基因编辑质控专员岗位招聘考试试卷及答案

基因编辑质控专员岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.CRISPR/Cas9系统的核心组件包括______和sgRNA。2.Cas9蛋白识别的经典PAM序列为______。3.用于检测基因编辑脱靶的常用半定量方法是______。4.基因编辑中，双链断裂（DSB）的主要修复途径包括NHEJ和______。5.碱基编辑技术中，将胞嘧啶转化为胸腺嘧啶的类型是______（CBE/ABE）。6.基因治疗产品质控需遵循的核心规范之一是______（如GxP）。7.慢病毒载体包装常用的包装细胞系是______（如HEK293T）。8.脱靶效应是指基因编辑工具对______的非靶标位点进行切割或修饰。9.下一代测序（NGS）用于脱靶检测的优势是______（如全基因组范围）。10.CAR-T细胞产品中，基因编辑常针对的T细胞靶点是______（如CD19）。二、单项选择题（共10题，每题2分）1.以下哪种方法可实现基因编辑脱靶的全基因组无偏检测？A.SurveyorassayB.NGSC.qPCRD.WB2.Cas9蛋白的切割位点位于PAM序列的______端？A.5’B.3’C.上游D.下游3.以下哪项不属于基因编辑产品质控的关键项？A.编辑效率B.脱靶效应C.载体残留D.细胞生长速度4.碱基编辑技术（CBE）的作用机制不包括？A.产生DSBB.胞嘧啶脱氨C.无需供体DNAD.单碱基替换5.慢病毒载体质控中，必须检测的指标是？A.复制型慢病毒（RCL）B.细胞活力C.蛋白浓度D.培养基成分6.以下哪种sgRNA设计更易降低脱靶风险？A.高GC含量B.与靶序列完全匹配C.包含多个PAM位点D.长度15nt7.基因编辑产品申报IND时，需提交的质控数据不包括？A.编辑效率验证B.脱靶检测结果C.动物实验全部原始记录D.产品纯度分析8.以下哪种修复途径更易产生插入缺失（indel）突变？A.NHEJB.HDRC.BERD.MMR9.用于检测基因编辑后indel的定性方法是？A.琼脂糖凝胶电泳B.流式细胞术C.质谱D.高效液相色谱10.基因编辑质控中，“无菌”检测属于？A.安全性指标B.有效性指标C.稳定性指标D.纯度指标三、多项选择题（共10题，每题2分，多选、少选、错选均不得分）1.基因编辑产品质控需评估的有效性指标包括？A.编辑效率B.脱靶效应C.功能活性D.载体残留E.无菌2.CRISPR/Cas9脱靶的影响因素包括？A.sgRNA设计B.Cas9浓度C.靶序列同源性D.细胞类型E.培养基pH3.碱基编辑的优势包括？A.无需产生DSBB.低脱靶风险C.无需供体DNAD.可实现精准单碱基替换E.编辑效率高4.慢病毒载体包装的关键质控节点包括？A.包装细胞活力B.载体滴度C.RCL检测D.内毒素含量E.培养基更换频率5.基因编辑脱靶检测的常用方法包括？A.NGSB.SurveyorassayC.T7E1assayD.GUIDE-seqE.qPCR6.基因编辑质控需遵循的法规指南包括？A.中国NMPA《基因治疗产品质控考虑要点》B.FDA《人类基因治疗产品IND申请指南》C.ICHQ3DD.欧盟EMA《先进治疗药物产品（ATMP）指南》E.WHO《基因治疗产品质控规范》7.CAR-T细胞产品质控的关键项包括？A.T细胞纯度B.编辑效率C.脱靶检测D.内毒素E.无菌8.基因编辑中，HDR修复的特点包括？A.依赖同源供体B.可实现精准编辑C.效率低于NHEJD.无需Cas9切割E.仅发生在分裂细胞9.以下哪些属于基因编辑产品的安全性质控指标？A.脱靶效应B.载体残留C.内毒素D.无菌E.编辑效率10.用于检测基因编辑后蛋白表达的方法包括？A.WBB.ELISAC.流式细胞术D.质谱E.