树突状细胞在肿瘤治疗上的应用进展

树突状细胞在肿瘤治疗上的应用进展摘要：DC是功能最强的专职抗原呈递细胞，其首要的功能是诱导机体产生初次免疫应答。近年来由于在细胞活化中共刺激机制的阐明，免疫细胞与肿瘤细胞之间的信号转导及抗原呈递过程研究的深入，使得DC在肿瘤的生物治疗方面的研究取得了较大的进展。本文综述了DC与肿瘤预后的关系，DC的应用以及未来的展望。关键词：树突状细胞肿瘤DC树突状细胞概述树突状细胞（Dendriticcells,DC）是机体功能最强的专职\t"/item/%E6%A0%91%E7%AA%81%E7%8A%B6%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"抗原递呈细胞(Antigenpresentingcells,APC)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活\t"/item/%E6%A0%91%E7%AA%81%E7%8A%B6%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"初始T细胞，处于启动、调控、并维持\t"/item/%E6%A0%91%E7%AA%81%E7%8A%B6%E7%BB%86%E8%83%9E/_blank"免疫应答的中心环节。1868年，PaulLangerhans在皮肤组织中首次观察到DC，在1973年RalphSteinman和Cohn在鼠的脾脏中分离出DC并发现其免疫功能。此后2O年问，DC在各种组织中被发现，并能够在体外进行培养，因此加快了DC的研究并使临床应用成为可能。目前认为存在两大类DC：一类是骨髓源性DC。其中包括两个分支：①是存在于皮肤样复层上皮的LCs；②是其他组织中的间质性DC(intDC)。它们共同的特点是分泌1L一12，诱导CIMT增值，不同点是intDC可分泌IL一10，诱导B向浆细胞分化，而LCs可能与细胞毒CD8T活性有关；另一类是类浆细胞DC(pDCs)。是在病毒入侵体内后发挥作用，在几小时内，分泌大量的抗病毒的细胞因子，因此判断pDCs有吞噬外源抗体，介导免疫起始的作用。二、DC与肿瘤关系肿瘤的发生发展与机体免疫系统的紊乱有着密切的联系，但具体机制尚未完全清楚。肿瘤细胞低表达或不表达MHC分子及共刺激分子，某些肿瘤细胞还能分泌产生大量免疫抑制细胞因子，肿瘤微环境通过各种机制导致DC的分化成熟障碍及机体的免疫功能破坏，使肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视。肿瘤细胞经Toll样受体的配体转染后，其免疫原型大大增强，同时还能促进DC的成熟。Permt等首次提出在肺癌及周围肺组织中存在类浆样DC，发现大多数NSCLC浸润到肿瘤局部的DC是未成熟的，即使经Tol样受体刺激后，仅部分表型成熟，它们表达共刺激分子和分泌细胞因子的能力是有限的，说明TIDC是弱的抗原提呈细胞。陈宇平等研究发现，P53基因突变表达与树突状细胞的成熟状态有密切关系，肺组织中P53突变发生率明显升高，同时CD83阳性树突状细胞表达率明显减少，而CDlot阳性树突状细胞表达率明显增多，说明肿瘤微环境中浸润树突状细胞的成熟受到明显抑制。三、DC介导的肿瘤免疫治疗目前，以DC肿瘤疫苗为基础诱导的特异性抗肿瘤免疫治疗已成为肿瘤生物治疗研究的热点，其基本原理是通过体外细胞因子联合培养扩增出DC，模拟DC的体内成熟过程，并使其接触相应抗原物质(人工合成肿瘤多肽、肿瘤细胞溶解物、肿瘤蛋白抗原、DNA或RNA等)或应用基因工程使肿瘤抗原基因通过载体导人DC，将这些致敏DC回输体内作为疫苗可诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫应答。来越来越多的证据表明，这种过继性免疫治疗方式已日趋成熟，由DC激活的细胞免疫在抗肿瘤过程中起着主导作用，显示出了DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗的巨大前景。（一）DC的体外扩增DC在外周血及组织中分布极少，难以直接获取。