临床医学检验考试辅导《微生物检验》肠杆菌科及检验讲义

肠杆菌科及检验

・考点

＞概述

概念；命名与分类原则；共同特点；自然与人体内的分布；微生物学检查方法；临床意义。

＞埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。

生物学性状；微生物学检验；临床意义。

【内容讲解】

一、概述（共性）

肠杆菌科是由多个菌属组成，G杆菌，牛.物学性状相似。

大多数多道杆菌属「止常菌群,当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。

部分为致病性细菌。

（一）分类

肠杆菌科细菌的种类繁多。主要根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。根

据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为2（）个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、

枸椽酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登将菌属、变形

杆菌属、摩根菌属、耶尔森菌属等。

（二）生物学特性

1.形态与染色

G,杆菌,大小为（1.0〜6.Q）umX（0.3〜1.0）Um。

多数有周鞭毛（除志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC）,无芽胞，少数菌属细菌可形成荚

膜。

2.培养

需氧或兼性厌氧；营养要求不高；

普皿和麦康凯培养基：中等大小、表面光滑的菌落；

液体培养基：混浊生长。

3.生化反应

发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；

乳糖发酵试验：非致病菌+,致病菌-（除外变形杆菌）O触酶阳竹三氧化酶阴性；硝酸盐还原为亚

硝酸盐。

4.抗原构造

＞菌体（0）抗原］

＞卜肠杆菌科血清学分群和分型的依据

＞鞭毛（H）抗原J

＞表面抗原（如Vi抗原、K抗原）：包绕在。抗原外的不耐热的多糖抗原，可阻断。抗原与相应抗体

之间的反应，加热处理能破坏其阻断作用。

5.变异

＞菌落S〜R变异

＞鞭毛H〜。变异

＞耐药性变异

>生化反应性质的改变

6.抵抗力

不强。加热60℃,30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。

7.肠杆菌科的初步分类

苯丙氨酸脱氨酶

（+）I（-）

变形杆菌属葡萄糖酸盐试验

普罗威登斯菌属（+）1_________I__________（-）

摩根菌属二

克雷伯菌属埃希菌属

肠杆菌属志贺菌属

沙雷菌属沙门菌属

哈夫尼亚菌属枸椽酸杆菌属

爱德华菌属

耶尔森菌属

（三）致病性

1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹

泻及肠热症等。

2.条件致病菌：为医院感染主要病原菌，出现移位感染。大肠埃希菌、变形杆菌及克雷伯菌等条件致

病菌可引起泌尿生殖道、伤口等部位的感染。

（四）微生物检验

1.分离培养

粪便或肛拭标本一增的一肠道曲选择培养基I

血、尿或脓汁等一肉汤增菌一血琼脂培养基1

-----►纯菌（菌落）----->结合革兰染色及氧化酶反应结果作

进一步鉴定

2.鉴定

（1）初步鉴定：

①确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-发醉试验及氧化酯试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别：

②肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为三个类群:

③选择生化反应进行属种鉴别。KIA和MIU将细菌初步定属.

