2025年新版新冠pcr考试题及答案

2025年新版新冠pcr考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）1.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测中，实时荧光定量PCR（qPCR）技术的核心原理是：A.通过凝胶电泳分离扩增产物B.利用荧光信号累积实时监测扩增过程C.通过酶联免疫吸附反应检测抗原D.基于等温扩增技术放大核酸片段答案：B2.关于新冠病毒RNA提取，下列操作错误的是：A.使用带滤芯的吸头防止气溶胶污染B.样本裂解时需充分涡旋确保病毒包膜破坏C.离心后直接倾倒废液，无需吸净残留液体D.提取完成后立即进行扩增或-80℃保存答案：C3.某实验室使用双靶标（ORF1ab、N基因）检测，一份样本ORF1ab基因Ct值28.5，N基因Ct值31.2，内参基因（RP）Ct值18.6，正确的结果判读是：A.阳性（双靶标阳性）B.阴性（N基因Ct值超过35）C.灰区（需重复检测）D.无效（内参Ct值异常）答案：A（注：2025版指南规定双靶标Ct≤37且内参有效时判阳性）4.扩增反应体系中，引物的主要作用是：A.激活Taq酶活性B.提供DNA合成的3'-OH末端C.结合荧光探针发出信号D.稳定反应体系pH值答案：B5.关于Ct值（循环阈值），下列描述正确的是：A.Ct值越大，样本中病毒载量越高B.Ct值与扩增效率呈负相关C.同一标本重复检测Ct值差异应≤1.5D.阴性标本Ct值应＞45答案：C6.实验室进行新冠PCR检测时，若发现扩增区紫外线消毒灯强度低于70μW/cm²（距离1m），应采取的措施是：A.继续使用，定期更换即可B.立即更换灯管并记录C.增加消毒时间至1小时D.关闭紫外线灯改用含氯消毒液答案：B7.下列哪种情况不会导致假阳性结果？A.扩增产物气溶胶污染加样区B.样本核酸提取时交叉污染C.使用expired的dNTP试剂D.阳性对照与样本在同一区域配制答案：C8.2025版《新型冠状病毒核酸检测技术指南》新增的质量控制要求是：A.每批检测需设置阴性、阳性、空白对照B.使用自动化提取设备时需进行人工复核C.引入数字PCR（dPCR）作为确认方法D.实验室需每月进行扩增效率验证答案：C9.关于样本保存与运输，符合2025版规范的是：A.咽拭子样本采集后4小时内未检测，需置于-20℃保存B.运输时使用95kPa压力蒸汽灭菌的密封罐C.混合检测样本（10:1混采）保存时间不超过24小时D.冷冻样本运输应使用干冰，确保温度≤-70℃答案：D10.扩增曲线出现“拖尾”现象（Ct值后荧光信号持续上升），最可能的原因是：A.引物二聚体形成B.模板浓度过高C.探针降解D.反应体系中Mg²+浓度过低答案：A11.内参基因（如人源RP基因）的主要作用是：A.监测样本中是否存在PCR抑制物B.提高病毒基因的扩增效率C.区分不同型别的冠状病毒D.替代阳性对照验证试剂有效性答案：A12.进行RNA提取时，若发现磁珠法提取的核酸A260/A280比值为1.3（正常1.8-2.0），可能的原因是：A.裂解液中蛋白酶K浓度过高B.洗涤步骤未完全去除蛋白质C.洗脱缓冲液pH值偏碱D.样本保存液中胍盐残留答案：B13.实验室发生扩增产物污染后，最有效的清除方法是：A.用75%乙醇擦拭台面B.紫外线照射30分钟C.使用含5%次氯酸钠的溶液处理D.通风1小时降低气溶胶浓度答案：C14.关于PCR仪的校准，下列说法错误的是：A.每年需由计量机构进行温度均匀性校准B.每季度需使用荧光校准板验证光学系统C.更换加热模块后无需重新校准D.校准结果需存档并标注有效期限答案：C15.某样本重复检测时，第一次Ct值25.3，第二次Ct值30.1，差异超过4.0，可能的原因是：A.第一次检测时加样量不准确B.样本中存在PCR抑制物C.扩增仪孔间温度差异D.以上均可能答案：D16.2025版指南要求，混合检测（混采）阳性后，复核时应采用：A.