2026年大学大二（分子生物学）PCR扩增技术操作综合测试题及答案

2025年大学大二（分子生物学）PCR扩增技术操作综合测试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共40分）每题给出的四个选项中，只有一个选项符合题目要求。(总共20题，每题2分，在每题给出的四个选项中，选出最符合题目要求的一项)1.PCR扩增技术中，引物的作用是A.提供模板B.催化合成DNAC.打开DNA双链D.引导DNA合成的起始位置2.以下关于PCR反应体系的说法，错误的是A.需要DNA模板B.不需要dNTPC.需耐高温的DNA聚合酶D.含有引物3.PCR反应的变性温度一般为A.55℃左右B.65℃左右C.72℃左右D.95℃左右4.PCR反应中延伸温度通常是A.55℃B.65℃C.72℃D.95℃5.一个典型的PCR反应需要经历的循环次数通常是A.5-10次B.10-20次C.20-30次D.30-40次6.在PCR扩增过程中，DNA聚合酶延伸的方向是A.3'→5'B.5'→3'C.双向延伸D.随机延伸7.下列哪种物质不是PCR反应所必需的A.Mg²⁺B.缓冲液C.限制性内切酶D.TaqDNA聚合酶8.PCR技术可用于A.基因克隆B.蛋白质合成C.细胞培养D.组织切片9.关于PCR引物设计，下列说法正确的是A.引物长度越长越好B.引物GC含量无要求C.引物自身不能形成互补配对D.引物之间可以互补配对10.PCR反应中退火的目的是A.使DNA双链解开B.使引物与模板结合C.使DNA聚合酶发挥作用D.合成新的DNA链11.以下哪种情况可能导致PCR扩增失败A.引物浓度过高B.dNTP浓度过低C.模板DNA量过少D.以上都有可能12.PCR技术中，模板DNA的纯度要求是A.越高越好B.只要有就行C.有一定杂质也可D.无所谓13.用于PCR反应的DNA聚合酶通常具有A.5'→3'外切酶活性B.3'→5'外切酶活性C.5'→3'聚合酶活性D.以上都是14.PCR反应体系中，缓冲液的作用不包括A.维持pH稳定B.提供反应所需离子C.激活DNA聚合酶D.促进引物与模板结合15.在PCR扩增特定基因时，引物的特异性取决于A.引物长度B.引物与模板结合的互补程度C.引物的浓度D.反应温度16.PCR技术的发明者是A.MullisB.WatsonC.CrickD.Franklin17.PCR扩增后的产物一般通过什么方法进行检测A.电泳B.质谱C.色谱D.比色法18.以下哪种不是常见的PCR反应类型A.普通PCRB.巢式PCRC.反转录PCRD.蛋白质PCR19.PCR反应中，dNTP的作用是A.提供能量B.作为合成DNA的原料C.稳定反应体系D.激活引物20.进行PCR反应时，一般使用的仪器是A.离心机B.培养箱C.PCR仪D.显微镜第II卷（非选择题，共60分）简答题（共20分）(总共4题，每题5分，简要回答问题)1.简述PCR扩增技术的基本原理。2.请说明PCR反应体系中各成分的作用。3.影响PCR扩增效果的因素有哪些？4.PCR技术在分子生物学研究中有哪些应用？分析题（共15分）(总共3题，每题5分，分析所给材料并回答问题)材料：在进行某基因的PCR扩增实验时，设置了三个平行反应管，反应体系和条件完全相同，但最终扩增结果却不同。A管扩增产物条带清晰且亮度适中；B管扩增产物条带模糊，亮度较弱；C管几乎没有扩增产物。1.请分析B管扩增产物条带模糊、亮度较弱的可能原因。2.推测C管几乎没有扩增产物的原因。3.如何改进实验以提高PCR扩增的成功率和效果一致性？实验设计题（共15分）(总共1题，15分，根据要求设计实验)请设计一个利用PCR技术扩增某特定基因的实验方案，包括实验材料、反应体系的组成、反应条件以及结果检测方法。论述题（共10分）(总共1题，10分，结合所学知识进行论述)论述PCR技术的发展历程及其对分子生物学研究的重要意义。答案：第I卷选择题答案：1.D2.B3.D4.C5.C6.B7.C8.A9.C10.B11.D12.A13.C14.D15.B16.A17.A18.D19.B20.C第II卷简答题答案：1.PCR扩增技术基本原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。2.DNA模板：提供扩增的原始模板。引物：引导DNA合成起始位置。dNTP：作为合成DNA的原料。DNA聚合酶：催化DNA合成。缓冲液：维持pH稳定，提供反应所需离子。Mg²⁺：激活DNA聚合酶。3.引物设计、模板质量与浓度、dNTP浓度、DNA聚合酶活性、反应温度与循环次数、缓冲液成分、Mg²⁺浓度等。4.基因克隆、基因表达分析、基因突变检测、遗传疾病诊断、病原体检测、法医鉴定等。分析题答案：1.B管可能原因：引物浓度不合适、模板DNA量不足、dNTP浓度不足、DNA聚合酶活性降低等。2.C管可能原因：引物设计不合理，与模板不匹配；模板DNA降解严重；反应体系中存在抑制物；PCR仪温度控制不准确等。3.改进方法：优化引物设计；确保模板DNA质量和浓度合适；检查dNTP和DNA聚合酶质量；校准PCR仪温度；设置阳性对照和阴性对照。实验设计题答案：实验材料：模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶、缓冲液、Mg²⁺、PCR仪。反应体系组成：适量模板DNA、合适浓度引物、适量dNTP、适量TaqDNA聚合酶、缓冲液、适量Mg²⁺，加水至合适体积。反应条件：95℃变性若干时间，55℃左右退火若干时间，72℃延伸若干时间，进行20-30个循环。结果检测方法：通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。论述题答案：PCR技术发展历程：由Mullis发明，最初技术条件有限，经过不断改进，如优