（2）最后鉴定：

根据生化反应的结果初步定属、种，再用诊断血清做凝集反应才能作出最后判断。

二、埃希菌属

5个种：大肠埃希菌、嶂螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。

临床最常见的是大肠埃希菌。

（-）生物学性状

1.形态与染色

G,短杆菌，（1.0-3.0）umX（0.4〜0.7）urn,,多数有周鞭毛，有菌毛，有荚膜或微荚膜。

2.培养特性

＞兼性厌氧菌；营养要求不高。

＞普通营养肉汤：浑浊生长。

A普通营养琼脂：圆形，凸起，边缘整齐，灰白色的S型菌落,直径2〜3mm。

＞血琼脂平板：少数菌株产生『-溶血环。

＞伊红业中监琼脂：菌落呈监紫色并有金属光泽（发蹄乳糖）。

＞麦康凯和SS琼脂：粉红色菌落。

3.生化反应

＞发酵葡萄糖、乳糖、麦芽蒲和甘露醇产酸产气，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。

＞叫I喙、甲基红、V-P、枸椽酸盐试验（DIViC试验）为++--。

＞克氏双糖铁琼脂（K1A）：斜面和底层均产酸产气，H2s1-）。

＞动力-吧噪-尿素（MIU）培养基为++-。

4.抗原结构

＞菌体抗原（0）、表面抗原（K）和鞭羊抗原（H）三种构成。

＞现已知有171种0抗原，100种K抗原和56种H抗原。

＞一个菌株的抗原类型由特殊的0、K和H抗原的代码表示，其血清型别的方式是按（）：K：H排列，例

如0111：K58：H2o

（二）致病性

致病物质：主要是侵袭力、内毒素、肠毒素等。

所致疾病：

1.肠道外感染以泌尿系统感染常见，还有菌血症，胆囊炎，腹腔脓肿。

2.肠道感染（致病性大肠埃希菌）

肠产毒型大肠埃希菌（四茎）：引起霍乱样肠毒素腹泻（虫追）。

肠致病型大肠埃希菌（比区）：主要引起婴儿腹泻。

肠侵袭型大肠埃希菌（鱼里）：可侵入结肠黏膜上皮，引起痢疾样腹泻（钻液脓血便）。

肠出血型大肠埃希菌（生区）：又称产志贺样毒素（口）大肠埃希菌（SLTEC或UTEC）,其中0157：

H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（既）。

临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热、呕吐等。严重者可发展为急性肾衰竭。

肠黏附型大肠埃希茵（EAggEC）：新近报道能引起腹泻。

3.CDC将大肠埃希菌（）157：H7列为常规检测项目

＞在北美许多地区，0157：H7占肠道分离病原菌的第二或第三位，是从血便中分离到的最常见的病原

菌。

＞6、7、8三个月0157：117感染的发生率最高。

＞0157是4岁以下儿童急性肾衰的主要病原菌。

（三）微生物检验

1.标本采集

＞肠道感染可采集粪便；

＞肠道外感染可根据临床感染情况采集中段尿液、血液、冻汁、胆汁、脑脊液、痰、分泌液等。

2.检验方法及鉴定

>0抗原分群特异性抗原和型特异性抗原两类。

>根据抗原构造可将志贺菌分为四个血清群，40余种血清型（包括亚型）。K抗原存在时能阻断。抗

原与相应抗血清的凝集作用。加热100℃、60分钟可消除K抗原对0抗原的阻断作用，在一定条件下可产

生S-R变异及耐药性变异。

（二）临床意义

致病物质：

侵袭力：菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞，诱导细胞内吞。

内毒素：破坏肠粘膜：肠壁通透性；肠壁植物神经一一腹痛，腹泻，里急后重，粘液脓血便。

外毒素（志贺毒素，ST）：肠毒素活性；细胞毒活性；神经毒性。

所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢。

1.急性菌痢。

2.中毒性菌痢。

3.慢性菌痢。

传染源为病人和带菌者，经粪口传播。

（三）微生物检验

I.标本采集

尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便,选择脓血便或益液便,必要时可用肛拭子采集。

2.检验方法及鉴定

粪便肛拭标本

I

SS平板中国蓝。r麦康凯平板

II

初步鉴定：

多价血清凝集试验

KIA：K/A、产气-/+、儿5--志贺菌属

MIU：-、+/-、-

氧化酶（一）

最后鉴定

最后鉴定:

增加生化反应

志贺菌属的诊断血清作群型鉴定

鉴别

鉴别:

动力乳糖靛基质赖氨酸黏液酸、醋酸盐、枸椽酸盐

志贺菌-—-—十

大肠埃希菌+++十—

动力氧化酶试验

志贺菌—

类志贺邻单胞菌++

动力硫化氢A-F0诊断血清

志贺菌—--

伤寒沙门菌++

（四）防治原则

＞人工主动免疫用于预防目前尚不理想。

＞预防的主要措施是防止进食被污染的食品、饮料及水，及早发现及早积极治疗携带者。

＞治疗细菌性痢疾一般首选氟嚎诺酮类抗生素。

（五）临床意义

致病因素为侵袭力、内毒素及外毒素（志贺菌A群/I型和II型产生志贺毒素，具有细胞毒、肠毒素、

神经毒）。可引起人类细菌性痢疾，其中可分急性、慢性两利小儿易引起急性中毒性痢疾。慢性菌痢可

人-人传播，污染水和食物可引起暴发流行。

四、沙门菌属

（-）生物学性状

1.形态与染色

G\直杆菌，＜0.7-1.5）HmX（2.0-5.0）um,无芽胞，无荚膜，周鞭七（除鸡沙门菌），多数有

菌毛。

2.培养特性

营养要求不高；

液体培养基：均匀混浊生长；

SS琼脂和麦康凯琼脂培养基：约2〜4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受。产H2s者在SS琼脂上形

