2025年大学生物技术（基因克隆）试题及答案

2025年大学生物技术（基因克隆）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共40分）（总共10题，每题4分，每题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）1.基因克隆的核心步骤是A.目的基因的获取B.载体的选择与构建C.目的基因与载体的连接D.重组DNA导入受体细胞2.以下哪种方法不是获取目的基因的常用方法A.从基因组文库中筛选B.从cDNA文库中筛选C.化学合成法D.细胞融合法3.用于基因克隆的载体不包括A.质粒B.噬菌体C.病毒D.核糖体4.限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端通常是A.平末端B.粘性末端C.平末端或粘性末端D.以上都不对5.连接目的基因与载体常用的酶是A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆转录酶D.DNA连接酶6.将重组DNA导入受体细胞的方法不包括A.转化B.转导C.显微注射D.细胞呼吸7.蓝白斑筛选法中，含有重组质粒的菌落呈现A.蓝色B.白色C.无色D.绿色w8.基因克隆过程中，用于筛选阳性克隆的方法是A.抗性筛选B.PCR筛选C.酶切鉴定D.以上都是9.以下关于基因克隆的说法错误的是A.可以用于生产生物制品B.只能用于动物细胞C.可用于基因治疗研究D.有助于揭示基因功能10.构建基因组文库时，首先要分离细胞的A.蛋白质B.核酸C.多糖D.脂质第II卷（非选择题，共60分）（总共4题，11题10分，12题15分，13题15分，14题20分，按要求作答）11.简述基因克隆的基本流程。12.请说明获取目的基因的三种常见方法及其原理。13.现有一未知基因，设计一个基因克隆的实验方案，包括实验步骤和所需试剂。14.阅读以下材料：在基因克隆研究中，研究人员发现了一种新的基因，其功能未知。他们首先通过PCR技术从基因组中扩增出该基因片段，然后将其连接到合适的载体上，导入大肠杆菌细胞中进行表达。通过一系列筛选方法，最终获得了阳性克隆。请回答以下问题：（1）PCR技术扩增目的基因的原理是什么？（2）连接目的基因与载体时需要注意哪些问题？（3）简述筛选阳性克隆的具体步骤和方法。答案：1.C2.D3.D4.C5.D6.D7.B8.D9.B10.B11.基因克隆基本流程：首先获取目的基因，可通过从基因组文库或cDNA文库筛选、化学合成等方法。然后选择与构建合适载体，如质粒等。接着将目的基因与载体连接。再把重组DNA导入受体细胞，如大肠杆菌等。最后通过筛选方法，如抗性筛选、PCR筛选等获得阳性克隆并鉴定。12.常见方法及原理：从基因组文库中筛选，原理是将生物体基因组DNA切割成一定大小的片段，与载体连接构建文库，根据目的基因的序列特征从文库中筛选。从cDNA文库中筛选，以mRNA为模板，经逆转录合成cDNA，构建文库筛选目的基因。化学合成法，根据已知基因序列，通过化学方法合成目的基因。13.实验方案：提取基因组DNA作为模板。设计特异性引物，进行PCR扩增目的基因。回收PCR产物，用限制性核酸内切酶切割目的基因和载体，使其产生互补末端。用DNA连接酶连接目的基因与载体。将重组质粒导入大肠杆菌感受态细胞。用含抗生素的培养基筛选阳性克隆，提取质粒进行酶切鉴定和测序验证。所需试剂：基因组DNA提取试剂盒、PCR试剂、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、抗生素等。14.（1）PCR技术扩增目的基因原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5′末端和3′末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。（2）连接目的基因与载体时注意载体和目的基因的末端要匹配，连接酶的用量合适，反应体系的条件如温度、缓冲液等要适宜，防止载体自身环化等。（3）筛选阳性