DB22-T 3434-2023 牛出血性败血怖治技术规范

ICS11.220CCSB41DB22DB22/T3434—2023牛出血性败血病防治技术规范Technicalspecificationsforpreventionandcureofbovinehaemorrhagicsepticaemia2023-03-01实施吉林省市场监督管理厅发布IDB22/T3434—2023本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本文件起草单位：吉林省动物疫病预防控制中心、吉林省畜牧总站。本文件主要起草人：吴丹、于钦磊、王欣睿、马晓媛、白翠、刘冬冬、李伟、常帅、孙亮、胡泽宇、曹东阳、杨金鑫、朱奕霏。DB22/T3434—20231牛出血性败血病防治技术规范本文件规定了牛出血性败血病的诊断、防治措施、疫情报告和疫情处置的要求，描述了档案管理的证实方法。本文件适用于牛出血性败血病的诊断和防治。2规范性引用文件下列文件中的内容通过中文的规范性引用而构成文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T27530牛出血性败血病诊断技术NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T815肉牛饲养标准NY/T3075畜禽养殖场消毒技术NY/T3445畜禽养殖场档案规范NY/T3467牛羊饲养场兽医卫生规范NY5030无公害农产品兽药使用准则NY5032无公害食品畜禽饲料和饲养添加剂使用准则DB22/T3137动物疫情报告管理规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牛出血性败血病bovinehaemorrhagicsepticaemia又名牛巴氏杆菌病，由多杀性巴氏杆菌某些血清型引起的一种牛的高度致死性、急性败血性传染病。4诊断4.1流行病学特点4.1.1病原多杀性巴氏杆菌（pasteurellamultocida），革兰氏阴性球杆状或短杆状菌，两端钝圆，无鞭毛，不形成芽孢。根据荚膜抗原和菌体抗原区分血清型，前者可分为A、B、D、E和F5个血清型，后者2DB22/T3434—2023可分为16个血清型。其中对牛具有致病性的主要是荚膜血清A型、B型或E型。引起牛出血性败血4.1.2传播途径主要通过病牛或带菌牛的排泄物、分泌物经消化道和呼吸道传播。多杀性巴氏杆菌进入动物体内后大量寄生在牛的上呼吸道和消化道黏膜上，各种诱因使牛机体抵抗力降低时，发生内源性感染。外源性传染多经消化道，偶尔可经皮肤黏膜的损伤或吸血昆虫的叮咬而传播。气候突变、长途运输、饥饿、寒冷和饲养管理等不良因素可诱发该病。4.1.3易感动物各品种牛均可感染。4.1.4潜伏期潜伏期一般为2d～5d。4.1.5发病季节发病无明显季节性，冷热交替、气候剧变时多发。4.1.6病死率不同菌株致病性有所差异，强毒力菌株导致的病死率可接近100%。在地方性流行地区，死亡病例主要为较大犊牛和青年牛。4.2临床症状符合GB/T27530描述。4.3病理变化4.3.1多数病牛呈现由严重充血水肿引起的颈部明显肿胀。4.3.2败血型呈一般败血症变化，内脏器官出血，淋巴结显著水肿，胸腹腔有大量渗出液。4.3.3浮肿型在咽喉或颈下有浆液浸润，切开浮肿部流出深黄色透明液体，间或杂有出血，咽周组织和会咽软骨韧带呈黄色胶样浸润，咽淋巴结和颈前淋巴结高度急性肿胀。4.3.4肺炎型主要表现为胸膜炎和格鲁布性肺炎，胸腔中有大量浆液性纤维素性渗出，肺切面呈大理石状，心包与胸膜粘连，内有干酪样坏死物。4.4实验室诊断4.4.1样品采集按NY/T541规定采集鼻腔拭子、抗凝全血或病变组织。4.4.2病原分离鉴定按GB/T27530规定执行。4.4.3荧光PCR法见附录A。DB22/T3434—202334.5结果判定4.5.1临床疑似病例病牛或病死牛符合4.1、4.2和4.3，判定为临床疑似病例。4.5.2临床疑似病例符合牛出血性败血病的流行病学特点、临床表现和病理变化，判定为临床疑似病例。