原混采管直接扩增B.单管单独提取核酸C.同一批试剂重复检测D.更换检测平台（如换用不同引物探针）答案：B17.下列哪种试剂不需要在冰上保存？A.Taq酶B.逆转录酶（RT酶）C.dNTP混合液D.75%乙醇（洗涤液）答案：D18.扩增反应体系配制时，错误的操作是：A.在生物安全柜内进行B.先加缓冲液、酶等共性成分，再加模板C.使用多道移液器减少加样误差D.配制完成后离心10秒去除气泡答案：B（应最后加模板，避免交叉污染）19.关于结果报告，符合规范的是：A.报告“核酸检测阳性（Ct=29.1）”B.仅报告“阳性”或“阴性”C.灰区样本报告“可疑”并注明需复核D.内参无效时报告“检测失败”答案：A（2025版要求报告具体Ct值）20.新型冠状病毒RNA的特性是：A.单链正股RNA（+ssRNA）B.单链负股RNA（-ssRNA）C.双链RNA（dsRNA）D.环状RNA（circRNA）答案：A21.下列哪项不是荧光探针法（如TaqMan）的优点？A.特异性高于染料法B.可进行多重检测C.对扩增产物污染更敏感D.无需优化引物二聚体问题答案：C22.实验室质量控制中，“空白对照”的作用是：A.验证试剂是否被污染B.确认样本提取效率C.监测扩增仪性能D.评估操作人员技术水平答案：A23.某实验室使用的提取试剂说明书标注“核酸得率≥90%”，验证时应采用：A.已知浓度的RNA标准品B.临床阳性样本C.细胞培养的病毒悬液D.人工合成的RNA片段答案：A24.关于生物安全，错误的做法是：A.穿防护服进入扩增区B.样本灭活（56℃30分钟）后在普通实验室提取C.使用后的吸头放入防漏生物安全袋D.操作结束后用0.2%过氧乙酸喷雾消毒答案：B（灭活后仍需在生物安全柜内操作）25.扩增程序中，退火温度的设定主要依据：A.引物的Tm值（解链温度）B.探针的长度C.模板的GC含量D.Taq酶的最适温度答案：A26.下列哪种情况可判定为“检测无效”？A.阳性对照Ct值32（试剂说明书要求≤30）B.阴性对照无Ct值C.内参基因Ct值22（正常范围18-25）D.空白对照Ct值40答案：A27.2025版指南推荐的新冠病毒核酸检测靶标不包括：A.E基因B.ORF1ab基因C.N基因D.S基因答案：A（新版指南取消E基因作为必检靶标）28.提取核酸时，若样本量为200μL，洗脱体积为50μL，理论上浓缩倍数为：A.2倍B.4倍C.5倍D.8倍答案：B（200/50=4）29.关于气溶胶污染，下列说法错误的是：A.离心时未盖紧管盖易产生气溶胶B.吸头弹出时的冲击力可形成气溶胶C.紫外线可有效破坏气溶胶中的核酸D.负压实验室可减少气溶胶扩散答案：C（紫外线主要破坏表面核酸，对空气中气溶胶效果有限）30.某实验室日检测量500份，按2025版要求，每批次（≤96份）应设置的阳性对照数量是：A.1个B.2个C.3个D.4个答案：B（新版要求每批次至少2个阳性对照）二、多项选择题（每题3分，共10题，计30分，少选、错选均不得分）1.影响RNA提取质量的因素包括：A.样本采集部位（咽拭子/鼻拭子）B.保存液类型（病毒保存液/生理盐水）C.裂解时间与温度D.磁珠与核酸的结合时间答案：ABCD2.扩增曲线出现“平台期缺失”（荧光信号未达到平台），可能的原因有：A.模板浓度过低B.反应体系中dNTP耗尽C.Taq酶活性不足D.扩增循环数设置过少答案：ACD3.新冠PCR实验室分区应包括：A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区答案：ABC（2025版取消独立产物分析区，与扩增区合并）4.结果判读时需综合考虑的因素有：A.双靶标Ct值是否均在有效范围内B.内参基因是否有效扩增C.阳性/阴性对照是否符合预期D.患者临床症状与流行病学史答案：ABCD5.生物安全操作包括：A.操作前用75%乙醇消毒台面B.样本灭活时佩戴护目镜C.废弃标本高压灭菌后处理D.实验服每日更换并单独清洗答案：ABCD6.PCR反应体系的基本组成包括：A.