成黑色中心菌落。

3.生化反应

不能发酵乳糖（除亚利桑那菌），不产生靛基质，不分解尿素，甲基红反应阳性，V-P试验阴性。大多

数菌株产生H2S,发酵菊萄糖产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气）。

4.抗原结构

》0抗原：有58种，以阿拉伯数字依次标记。

>H抗原：H抗原是定型的依据。H抗原有两相，第一相为特异性抗原，用a、b、c.......表示；第二相

为共同抗原，用1、2、3.......表示。

>表面抗原：已证实沙门菌属有Vi、M和5抗原三种。

5.变异性

>S〜R变异

>H〜0变异

>相位变异：具有双相H抗原（第【相为特异相，第I［相为非特异相）的沙门菌变成只有其中某一相

H抗原的单相菌，称相位变异。

AV〜W变异：失去全部Vi抗原的变异。

（-）致病性

致病因素：侵袭力、内毒素和肠毒素。

所致疾病：

L肠热症即伤寒与副伤寒病。由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。为法定传染病之一。

2.食物中毒

3.慢性肠炎

4.败血症

5.沙门菌的局部感染如颈部、腰部等。

（三）微生物检验

1.标本采集

根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。

肠热症的第一、二周采血液，第二、三周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。

食物中毒采集食物与粪便。

2.检查方法及鉴定

粪便血液骨髓尿液

II

SSor麦康凯平板含0.5%胆盐肉汤硫磺酸盐肉汤

或葡萄糖肉汤|

血平板和肠道鉴别培养基

_____________I

初步鉴定:

KIA：K/A、产气+/-、H2S+

/MIU：-、

》鉴定为沙门菌屈

氧化的1触酶九硝酸盐还原

十,沙门菌多价血清阳忤

最后鉴定:

沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌。抗原多价血清与0、II、Vi抗原的单价因子血清。

（三）微生物检验

2.检查方法及鉴定

血清学诊断一一肥达试验

用已知的伤寒沙门菌0、H抗原，副伤寒甲、乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验，以检测患者

血清中抗体的含量，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。

（四）防治原则

预防沙门菌属细菌主要措施：

加强饮食卫生，防止污染食品及水源经I」感染，携带者的积极治疗，皮下注射死菌苗或口服减毒活菌

苗。

临床治疗：

可选择的抗生素有氯霉素、氟唾诺酮类、氨茉西林、复方磺胺甲恶哇、三代头抱等。

五、变形杆菌属、普罗威登斯菌属及摩根菌属

这三个属的细菌为肠道寄居的正常菌群，在一定条件下能引起各种感染，也是医源性感染的重要条件

致病菌。

生物学特性

1.形态与染色

G\杆菌，两端钝圆，有明显的多形性，呈球状或丝状：周身鞭毛（摩根菌属的部分菌株在30℃以.1:

培养条件下不形成鞭毛），无芽胞，无英膜。

2.培养特性

需氧或兼性厌氧，营养要求不高，生长温度10〜43℃。

营养琼脂和血琼脂平板：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长现象。产黏变形

杆菌具有产生黏液状薄膜层的能力及溶血性质。

普罗威登斯菌和摩根菌无迁徙生长现象。

含有胆盐的培养基：菌落呈扁平、圆形、半透明。

含有铁或铅离子的培养基:产硫化氢菌株菌落中心呈黑色。

SS培养基：与沙门菌、志贺菌相似的菌落特征。

液体培养基：迅速生长，早期培养物呈混浊，有部分沉淀。

3.生化反应三属菌共同特点是氧化酶阴性，苯丙氨酸脱双酶阳性的革兰阴性杆菌。

属间鉴别：

变形杆菌属普罗威登斯菌属摩根菌属

迁徙生长+——

硫化氢产生+——

液化明胶+一一

脂酶+——

鸟氨酸脱竣酶——+

枸檄酸盐利用—+—

变形杆菌属的种鉴别:

普通变形杆菌奇异变形杆菌产黏变形杆菌

靛基质+一—

麦芽糖+一+

鸟氨酸脱按酶—+—

普罗威登斯菌属的种鉴别:

产碱普罗威登斯菌斯氏普罗威登斯菌雷氏普罗威登斯菌

麻酶—-/++

草糖—4-—

侧金盏花醉+—+

（二）致病性

1.变形杆菌属

普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起尿道、创伤、烧伤的感染。普通变形杆菌还可引起多种感染及食物

中毒；奇异变形杆菌还可引起婴幼儿肠炎。产黏变形杆菌尚无引起人类感染的报道。

外-斐（Weil-Felix）反应：普通变形杆菌0X19、0X2、OXk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，是

