庆大霉素和阿莫西林的协同作用对鸡大肠杆菌病的治疗试验-毕业论文

东北农业大学学士学位论文学号：A06110080庆大霉素和阿莫西林的协同作用对鸡大肠杆菌病的治疗试验2015年11月NEAUB.A.DegreeDissertationNO：A06110080SynergisticEffectofGentamicinandAmoxicillinTreatmentTestofChickenEscherichiaColiStudent’sName：MengYuanjianSupervisor：LiuKexiangDepartmentandfaculty：VeterinaryMedicineMajor：VeterinaryMedicineNortheastAgriculturalUniversityHarbin·ChinaOct·2015庆大霉素和阿莫西林的协同作用对鸡大肠杆菌病的治疗试验-PAGE13-摘要鸡大肠杆菌病是危害鸡养殖业最为严重的疾病之一，是由大肠埃希菌属中的致病性大肠杆菌所致的动物和人共患的一种传染病，以纤维素性浆膜炎、卵黄性腹膜炎和卡他性肠炎等为特征。大肠杆菌病多使用疫苗进行预防，可以使用抗生素进行治疗。大肠杆菌病给养殖业造成极大的经济损失，为了能更好更有效的治疗鸡大肠杆菌病，本实验以自然感染大肠杆菌的患鸡为治疗动物，研究药物单独用药和联合用药对大肠杆菌病的疗效。实验中将经诊断患有大肠杆菌病的雏鸡随机分为3组，每组30只，第一组给药硫酸庆大霉素（100mg/kg拌料）、第二组给药阿莫西林可溶性粉（100mg/kg拌料）、第三组硫酸庆大霉素和阿莫西林可溶性粉联合用药（100mg/kg拌料，各50mg/kg），连续给药5d。主要以各组治愈率和存活率等为标准评价疗效。结果表明，庆大霉素和阿莫西林对鸡大肠杆菌病均有疗效，治愈率分别为83%、73%，而混剂的治愈率为93%。死亡率分别为17%、13%、7%。有效率分别为83%、87%、93%实验结果表明庆大霉素和阿莫西林均可有效控制大肠杆菌病，而混剂可有效增加疗效，联合用药能更好的治疗大肠杆菌病。 关键词：鸡；大肠杆菌；庆大霉素；阿莫西林；单独用药；联合用药AbstractChickenColibacillosisisharmthechickenindustrymostoneoftheseriousdiseasesandiscomposedofaninfectiousdiseaseofgenusEscherichiacolienteropathogenicEscherichiacolicausedbyanimalandzoonotic,characterizedbycelluloseserousinflammation,vitellineperitonitisandcatarrhalenteritis.Escherichiacoliisusedforpreventionandtreatmentofantibiotics.E.colihascausedgreateconomiclossestotheaquacultureindustry,inordertobetterandmoreeffectivetreatmentofchickenE.colidisease,thisexperimenttothenaturalinfectionofchickenforthetreatmentoftheanimal,thestudyofdrugaloneandthecombinationofdrugtreatmentofEscherichiacoli.Thechickenswererandomlydividedinto3groups,30ratsineachgroup.Thefirstgroupwasadministeredwithgentamicinsulfate(100mg/kg),secondgroupsofamoxicillinsolublepowder(100mg/kg),andthirdgroupsofsulfateandamoxicillinsolublepowder(100mg/kg,50mg/kg),5d.Mainlytothecurerateandsurvivalrateofeachgroupasthestandardevaluationofefficacy.Theresultsshowedthatthecureratewas83%and73%respectively,andthecureratewas93%.Mortalityrateswere17%,13%,7%.Theresultsshowedthattheefficiencyof83%,87%,93%,respectively,theexperimentalresultsshowedthatgentamicinandamoxicillincaneffectivelycontroltheE.coli,andthemixturecaneffectivelyincreasetheefficacy,combinedwithdrugscanbettertreatE.coli.Keywords:chicken;Escherichiacoli;gentamicin;amoxicillin;separatedrug;combineduseofdrugs.目录中文摘要…………………………I英文摘要…………………………II目录……………=3\*ROMANIII1前言………………11.1鸡大肠杆菌病的概述……………………11.1.1大肠杆菌病的病原………………11.1.2大肠杆菌病的流行病学…………11.1.3鸡大肠杆菌病的发病机理………21.1.4鸡大肠杆菌病的危害……………21.2药物性质…………………31.2.1庆大霉素的性质…………………31.2.2阿莫西林的性质…………………31.3本次实验的目的和意义…………………42材料与方法………………………52.1材料………………………52.1.1药品………………52.1.2实验动物…………52.2方法………………………52.2.1病料的采集………………………52.2.2实验室诊断………………………52.2.3药敏实验…………62.2.4实验分组及处理…………………62.3疗效观察…………………63结果………………73.1感染鸡的剖检变化………………………73.2实验室观察………………83.2.1涂片镜检的结果…………………83.2.2细菌培养的结果…………………93.2.3药敏实验的结果…………………93.3疗效观察结果……………94讨论………………105总结………………11参考文献…………………………12致谢………………131前言1.1鸡大肠杆菌病的概述1.1.1大肠杆菌病的病原大肠杆菌病原为致病性大肠埃希氏杆菌。大肠杆菌是中等大小的笔直杆菌，它的大小为1～2.9μm×0.6～0.9μm，有鞭毛，没有芽胞，有些菌株可以形成荚膜，革兰氏染色为阴性，需氧或兼性厌氧，生化反应活泼、能分解大部分糖类、容易在普通的培养基上增殖，适应能力很强[1]。大肠杆菌具有不抗酸性和染色匀一性，对一般的消毒剂都敏感，还对抗生素和磺胺类药等都容易产生耐药性。对外界的抵抗力不强,常用的消毒药对大肠杆菌都有很好的杀灭效果。病原性大肠杆菌和人畜肠道内正常寄居的非致病性大肠杆菌在形态、染色体反应、培养特性和生化反应等方面没有区别，但抗原构造不同。根据抗原结构的不同，已经知到的大肠杆菌（O）抗原有170种，表面（K）抗原有103种，鞭毛（H）抗原有60种[2]，所以有许多血清型。根据菌毛抗原做的血清学鉴定，最常见的血清型有K88，K99。经常引起人畜肠道疾病的血清型中，有致病性大肠杆菌（EPEC）、毒素性大肠杆菌（ETEC）和侵袭性大肠杆菌（EIEC）等区别，很多肠毒素性大肠杆菌都有F抗原。