模板核酸B.引物C.荧光染料或探针D.DNA聚合酶答案：ABCD7.预防假阳性的措施有：A.分区操作，严格遵循单向流程B.使用UNG酶（尿嘧啶糖基化酶）降解污染的dUTP产物C.每次实验后清洁移液器D.阳性对照与样本分开配制答案：ABCD8.室内质量控制应包括：A.试剂批间差异验证B.仪器性能校准C.人员操作培训考核D.临床样本复检率统计答案：ABC9.PCR仪维护的关键点有：A.定期清洁加热模块表面B.检查风扇运行状态防止过热C.校准荧光通道灵敏度D.更换损坏的热盖密封垫答案：ABCD10.2025版指南相比旧版的更新点包括：A.推荐使用数字PCR作为疑难样本确认方法B.混采阳性复核时需单管重提C.内参基因Ct值允许范围扩大至16-28D.新增对自动化提取设备的性能验证要求答案：ABD三、判断题（每题1分，共10题，计10分）1.Ct值越小，说明样本中病毒核酸含量越高。（）答案：√2.引物设计时需避免3'-端互补，防止引物二聚体。（）答案：√3.RNA保存液可长期（＞7天）室温保存样本。（）答案：×（需2-8℃保存，长期需-80℃）4.扩增区可同时进行加样和产物分析操作。（）答案：×（需单向流程，加样应在样本处理区）5.内参基因阴性时，若双靶标阳性仍可判为阳性。（）答案：×（内参无效需重新检测）6.荧光定量PCR可区分样本中的活病毒与死病毒。（）答案：×（仅检测核酸，无法区分活性）7.咽拭子样本运输时需使用冰袋，保持2-8℃。（）答案：√8.实验室发生污染后，用紫外线照射30分钟即可完全清除。（）答案：×（需结合化学消毒）9.结果报告需经双人审核，审核人需具备中级以上职称。（）答案：√10.开展新冠PCR检测的实验室需通过ISO15189认可。（）答案：×（需取得医疗机构临床基因扩增检验实验室资质）四、简答题（每题5分，共6题，计30分）1.简述实时荧光定量PCR检测新冠病毒的基本原理。答案：通过逆转录将病毒RNA转化为cDNA，利用特异性引物和荧光探针（或染料）对靶基因（如ORF1ab、N基因）进行扩增。扩增过程中，荧光信号随产物增加而累积，仪器实时监测荧光强度并计算循环阈值（Ct值）。Ct值与初始模板量成反比，通过与阴阳性对照比较判断结果。2.新冠PCR实验室分区的功能及气流方向要求是什么？答案：分区包括：①试剂准备区（配制反应体系）；②样本处理区（核酸提取、加样）；③扩增区（PCR扩增、检测）。气流方向应为试剂准备区→样本处理区→扩增区，保持负压梯度（前区压力＞后区），避免交叉污染。3.RNA提取的关键步骤及注意事项有哪些？答案：关键步骤：样本裂解（破坏病毒包膜释放RNA）、核酸结合（与磁珠/硅胶膜结合）、洗涤（去除蛋白、盐类等杂质）、洗脱（释放纯净RNA）。注意事项：避免RNase污染（使用DEPC水、专用器材）；裂解时间充分；洗涤时彻底去除残留废液；洗脱体积与样本量匹配；提取后立即使用或低温保存。4.如何分析扩增曲线的异常情况（如无扩增、Ct值过高、非特异性扩增）？答案：①无扩增：可能模板量过低、提取失败、引物探针失效、扩增仪故障；②Ct值过高（＞37）：可能样本病毒载量低、抑制物存在、反应体系加样误差；③非特异性扩增（曲线形态异常）：可能引物二聚体、探针降解、Mg²+浓度过高。需结合对照结果（如阳性对照是否正常）综合判断。5.简述PCR检测质量控制的主要内容。答案：包括人员培训（持证上岗）、仪器校准（温度、光学系统）、试剂验证（批间差异、灵敏度）、室内质控（阴/阳/空白对照）、室间质评（参加国家或省级质控）、过程记录（样本流转、操作步骤）、结果复核（双人审核）。6.2025版指南对假阴性预防提出了哪些新要求？答案：①增加内参基因Ct值范围（16-28），严格监控抑制物；②推荐使用双靶标检测（ORF1ab+N或ORF1ab+S），减少单靶标漏检；③要求对Ct值35-37的样本进行重复检测；④新增对低病毒载量样本（Ct＞30）的提取效率验证（如使用浓缩提取法）；⑤强调样本采集规范（如鼻拭子深度、咽拭子