2025年大学大四（基因工程）载体构建毕业测试试题及答案

2025年大学大四（基因工程）载体构建毕业测试试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题共40分）（总共20题，每题2分，每题只有一个选项符合题意，请将正确答案填写在括号内）1.以下哪种载体常用于基因工程中构建表达载体？（）A.噬菌体载体B.质粒载体C.人工染色体载体D.病毒载体2.构建载体时，用于连接外源基因和载体的酶是（）。A.限制性内切酶B.DNA聚合酶C.DNA连接酶D.逆转录酶3.载体上的多克隆位点是（）。A.一段富含多种限制性内切酶识别位点的区域B.用于筛选重组载体的标记基因区域C.启动外源基因转录的区域D.增强外源基因表达的区域4.在载体构建中，蓝白斑筛选利用的是（）。A.抗性基因的表达差异B.荧光蛋白的表达C.β-半乳糖苷酶基因的功能D.绿色荧光蛋白的发光原理5.以下关于质粒载体的特点，错误的是（）。A.分子量较小B.能自主复制C.含有多个抗性基因D.通常是线性DNA6.构建表达载体时，启动子的作用是（）。A.终止外源基因的转录B.启动外源基因的复制C.启动外源基因的转录D.增强外源基因的稳定性7.载体上的抗性基因主要用于（）。A.筛选含有载体的细胞B.促进外源基因的表达C.调控载体的复制D.提高载体的稳定性8.人工染色体载体相比其他载体，优势在于（）。A.能容纳更大的外源DNA片段B.更容易构建C.复制效率更高D.表达效果更好9.构建载体时，需要对载体进行酶切处理，其目的是（）。A.破坏载体的抗性基因B.产生粘性末端便于连接外源基因C.促进载体的自主复制D.增强载体的稳定性10.以下哪种不是常用的限制性内切酶类型？（）A.I型B.II型C.III型D.IV型11.在载体构建中，连接反应的最佳温度通常是（）。A.4℃B.25℃C.37℃D.42℃12.载体构建过程中，转化的目的是（）。A.将重组载体导入受体细胞B.筛选含有重组载体的细胞C.鉴定重组载体的正确性D.扩增重组载体13.用于筛选重组载体的方法不包括（）。A.抗性筛选B.蓝白斑筛选C.核酸测序D.荧光定量PCR14.载体上的增强子元件可以（）。A.抑制外源基因的表达B.增强外源基因的表达C.调控载体的复制D.提高载体的稳定性15.构建基因文库时，常用的载体是（）。A.质粒载体B.噬菌体载体C.人工染色体载体D.病毒载体16.载体构建中，感受态细胞的制备是为了（）。A.提高细胞对重组载体的摄取能力B.促进细胞的生长C.增强细胞的抗性D.鉴定细胞的类型17.以下关于载体构建流程的正确顺序是（）。①酶切载体和外源基因②连接反应③转化④筛选重组载体⑤提取载体和外源基因A.⑤①②③④B.①②③④⑤C.⑤③①②④D.①⑤②③④18.载体构建中，常用的宿主细胞不包括（）。A.大肠杆菌B.酵母菌C.植物细胞D.动物病毒19.构建载体时，如果外源基因与载体连接方向错误，可能会导致（）。A.外源基因无法表达B.载体无法复制C.筛选结果错误D.载体稳定性降低20.以下哪种载体构建方法适用于大片段DNA的克隆？（）A.粘性末端连接法B.平端连接法C.同源重组法D.以上都不适用第II卷（非选择题共60分）（总共3题，每题20分）21.简述载体构建的基本流程及各步骤的关键要点。22.请说明在载体构建中，如何选择合适的载体和限制性内切酶？23.现有一段外源基因，设计构建表达载体的方案，包括载体选择、酶切位点设计、连接反应条件等，并说明如何筛选和鉴定重组载体。答案：1.B2.C3.A4.C5.D6.C7.A8.A9.B10.D11.B12.A13.D14.B15.B16.A17.A18.D19.A20.C21.载体构建基本流程及关键要点：首先提取载体与外源基因，提取时要保证载体完整、外源基因纯度高。然后用限制性内切酶酶切载体和外源基因，关键是选择合适酶切位点，保证产生匹配粘性末端。接着进行连接反应，控制反应条件如温度、时间等，提高连接效率。之后转化，要制备感受态细胞，提高转化成功率。最后筛选重组载体，利用抗性、蓝白斑等方法准确筛选出阳性克隆。22.选择合适载体：根据外源基因大小选择，小片段选质粒载体，大片段选人工染色体载体等。考虑宿主细胞类型，如大肠杆菌选相应质粒。关注载体抗性基因、多克隆位点等元件。选择限制性内切酶：依据载体和外源基因上的酶切位点，选能产生匹配粘性末端的酶。避免载体自身环化，可选用双酶切。考虑酶切效率、活性等因素，确保酶切效果良好。23.载体选择：选高拷贝质粒载体。酶切位点设计：在载体多克隆位点选合适