4.5.3确诊病例对临床疑似病例，经上述任一实验室诊断方法检测，结果为阳性的，判定为牛出血性败血病阳性病例。5防治措施5.1免疫5.1.1疫苗应选择符合农业农村部《兽药管理条例》，且具有生产许可证和批准文号的牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗。5.1.2程序散发地区一年免疫1次，多发地区每年免疫2次，具体免疫时间根据各地区牛出血性败血病流行情况而定。发生疫情时，应对同群的假定健康牛进行紧急接种。5.1.3方法依据疫苗使用说明操作。5.1.4注意事项免疫操作后应及时收集针头、注射器、疫苗瓶和残余疫苗，进行无害化处理。5.2治疗5.2.1抗菌消炎疗法可使用青霉素类、链霉素类、四环素类和磺胺类等抗菌药物进行治疗。宜根据药敏试验结果选择抗生素。兽药使用记录应按NY5030规定执行。5.2.2对症疗法在应用抗菌消炎疗法的同时，再结合解热、镇痛、补液、解毒、强心的对症疗法。5.2.3加强营养治疗期间应适当补充维生素，并给予易消化饲料，饲料应符合NY5032的要求。5.3饲养管理DB22/T3434—202345.3.1养殖场应按NY/T815要求保证牛的营养需要。5.3.2兽医卫生符合NY/T3467要求。5.3.3饲养人员应定期观察牛只的采食情况和精神状态。5.3.4周边场发生疫情时，应提高观察频率。5.3.5疾病发生或牛只死亡，应聘请当地具有执业兽医资质的人员进行诊断和治疗。5.4消毒5.4.1养殖场消毒应按NY/T3075规定进行，消毒药应经常更换。5.4.2发生牛出血性败血病，应对感染和发病牛及其污染物、病死牛及其污染物、被污染环境和无害化处理环节实行有效实时消毒。6疫情报告应按DB22/T3137规定执行。7疫情处置7.1确诊后应立即对隔离的病牛进行药物治疗，并对同群假定健康牛进行观察、测温，按5.2执行。7.2病死牛及可能被污染的物品，应按农业农村部《病死及病害动物无害化处理技术规范》规定执行。8档案管理所有记录应按NY/T3445规定进行管理。DB22/T3434—20235多杀性巴氏杆菌荧光PCR检测方法A.1仪器设备A.1.1高速冷冻离心机，最高离心速度不低于12000r/min。A.1.2生物安全柜。A.1.3-20℃冰箱。A.1.4荧光定量PCR仪。A.2耗材A.2.2Eppendorf管，1.5mL、0.5mL、0.2mL。A.2.3PCR管，0.2mL。A.3质控品A.3.1阳性对照，含多杀性巴氏杆菌菌株的培养液。A.3.2阴性对照，无核酸酶水。A.4试剂A.4.1DNA提取试剂盒。A.4.2荧光PCR预混液。A.4.3引物与探针，见表A.1。表A.1引物与探针序列及浓度5’-GCCACCTGCCATAAGATGAGC-3’5’-CGTAGGAGTCTGGACCGTGTC-3’5’-FAM-GCCTACCAAGCCTGCGATCTCTAGC-TAMRA-3’A.5操作步骤A.5.1核酸提取按DNA提取试剂盒方法或其他等效方法提取DNA模板。A.5.2荧光定量PCR扩增体系DB22/T3434—20236在试剂准备区打开和配制试剂，配制完毕后应及时将剩余试剂放回贮存区域。取0.2mLPCR反应管，在冰浴条件下配制20μL反应体系，按照表A.2依次加入以下成分，同时设阴性、阳性对照。加完后盖紧盖子。表A.2样品反应体系A.5.3荧光PCR的扩增条件在核酸扩增区将PCR管置荧光定量PCR仪上按如下程序扩增：95℃预变性30s；95℃变性15s，60℃退火1min，共40个循环，荧光收集设置在60℃进行。A.6结果分析条件设定试验检测结束后，根据生成的荧光曲线和Ct值直接读取检测结果，Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原则上可设定仪器自动模式分析确定阈值基线，特殊情况下阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，不同仪器可对阈值线的位置进行调整，然后读取检测结果。A.7质控标准阴性对照无Ct值并且无典型扩增曲线。阳性对照的Ct值应＜30.0