在体外定向分化DC的方法出现以后，将DC应用于肿瘤特异性免疫治疗的研究才得以快速发展。DC的体外扩增方法主要有两种：①来自骨髓CD34祖细胞。用GM—CSF和TNF一细胞因子定向诱导扩增骨髓或脐带血CD34祖细胞可获得分化成熟的DC。成人外周血最易获取，HD—CTX后恢复期的血清较小牛血清和普通AB型血清更利于Dc生成；②来自外周血CD14单核细胞。用GM—CSF和IL一4细胞因子诱导分化外周血CD14细胞，可获得不成熟Mo—DC，再加人不同的刺激物如TLR配体、TNF一或单核细胞条件培养液等可分化为同源的具有较高活性的成熟DC，体内和体外实验均可诱导出CTLs。此外，有研究者发现外周来源的单核细胞与LAK细胞共同培养，LAK细胞可促进DC细胞的成熟。但是，应用的DC多来自人体外周血单核细胞诱导、扩增，技术难度较大，这在一定程度上将会限制其大规模临床应用，因此现有DC扩增法还有待改进或发明新的高效DC制备方法。（二）DC疫苗DC能有效地呈递肿瘤抗原，使其能被T细胞识别从而激活机体的抗肿瘤免疫反应，目前用于肿瘤特异性主动免疫治疗的DC疫苗大致可分为两类，DC多肽疫苗和DC基因疫苗。DC多肽疫苗有以下几种：①肿瘤特异性表位肽刺激的DC。来源于确定原的MHCI类分子限制性的7—10个氨基酸肤段被最常用作DC疫苗，易于生产和标准化；②肿瘤细胞溶解物致敏DC。利用超声波破碎、反复冻融、诱导细胞凋亡的的方法制备肿瘤抗原；③肿瘤细胞与DC的融合。采用聚乙二醇法或电融法将DC与肿瘤细胞融合，这种融合细胞既能表达DC自身的表面免疫应答分子，同时又可获得肿瘤细胞的肿瘤抗原信息；④Exosomes小体负载DC。由抗原递呈细胞分泌的Exosome富含主MHCI、Ⅱ及其刺激分子，在肿瘤模型中可发挥有效的免疫刺激作用，已成为肿瘤免疫治疗的新热点。Exosomes可作为一种新型的亚细胞成分的DC疫苗，开辟一条无细胞体系诱导体内免疫功能的新途径。DC基因疫苗主要包括负载DNA的DC疫苗、负载蛋白质的DC疫苗、负载RNA的DC疫苗、导人编码肿瘤相关抗原的DC疫苗、及导入编码细胞因子基因的DC疫苗，通过提高其对抗原的摄取、加工、呈递能力，从而提高机体对肿瘤的抵抗能力。（三）DC治疗肿瘤的临床应用近年来，DC的临床研究及应用已相当广泛，Nestle等进行的第一个研究用一百万个负载了KLH和肿瘤抗原肤或肿瘤细胞裂解物的DC淋巴结注射，显示了较好的临床反应。Ni等采用自体肿瘤裂解液处理的Dc疫苗瘤内注射治疗10例淋巴瘤病人，有1例完全缓解、4例部分缓解。Kuglar等对17例晚期。肾癌病人用DC融合疫苗进行治疗，结果表明41％的患者获得疗效，其中有4例完全缓解。Heise等刮对13例前列腺患者进行PSA—mRNA转染致敏DC，13例患者体内PSA均有下降，无不良反应。近年来，DC疫苗作为肿瘤生物治疗的方案已获的美国FDA批准正式进入临床试验，DC疫苗的研究展现了极好的发展和临床应用前景四、展望自从1992年肿瘤免疫共刺激学说建立以来，抗原递呈细胞(APC)在肿瘤免疫治疗中的地位受到重视，尤其是DC在肿瘤治疗的研究取得了明显的进步。DC疫苗的抗肿瘤治疗，是继传统的手术、放疗、化疗后又一新兴的方法，在恶性肿瘤的预防和治疗中显示了较好的应用前景，然而DC疫苗在临床应用中仍有很多问题存在，如原料不足，由于DC在自然状态下数量很少，且体外培养困难，存活时间短，一般不超过2周，成本高。另外DC有许多亚群，有的具有免疫增强，有的具有免疫耐受作用，如何增强DC抗原递呈的目的，优化肿瘤抗原疫苗，促进DC向抗肿瘤亚型分化，此外DC疫苗的最佳应用剂量、次数、途径与时间，疫苗佐剂联合应用等，迄今为止还需要更多的研究为制定一个标准的DC体外的制备和成熟的方案和有效的肿瘤抗原负载DC的方法以及DC疫苗回输到患者体内的最佳途径和剂量。目前尽管DC疫苗已应用于临床，成功诱导肿瘤特异性CTLs，但大多仅为I、II期临床试验，临床反应仍有一定的差异，距离大量应用于临床尚存在一定的距离，仍然需要更深入的研究提高DC疫苗的有效性，但不可否认的是DC及DC疫苗的研究有非常广阔的前景。参考文献：高秋,李锦添.树突状细胞与肿