在170种“0”型抗原血清型中大约一半对禽有致病性，但常见的是O1、O2、O78、O35四个血清型[3]。H7鸡较易感。已经证明了通过口腔感染后，能在鸡大肠内增殖而并不引起临诊症状的大肠杆菌有O157，H7。因为不断有新的血清型产生，越来越多大肠杆菌病病型也产生了，有败血型、内脏型、肠炎型、肉芽肿型、气囊炎型、输卵管炎型、皮下蜂窝组织炎型。致病性大肠杆菌通常具有特定的血清型，动物物种间很少发生交叉感染[12]。1.1.2大肠杆菌病的流行病学致病性大肠杆菌中的很多血清型可以引起各种畜禽发生本病，根据多年的调查，不同地区的优势血清型有一些差别，就是同一个地区的不同疫场的优势血清型也不全部相同。其中O1、02、04、011、018、026、078、088等多见于鸡。幼龄畜、禽对本病最易感。鸡由气囊感染引起的大肠杆菌病以气囊炎、纤维素性心包炎、肝周炎为特征，3～6周龄的小鸡发病率较高；其他病型，如胚胎感染、卵黄性腹膜炎等就发生在其他的年龄阶段。本病的主要传染源有带菌动物和患病动物，它们可以通过大便排出病原菌，散布在外界环境里，污染其他水源、空气、饲料还有母体的乳头和皮肤，当小崽吮乳、舐舔或饮食的时候，就通过小崽的消化道感染；大肠杆菌可以通过消化道感染家禽，也可以通过呼吸道感染家禽，或者病原菌可以通过蛋壳的裂隙进入胚胎而发生感染[4]。本病会发生在一年四季，小鸡发病率可达31%～59%，甚至全部死亡。饥饿或过饱，饲料配比不当或者突然改变饲料，气候变化，都能诱发本病[5]。集约化大密度养殖，通风不顺畅，饲料用具和环境不彻底消毒，都是引发本病的原因之一。1.1.3鸡大肠杆菌病的发病机理致病性大肠杆菌有很多种毒力因子，能引发不同的病理过程，已经知道的病理过程有：内毒素：当菌体崩解的时候，大肠杆菌外膜含有的脂多糖被释放出来，其中的类脂A具有内毒素的生物学功能，是一种独立的毒力因子，在引起败血症的重要原因。外毒素：大肠杆菌也可以产生外毒素，已知的是由ETEC产生的不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST），不耐热肠毒素有抗原性，可以激活肠毛细血管上皮细胞的腺苷环化酶，增加环腺苷酸的产生，导致肠粘膜细胞分泌亢进，引发腹泻和脱水，但66℃下31min就会被破坏；耐热肠毒素没有抗原性，100℃加热35min也不失去活性，可以激活回肠的上皮细胞的刷状缘绒毛上的鸟苷环化酶，使环鸟苷酸产生增加，同样也引起分泌性腹泻[6]。侵袭性：有些ETEC，像各种志贺氏菌一样，具有直接侵入并破坏肠粘膜细胞的能力。大肠杆菌素：从患病动物的体内分离的大肠杆菌，许多具有产生大肠杆菌素V的质粒。它与大肠杆菌引起败血症的能力有关。细胞毒素：由KonowalchuK等在1997年第一次从人源EPEC培养物滤液中发现出来，能导致Vero细胞病变，所以命名为Vero毒素，因毒性作用相似于痢疾志贺氏菌毒素，故又叫类志贺毒素（SLT）[13]。1.1.4鸡大肠杆菌病的危害在兽医临床上，大肠杆菌是常见的一种病原菌，也是动物和人的共生细菌，它抗原性复杂，血清型多，临床症状和病理变化也多样，而且会与病毒性疾病并发，也会和其他细菌性疾病一起发病，给畜牧业的发展带来了严重的经济损失，已经严重威胁到了畜禽和人类的健康，大肠杆菌带来的经济损失每一年都非常巨大，所造成的危害十分严重，医学上曾报道感染大肠杆菌O157后的死亡率为1.5%，病程约为6.9周[11]。大肠杆菌病在兽医临床上带来的危害也十分严重，它一年四季都可以发生，是妨碍养殖业发展的常见的传染病。其发病率、死亡率相当高，给养殖业造成极大的经济损失。在养殖业里面，不同的品种、不同的日龄的鸡一年四季都能发生感染，但以冬春寒冷最为常见，肉小鸡的易感性较高，其中11～44日龄肉鸡最常发病，在发病鸡群死亡周期，累计死亡率从5%～22%不等，严重的话可达到30%～40%。导致增重减慢，个体发育不均匀，饲料利用率降低[6]。