用以诊断某些立克次体病的依据。

2.普罗威登斯菌属本属菌可引起烧伤、创伤与尿道感染。

3.摩根菌属本属细菌为医源性感染的重要病原菌之一。

（三）微生物检验

1.标本采集采集尿液、脓汁、伤口分泌物及婴儿粪便等。

2.检验方法及鉴定

（1）直接涂片

（2）分离培养：接种于血琼脂平板和麦康凯或伊红亚甲蓝（EMB）琼脂平板：或SS琼脂和麦康凯或EMB

琼脂平板上。

变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长，在肠道菌选择培养基上形成不发酵乳糖菌落，在SS琼脂上常为有

黑色中心的菌落。

（3）鉴定

六、耶尔森菌属

耶尔森菌属包括11个种；

其中鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌和小肠结炀炎耶尔森菌与人类致病有关。

(一)鼠疫耶尔森菌

(-)小肠结肠炎耶尔森菌

(三)假结核耶尔森菌

(-)鼠疫耶尔森菌

俗称鼠疫杆菌，是烈性传染病鼠疫的病原菌。

鼠疫是自然疫源性传染病，通过直接接触染疫动物或节肢动物叮咬而感染。

1.生物学特性

(1)形态与染色：

G,杆菌，短而粗，两端钝圆，两极浓染，(1.0〜2.0)umX(0.5〜0.7)um。

有英膜，无鞭毛，无芽胞。

(2)培养特性：

＞需氧和兼性厌氧。最适生长温度是28〜30C,培养基最适pH为6.9〜7.1。

＞培养16〜18h,用显微镜观察可见一层形状不一,浅灰色小菌落，这是鼠疫耶尔森菌培养初期的菌

落特征(鉴定意义)。

＞培养24〜48h后可形成直径0.1〜0.2mm,圆形,中心突出,透明的浅灰色小菌落。

＞液体培养基：形成絮状沉淀和菌膜。底部絮状沉淀堆枳呈“钟乳石”状。

(3)生化反应：

KIA：K(A)/A,H2s(-)

MIU：-、-、-

2.微生物检验

标本采集：主要采集血液、痰和淋巴结穿刺液。

检验方法及鉴定：

注：鼠疫耶尔森菌为甲类病原菌，传染性极强，故应严格遵守检验操作规程，要求实验室有隔离设施,

防鼠、防蚤和严密的个人防护措施；用过的实验器材及物品随时消毒处理。

直接涂片检查；分离培养；鉴定；最后鉴定(①噬菌体裂解试验；②动物试验；③免疫学方法)。

(二)小肠结肠炎耶尔森菌

1.生物学性状

(1)形态与染色

菌体大小为(1.()〜2.0)umX(0.5-1.0)nm,25c培养时形成周鞭毛，呈翻滚旋转状运动，37℃

培养无动力,无芽胞，无荚膜的革兰阴性球杆菌.