琼脂糖电泳四、判断题（共10题，每题2分，正确打√，错误打×）1.Cas9蛋白仅能识别NGGPAM序列。（）2.Surveyorassay可定量检测基因编辑脱靶位点。（）3.碱基编辑技术不会产生双链断裂（DSB）。（）4.慢病毒载体质控中，RCL检测是必须项。（）5.qPCR可直接检测全基因组范围内的脱靶位点。（）6.HDR修复仅发生在细胞分裂期。（）7.基因编辑产品申报IND时，无需提交脱靶检测数据。（）8.碱基编辑中的ABE可将腺嘌呤转化为鸟嘌呤。（）9.无菌检测属于基因编辑产品的有效性指标。（）10.sgRNA长度越长，脱靶风险越高。（）五、简答题（共4题，每题5分）1.简述基因编辑产品质控中“编辑效率”的常用检测方法及原理。2.简述脱靶效应的定义及质控中常用的检测策略。3.简述基因编辑质控需遵循的核心法规与指南。4.简述慢病毒载体包装过程中的关键质控节点。六、讨论题（共2题，每题5分）1.如何平衡基因编辑的编辑效率与脱靶风险？2.针对CRISPR/Cas9基因治疗产品，若NGS检测发现低水平脱靶，应如何制定后续质控策略？---答案部分一、填空题答案1.Cas9蛋白2.NGG3.Surveyorassay（或T7E1assay）4.HDR5.CBE6.GxP7.HEK293T8.基因组9.全基因组范围无偏检测10.CD19二、单项选择题答案1.B2.A3.D4.A5.A6.B7.C8.A9.A10.A三、多项选择题答案1.AC2.ABCD3.ABCDE4.ABCD5.ABCDE6.ABCDE7.ABCDE8.ABC9.ABCD10.ABCD四、判断题答案1.×2.×3.√4.√5.×6.√7.×8.×9.×10.×五、简答题答案1.编辑效率检测方法及原理：常用方法包括：①qPCR：通过靶序列特异性引物定量编辑前后DNA，计算突变比例；②Surveyor/T7E1assay：核酸酶识别错配双链（indel）并切割，琼脂糖电泳观察条带比例；③NGS：测序靶区域，统计野生型与突变型占比；④流式细胞术：若引入荧光标记，通过荧光强度计算阳性细胞比例。核心原理是区分编辑前后核酸/蛋白差异，量化突变或功能改变的细胞比例。2.脱靶效应定义及检测策略：脱靶指基因编辑工具对非靶标基因组位点的切割/修饰。检测策略分两类：①靶向检测：针对预测脱靶位点（同源性高区域），用PCR+测序/Surveyorassay验证；②无偏检测：用NGS（如GUIDE-seq）全基因组筛选脱靶位点，再靶向测序确认。质控需结合两者，优先验证高风险位点，评估全基因组脱靶背景。3.核心法规与指南：需遵循：①中国NMPA：《基因治疗产品质控考虑要点》《生物制品分析方法验证指南》；②FDA：《人类基因治疗IND指南》；③欧盟EMA：《ATMP指南》；④ICH：Q2（方法验证）、Q3D（元素杂质）等。同时符合GxP（GLP/GMP/GCP）规范，确保方法验证、数据可追溯、产品安全有效。4.慢病毒载体包装关键质控节点：①包装前：HEK293T细胞活力≥90%、无支原体；②包装中：监控转染效率（荧光标记）、细胞形态；③收获后：①载体滴度（qPCR/荧光报告）；②RCL检测（排除复制型病毒）；③内毒素≤0.1EU/ml；④纯度（去细胞碎片）；⑤无菌检测（药典要求）。每个节点记录数据，确保载体符合实验/申报要求。六、讨论题答案1.平衡编辑效率与脱靶风险：①sgRNA设计：选特异性高（低同源性）、PAM匹配的序列，避免高GC；②工具优化：用高保真Cas9（如SpCas9-HF1）或碱基编辑（降低DSB脱靶）；③剂量控制：优化Cas9/sgRNA浓度（过高增加脱靶）；④检测策略：结合靶向+无偏脱靶检测，选脱靶风险低的方案；⑤细胞适配：分裂细胞选HDR，非分裂选碱基编辑。需在有效前提下，将脱靶控制在临床可接受范围（如无功能基因脱靶）。2.低水平脱靶