大肠杆菌是鸡肠道的一种寄生菌，一般情况下不引起肉鸡发病，如果管理不善，气候突然变化，舍内的饲养密度过大，鸡的饲喂空间和饮水空间不够，舍内空气中有害气体浓度超标，疫苗接种、营养失衡、转群还有饲料霉变等都会造成大肠杆菌蔓延，而引起本病的发生与流行。如果治疗措施不恰当，就容易发生混合感染，死亡率也会升高，造成严重的经济损失。大肠杆菌可以垂直传播，也可以水平传播。途径有三种:一是母鸡是携带者,将病原体垂直传染给雏鸡；二是在孵化期间大肠杆菌通过蛋壳裂隙进入蛋内；三是接触感染，患病鸡与健康鸡同一舍饲养或经污染的饲料、水、垫草、尘埃、排泄物及分泌物等经呼吸道、消化道、泄殖腔途径进入体内。所以采用有效的药物治疗，是治疗大肠杆菌病的主要有效方法之一。1.2药物的性质1.2.1庆大霉素的性质庆大霉素，英文名Gentamicin，庆大霉素是一种氨基糖苷类抗生素,是自小单孢子属（Micromonosporapurpura）培养液中提取获得的C1、C1a和C23种成分的复合物。3种成分的抗菌活性和毒性基本一致。其硫酸盐为白色或类似白色的粉末；有引湿性；易溶于水，在乙醇、或乙醚中不溶解。庆大霉素是广谱抗生素，对革兰氏阴性菌有特效。和其他的氨基糖苷类药物作用一样，庆大霉素干扰细菌蛋白质合成。庆大霉素能阻断细菌蛋白质的合成。庆大霉素是热稳定性的抗生素，所以广泛应用在培养基配制。0.5～1h达血药峰浓度，鸡肌肉注射的生物利用率是95%。吸收以后主要分布在细胞外液，也可以进入胸腹腔、胆汁、心包腔及滑膜液里，也可以进入肌肉组织还有淋巴结。庆大霉素69%～78%以原型通过肾小球滤过从尿液中排出体外。在阴性菌中，对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和布鲁菌等均有较强的作用，对肠道菌及铜绿假单胞菌有高效。在阳性菌里面，对耐药金黄色葡萄球菌的作用最强，对耐药的葡萄球菌、溶血性链球菌、炭疽杆菌等也是有效的。除此之外，对支原体也有一定的作用。由于兽医临床广泛应用本品，耐药菌株已经慢慢变多，但没有链霉素、卡那霉素耐药菌株普遍，而且耐药性维持时间也很短，停止用药一段时间后可以恢复原来的敏感性[7]。1.2.2阿莫西林的性质阿莫西林又叫羟氨苄青霉素。是白色结晶性粉末，微苦，微溶于水、甲醇，几乎不溶于乙醇，其注射用钠盐易溶于水。对酸稳定，在碱性溶液中很快被破坏。阿莫西林的侧链为对羟基苯甘氨酸，其构型为R构型。阿莫西林化学结构中含有酸性的羧基，含有弱酸性的酚羟基，含有碱性的氨基，因此阿莫西林有三个PKa分别为2.4,7.4,9.5。本品的水溶液在PH6时较稳定[7]。阿莫西林是半合成的广谱青霉素类药物。阿莫西林在酸性条件下比较稳定，胃肠道吸收率比较高，吸收迅速，穿透细胞壁的能力强，阿莫西林杀菌作用强。对G+菌和G-菌(包括球菌和杆菌)都有较强的抑菌和杀菌作用。其中对肺炎链球菌、溶血性链球菌等链球菌属、不产青霉素酶葡萄球菌、粪肠球菌等需氧革兰阳性球菌，大肠埃希菌、奇异变形菌、沙门菌属、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需氧革兰阴性菌的不产β内酰胺酶菌株及幽门螺杆菌具有良好的抗菌活性[8]。阿莫西林可以进入脑脊液。乳中的药物浓度不高。敏感菌：链球菌A、B、C、F、G和非分组型、链球菌、沙门菌、放线菌、钩端螺旋体等。不稳定敏感菌：肺炎球菌、肠粪链球菌、大肠杆菌、志贺菌、霍乱弧菌、梭状杆菌等。耐药菌：葡萄球菌、普通变形杆菌、假单孢菌属、弯曲杆菌、支原体、立克次体等。1.3目的和意义随着国家集约化养禽业的迅速发展，大肠杆菌病已经成为威胁养鸡业的常见传染病，也是多发传染病之一，给养殖业造成了巨大的经济损失。大肠杆菌对氨基糖苷类、青霉素类抗生素、磺胺类药物及喹诺酮类药物都敏感，可是近年来还是出现了越来越多的耐药菌株。对于哈尔滨市呼兰区流行的菌株，根据体外药敏试验，我们选择了试验中较敏感的药物——阿莫西林、庆大霉素来进行治疗。