(2)培养特性

＞需氧或兼性厌氧，4〜40℃均能生长，最适生长温度为23〜28℃。

＞血琼脂平板上，形成直径为1〜2mm,圆形光滑，凸起的菌落。

＞麦康凯培养基上生长，形成不发酵乳糖的无色、透明或半透明、扁平、较小的菌落。

＞SS琼脂板上生长不良。

＞液体培养基中呈混浊生长，液体表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。

(3)生化反应：

葡萄糖和蔗糖产酸不产气，绝大多数菌株不发酵乳糖，硫化氢阴性，眼酶阳性,验基质不定。VP试验

25℃阳性，37℃阴性,鸟氨酸脱粉酶阳性。

2.致病性

（1）致病因素：侵袭力和肠毒素。

（2）所致疾病：人畜共患病，动物感染后多无症状，通过消化道传播引起人类肠道感染性疾病。

小肠结肠炎、末端回肠炎、胃肠炎、阑尾炎和肠系膜淋巴结炎。除肠道感染外尚可发生败血症，结节

性红斑及关节炎等。

3.微生物检验

（1）标本采集：标本来自被检者粪便、血液、尿液、食物或脏器组织等。

（2）检验方法及鉴定：

1）分离培养：粪便标本可直接接种于麦康凯、NyE（耶尔森选择性琼脂）或SS琼脂。

2）鉴定：

菌落形态-一G-—氧化酶（-）—初步鉴定-一血清学鉴定

30℃以下动力（+）

，酶（+）

（H）假结核耶尔森菌

＞啮齿动物家畜和禽类致病，并通过污染食物导致人类感染。人类感染少见，偶见肠道感染及肠系膜

淋巴结炎。

＞菌体呈球形或短杆形，两瑞浓染。25℃培养有周鞭毛，有动力，37c培养无动力。

＞兼性厌氧，最适生长温度30℃,pH6.0~8.0。

＞菌落：圆形，中心凸起，呈颗粒状，灰黄色，半透明的菌落。

＞血琼脂平板上不溶血，SS琼脂上不生长，能在含胆盐培养基或麦康凯培养基上生长。

＞在液体培养基中呈均匀浑浊生长者为光滑型菌株，沉淀生长为粗糙型菌株。

七、肠杆菌科的其他菌属

在临床感染标本中具有较高的分离率，大多属于条件致病菌。

＞枸椽酸杆菌属

＞克雷伯菌属

＞肠杆菌属

＞沙雷菌属

枸豫酸杆菌属

包括弗劳地枸檬酸杆菌、异型枸檬酸杆菌和无丙二酸盐枸椽酸杆菌三个种，属正常菌群成员。

1.生物学性状

（1）形态与染色：G,直杆状，无荚膜，无芽胞，具有周鞭毛。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高。在血液琼脂上的菌落不溶血，在肠道选择培养基上

发障乳糖，在液体培养基中呈混浊生长。

（3）生化反应：

靛基质硫化氢丙二酸盐

弗劳地枸掾酸杆菌-/++一

异型枸檬酸杆菌+—+

无丙二酸盐枸椽酸杆菌+——

2.致病性

本菌为条件致病菌，常在一些慢性疾病如白血病、自身免疫性疾病或医疗插管术后的泌尿道、呼吸道

中检出，可引起败血症、脑膜炎、骨髓炎、中耳炎和心内膜炎等。

3.微生物检验

（1）标本采集：根据病情可取尿液、痰、血液或脓汁等。

（2）检验方法及鉴定

1）属的鉴定：

B-半乳糖首睡赖氨酸脱竣酶枸椽酸盐利用

枸檬酸杆菌属+一+

沙门菌属-/+++

爱德华菌属一+—

2）种的鉴别：根据产生靛基质、硫化氢、丙二酸盐与否鉴别。

（二）克雷伯菌属

本属细菌共有7个种，引起的医院感染日见增多，其中以肺炎克雷伯菌最为多见。产酸（催娩）克雷

伯菌次之。

1.生物学特性

（1）形态与染色：G,卵圆形或球杆状，成双排列，菌体外有明显荚膜，无鞭毛，无芽胞。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求不高。

在血琼脂上形成圆形，凸起，灰白色，不溶血的粘液性菌落。有时菌落呈现黏液型，用接种环挑取时

呈长丝状。

在肠道菌选择培养基中为乳糖发酵型菌落。

在液体培养基中呈混浊生长，可形成菌膜与黏性沉淀物。

（3）生化反应：

触酹阳性、喔能阳性、氧化酹阴性、鸟氨酸脱竣防阴性。

其中动力和鸟氨酸脱瘦酶阴性是本菌的最大特点。

2.致病性

＞肺炎克雷伯菌肺炎亚种引起婴儿肠炎、肺炎、脑膜炎、序膜炎、外伤感染、败血症和成人医源性尿

道感染。

＞臭鼻•克雷伯菌引起臭鼻症。

＞鼻硬节克雷伯菌引起鼻腔、咽喉和其他呼吸道的硬节病C

＞催娩克雷伯菌可引起呼吸道和泌尿道感染、创伤感染与败血症等。

（三）肠杆菌属

1.生物学特性

（1）形态与染色：G,短而粗的杆菌，有周鞭毛，部分菌株有荚膜，无芽胞。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度为30C,营养要求不高。在普通琼脂上形成大而湿润的罐

液状菌落;在血琼脂板上不溶血；肠道菌选择培养基上多数形成乳糖发酵菌落；在液体培养基中呈均匀混

浊，表面有薄膜，管底有黏稠性沉淀物。

（3）生化反应：

IMViC：-、-、+、+

2.致病性

阴沟、产气、聚团、日勾维等肠杆菌常导致条件致病，引起呼吸道、泌尿生殖道感染，亦可引起菌血

症，引起新生儿脑膜炎。

（四）沙雷菌属

临床标本中以粘质沙雷菌最常见。

1.生物学特性

(1)形态与染色：

G\细小杆菌，有周鞭毛，有些菌种有微荚膜，无芽胞。

粘质沙雷菌是最小的细菌。

(2)培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，在普通营养琼脂上生长良好，呈白色、红色或粉红色菌落。

各种沙雷菌