生物制药纯化工艺优化工程师岗位招聘考试试卷及答案

生物制药纯化工艺优化工程师岗位招聘考试试卷及答案生物制药纯化工艺优化工程师岗位招聘考试试卷一、填空题（每题1分，共10分）1.抗体纯化常用的亲和层析配体是______。2.目标蛋白带正电时，应选择______型离子交换柱。3.除菌过滤常用滤膜孔径为______μm。4.凝胶过滤层析（SEC）分离依据是蛋白______。5.低pH处理属于______（物理/化学）病毒灭活方法。6.HPLC分析蛋白纯度常用______检测器。7.冻干工艺中，冰晶升华的步骤是______。8.超滤膜截留分子量（MWCO）单位通常是______。9.层析柱装填后需验证______（如柱效）。10.离子交换层析中，高盐浓度洗脱的原理是______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.下列不属于层析技术的是：A.亲和层析B.离子交换层析C.电泳D.凝胶过滤2.缓冲液配制应使用：A.自来水B.超纯水C.蒸馏水D.矿泉水3.抗体纯化第一步通常是：A.ProteinA层析B.澄清过滤C.超滤浓缩D.离子交换4.冻干预冻的核心目的是：A.灭活病毒B.形成冰晶C.去除水分D.提高纯度5.超滤跨膜压力（TMP）安全范围是：A.<0.1barB.0.1-1barC.1-5barD.>5bar6.凝胶过滤中分子量最大的蛋白：A.最先洗脱B.最后洗脱C.无法通过D.与流速无关7.属于物理病毒灭活的是：A.低pHB.巴氏消毒C.表面活性剂D.超滤8.HPLC分析蛋白浓度常用：A.蒸发光散射B.UV-VisC.荧光D.质谱9.反向层析固定相是：A.极性B.非极性C.中性D.离子型10.层析柱清洗不包括：A.去除残留蛋白B.恢复柱效C.改变配体特性D.灭活微生物三、多项选择题（每题2分，共20分，多选/少选不得分）1.影响离子交换分辨率的因素：A.缓冲液pHB.盐浓度C.流速D.柱高2.纯化工艺验证内容：A.重复性B.病毒去除率C.蛋白纯度D.回收率3.病毒去除常用方法：A.超滤B.低pHC.巴氏消毒D.阴离子交换4.冻干优化参数：A.预冻温度B.升华温度C.解析温度D.样品浓度5.超滤优化要点：A.MWCO选择B.流速C.压力D.缓冲液pH6.亲和层析优点：A.特异性高B.回收率高C.步骤少D.成本低7.反向层析适合分离：A.疏水性蛋白片段B.极性小分子C.核酸D.亲水性蛋白8.缓冲液配制注意事项：A.准确称量B.pH调节C.过滤除菌D.避光9.层析柱清洗试剂：A.NaOHB.盐酸胍C.乙醇D.去离子水10.ProteinA层析注意事项：A.控制上样量B.优化洗脱pHC.防蛋白聚集D.定期再生四、判断题（每题2分，共20分，√/×）1.ProteinA仅结合IgG的Fc段。（）2.离子交换中，蛋白pI越接近缓冲液pH，结合越强。（）3.SEC可测定蛋白分子量。（）4.预冻温度越低，冻干速度越快。（）5.MWCO越小，截留效果越好。（）6.病毒灭活需无菌环境。（）7.HPLC可分析蛋白纯度。（）8.反向层析流动相为非极性。（）9.层析柱用后可直接封存。（）10.低pH灭活适用于多数蛋白。（）五、简答题（每题5分，共20分，≤200字）1.简述离子交换层析原理及核心步骤。2.ProteinA亲和层析的关键优化参数。3.冻干工艺主要步骤及目的。4.病毒去除/灭活常用方法及验证要求。六、讨论题（每题5分，共10分，≤200字）1.重组蛋白回收率仅30%，分析原因并提优化方案。2.如何延长ProteinA层析柱使用寿命？---答案一、填空题答案1.ProteinA（或ProteinG）2.阳离子3.0.224.分子量（或Stokes半径）5.化学6.UV-Vis（紫外）7.升华8.kDa（道尔顿）9.柱效10.竞争离子交换位点二、单项选择题答案1.C2.B3.B4.B5.B6.A7.B8.B9.B10.C三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.AB8.ABCD9.ABCD10.ABCD四、判断题答案1.×2.×3.√4.×5.×6.√7.√8.×9.×10.√五、简答题答案1.原理：利用蛋白带电性差异，与离子交换树脂可逆结合，通过盐浓度/pH变化洗脱目标蛋白。步骤：①树脂平衡；②上样结合；③低盐洗杂；④高盐/变pH洗脱；⑤树脂再生。2.①上样量：≤树脂饱和容量的80%；②缓冲液pH：上样中性（pH7.0），洗脱低pH（3.0-4.0）；③流速：0.5-1.0mL/min；④洗脱体积：确保完全洗脱；⑤再生：0.1-0.5MNaOH清洗。3.①预冻：-40℃以下形成冰晶，避免蛋白变性；②升华：低温低压下冰晶直接升华（去游离水）；③解析干燥：20-40℃去除结合水，提高稳定性。4.方法：物理（超滤、巴氏消毒）、化学（低pH、表面活性剂）、层析（阴离子交换）。验证：病毒去除率≥10⁴log10，工艺兼容性（不影响蛋白活性），重复性，无病毒残留。六、讨论题答案1.原因：①蛋白聚集（缓冲液pH不当）；②柱过载；③洗脱不充分；④超滤MWCO过大。优化：①调整上样pH远离pI，加表面活性剂防聚集；②降低上样量；③优化洗脱pH/盐浓度；④选择MWCO略