因为单独用药和联合用药的药效有所差异，并且在使用过程中的方便程度及经济损耗也不一样，所以我们通过此试验来研究到底单独用药疗效好还是联合用药疗效好，选出治疗效果更好的方式，以减少家禽的死亡率，最终使患病家禽达到更高的存活率以提高其经济效益。2材料与方法2.1材料2.1.1药品硫酸庆大霉素（粉）（包装：50kg/桶含量：100g：5g批准文号：兽药字（2012）020136185；天津市诺维动物药业有限公司）。阿莫西林可溶性粉（包装：100g/袋含量:100g：10g批准文号：兽药字（2010）162061199；河南健恒动物药业有限公司）。2.1.2实验动物选来我院就诊的哈尔滨市呼兰区某养殖场的93只14日龄疑似患有大肠杆菌病的雏鸡。其中将三只病危雏鸡进行解剖诊断。2.2方法2.2.1病料的采集剖检过程中将症状明显的患鸡进行病料采集：分别剪取一部分有明显病灶的肝脏组织放入经过高压消毒的平皿中，作为1号病料。剪取一部分肺组织作为2号病料。取一部分脾脏组织作为3号病料。用一次性注射器抽取2ml关节液，作为4号病料。将4份病料送到金牧动物医院实验室进行培养及鉴定是否为大肠杆菌。2.2.2实验室诊断涂片镜检：在无菌操作条件下取1、2号病料，剪下一小部分组织进行抹片，自然干燥后进行刘氏染色。在玻片上滴加刘氏染液A（LiuA）30～45s，使组织细胞被染成红色，然后直接加上刘氏染液B（LiuB），吹气混匀，静置1～2min，最后用小流水冲洗残余染液，吸干，即可用显微镜观察。培养特性：用接种环在无菌操作条件下取适量3、4号病料进行肉汤平板划线，放入温箱中37℃培养24小时后观察结果。培养后镜检：先滴一小滴生理盐水在载玻片中央的位置，然后用灭过菌的接种环挑取培养基里生长比例最大的细菌进行抹片，自然干燥后进行革兰氏快速染色，然后用油镜观察。2.2.3药敏实验在无菌操作条件下，将上述培养的细菌接种于肉汤平板上，用纸片扩散法对盐酸庆大霉素、泰乐菌素、链霉素、头孢噻呋、阿莫西林、新霉素、环丙沙星、林可霉素、大观霉素进行药物敏感性试验，37℃培养24小时后，进行结果观察。结果按照抑菌环的直径大小来判断各抗菌药疗效的有效程度，评定分为高度敏感、中度敏感或低度敏感三种[9]。2.2.4试验分组及处理试验选用的90只患鸡为同一养殖场，共分为三组：Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组。其中：Ⅰ组：硫酸庆大霉素单独给药组（30只），（100mg/kg拌料），一天一次，连续给药5天；Ⅱ组：阿莫西林可溶性粉单独给药组（30只），（100mg/kg拌料），一天一次，连续给药5天；Ⅲ组：两种药联合给药组（30只），（各50mg/kg拌料，），一天一次，连续给药5天；按照上述方法给药，观察期为两周，每天观察鸡的各种临床表现，包括精神状态、食欲、粪便、饮水量等体况观察。2.3疗效观察2.3.1死亡率实验结束时，以死亡雏鸡的数量比小组鸡的总数计算各组的死亡率。死亡率=死亡数/小组总数×100%2.3.2治愈率实验结束时，经过用药以后，患鸡的食欲、饮欲、精神状况等恢复正常，再也不出现任何临床症状，都属于治愈了，以治愈雏鸡的数量比小组鸡总数来计算治愈率。治愈率=治愈数/小组总数×100%2.3.3有效率实验结束时，通过给药后全部治愈的雏鸡和没有死亡但有临床症状表现的雏鸡都看成有效；以最后每组还存活的雏鸡数比小组鸡的总数来计算各组的有效率。有效率=存活数/小组总数×100%3结果3.1临床症状与剖检变化3.1.1临床症状90只试验鸡出现的临床症状有：精神沉郁，羽毛松乱，饮食欲下降或废绝，肛门被粪污染，垂翅，离群呆立，头颈回缩，闭眼昏睡，不愿走动，拉稀粪，严重的趴在地上不起。3.1.2剖检变化3只病危鸡剖检特征是：气囊炎（图1）；肝脏充血，表面有大量渗出物（图2），肿胀易碎，肝脏表面有坏死灶（图3）；纤维素性心包炎（心包腔中有大量纤维素型渗出物），心外膜水肿并覆有淡黄色的渗出物（图4）。