结果如表4所示：本实施方式生根的植株生根率为83.00±2.00%,根粗为9.00±1.32mm,移栽成活率为表4具体实施方式四生根率、根粗和移栽成活率记录表生根率(%)根粗(mm)移栽成活率(%)实施方式四具体实施方式五：一种大麻茎尖组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：步骤1、种子消毒：挑选成熟、饱满、有光泽的大麻种子，先用洗涤液洗涤后用自来水冲洗，再在超净台中用浓度为75%的乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，再用浓度为0.1%