图1：患鸡气囊炎图2：患鸡肝脏表面大量纤维素性渗出物图3：患鸡肝周炎，肿大易碎图4：患鸡纤维素性心包炎3.2实验室诊断结果3.2.1涂片镜检的结果图5：呈两端钝圆，散在或成对存在3.2.2细菌培养的结果图6:在普通肉汤平板上长成1～2毫米的，呈乳白色、半透明、隆起、边缘整齐，有光泽，湿润光滑型的菌落。3.2.3药敏试验的结果高敏药物：庆大霉素、阿莫西林、链霉素（抑菌环大于15mm）；中敏药物：泰乐菌素、环丙沙星（抑菌环在10～15mm）；低敏药物：林可霉素、新霉素、大观霉素、头孢噻呋（抑菌环在10mm以下）。 3.3疗效观察结果按三种方法给药后，都能有效地减轻临床症状。给药5天以后，三组试验患鸡的治愈率、死亡率和有效率见表1。表1给药5d后各组的疗效结果Table1Theefficacyofthetreatmentwas5daysafteradministration序号死亡数治愈率死亡率有效率一5只80%17%83%二4只73%13%87%三2只87%07%93%硫酸庆大霉素（粉）和阿莫西林可溶性粉单独用药对鸡大肠杆菌病都有较好的疗效，而两种药物联合用药时的效果更佳。4讨论鸡大肠杆菌病是兽医临床上最常见的鸡的传染病，鸡大肠杆菌病的临床症状复杂，病理特征多，大肠杆菌病常给养殖业造成很大的经济损失。采用有效的药物治疗，是治疗大肠杆菌病的有效途径。鸡大肠杆菌病都是由致病性大肠杆菌引起的禽类和人类共患的传染病，各阶段日龄的鸡和各个品种的鸡都容易感染本病。由于养鸡业发展的越来越快，特别是集约化饲养越来越多，大肠杆菌病在一些鸡场中会时有发生，根据调查报告显示，该病的发病率和死亡率较高，因为目前疫苗预防的效果不是很理想，而耐药菌株又不断产生，所以预防和治疗工作都有一定的难度[10]。目前市场销售治疗鸡大肠杆菌病的药物很多，不同制剂和不同用药方法的疗效有一定的差异。就庆大霉素和阿莫西林而言，单独用药时给药方便、但效果不如联合用药确实。与普通口服溶液相比，采用饮水给药或混饲给药的方式，是值得引用的。从畜主的口述中可初步判定，这次发生大肠杆菌感染的原因是鸡场的设备比较简陋，建立不起生物安全体系。疫苗也不是正规厂家生产，这给疫病的流行创造了条件。好在养殖户能及时送检，通过实验室检测手段确定了发病原因，进而采取严格的隔离、消毒等措施，及时地切断了传播途径，对疫病的控制起了关键性的作用。本次实验由剖检结果可以看出，该鸡群所表现出的症状与大肠杆菌病的症状极其相似，初步怀疑为大肠杆菌病。经过实验室的一系列鉴定，如涂片镜检观察细菌形态、细菌培养确定细菌的培养特性等来对病原菌进行进一步的鉴定。实验结果均符合大肠杆菌的相关理论，因此诊断病鸡患有大肠杆菌病[4]。但由于实验室的条件有限，具体属哪一类血清型，还需要进一步的鉴定。通过药敏试验可知硫酸庆大霉素属于高敏药物，阿莫西林也属于高敏药物，均可对鸡大肠杆菌病起到治疗效果。而疗效观察试验中两种药物联合使用的雏鸡的死亡率更低。硫酸庆大霉素和阿莫西林对大肠杆菌具有高敏作用，而其他的药物对该菌是中敏或低敏作用。就硫酸庆大霉素而言，其特点表现黏性更小，对肌肉无任何刺激性，更容易被身体组织快速吸收，它透过膜的速度比头孢菌素类抗生素更快，对大肠杆菌有较好疗效；而阿莫西林对机体刺激性小，不容易产生应激反应，生物利用度高，临床效果好，对机体活性高，见效快，作用迅速，使用后1小时就可发挥作用，可维持有效血药浓度24小时，且无药物残留和抗药性，抗菌力极强，可与多种药物配合使用，产生抗药性现象和交叉抗药性现象的可能性低，显著降低死亡率，对大肠杆菌也有显著疗效。而以上两种药物联合使用效果更佳，治愈率更高，死亡率更低，充分体现了药物协同作用的优势[11]。总结本次诊疗过程，提示养殖场的饲养管理和生物安全体系是生产的关键部分，采取全进全出的制度，发病后不能自行用药，准确确诊是用药的前提，所以必须及时送样到有条件的单