2026年医学研究生入学考试生物化学实验题集

2026年医学研究生入学考试生物化学实验题集一、选择题（每题2分，共20题）（本题型共20题，每题2分，总分40分）1.在测定酶活性时，最常用的底物浓度选择原则是？A.底物浓度远高于酶浓度B.底物浓度等于酶浓度C.底物浓度远低于酶浓度D.底物浓度与产物浓度相等2.分离纯化蛋白质时，下列哪种方法最适合分离分子量较小的蛋白质？A.离子交换色谱B.凝胶过滤色谱C.亲和色谱D.凝胶电泳3.在测定血糖时，邻甲苯胺法属于哪种检测方法？A.酶法B.非酶法C.胶体金法D.免疫法4.蛋白质变性后，下列哪项性质会改变？A.分子量B.等电点C.溶解度D.氨基酸组成5.在测定酶动力学参数时，米氏常数（Km）表示什么？A.酶的最大反应速率B.酶的最适pH值C.底物浓度达到一半最大反应速率时的浓度D.酶的催化效率6.核酸杂交实验中，最常用的探针是？A.DNA探针B.RNA探针C.蛋白质探针D.多肽探针7.在测定脂质过氧化产物时，TBA法检测的是哪种物质？A.丙二醛（MDA）B.过氧化氢（H₂O₂）C.超氧阴离子（O₂⁻）D.过氧化物酶（POD）8.糖尿病患者的尿糖检测常用哪种方法？A.葡萄糖氧化酶法B.胶体金法C.碘量法D.比色法9.在测定蛋白质浓度时，Bradford法基于什么原理？A.蛋白质与染料结合后吸光度变化B.蛋白质与荧光物质结合后荧光强度变化C.蛋白质与电泳缓冲液结合后电阻变化D.蛋白质与放射性同位素结合后计数变化10.细胞色素C氧化酶活性测定时，最常用的底物是？A.NADHB.FADH₂C.CytochromecD.O₂二、填空题（每空1分，共10空）（本题型共10空，每空1分，总分10分）1.分离纯化蛋白质时，______色谱常用于初步分离粗提液中的杂蛋白。2.测定酶活性时，______是酶促反应速率达到最大时的底物浓度。3.糖酵解途径中，______是唯一的产生ATP的酶促反应。4.核酸杂交实验中，______是检测目标序列的常用方法。5.脂质过氧化时，______是最主要的终产物。6.蛋白质变性后，______会丧失其生物学活性。7.测定血糖时，邻甲苯胺法属于______检测方法。8.核酸电泳时，______是常用的缓冲液系统。9.蛋白质定量时，Bradford法基于______原理。10.细胞色素C氧化酶活性测定时，______是最终的电子受体。三、简答题（每题5分，共6题）（本题型共6题，每题5分，总分30分）1.简述凝胶过滤色谱的分离原理及其应用。2.解释酶动力学参数Km和Vmax的物理意义。3.简述邻甲苯胺法测定血糖的原理。4.说明核酸杂交实验的基本步骤。5.简述脂质过氧化的检测方法及意义。6.解释蛋白质变性的原因及其对生物学活性的影响。四、论述题（每题10分，共2题）（本题型共2题，每题10分，总分20分）1.论述蛋白质分离纯化的基本步骤及其注意事项。2.论述血糖检测方法的分类及其临床应用。答案与解析一、选择题答案与解析1.A解析：酶动力学实验中，底物浓度应远高于酶浓度，以避免底物限制反应速率，确保反应速率与酶浓度成正比。2.B解析：凝胶过滤色谱（Gelfiltrationchromatography）根据分子大小分离蛋白质，分子量较小的蛋白质更容易进入凝胶孔隙，从而与较大分子分离。3.B解析：邻甲苯胺法是传统的非酶法测定血糖的方法，基于葡萄糖与邻甲苯胺反应生成绿色产物，吸光度与血糖浓度成正比。4.C解析：蛋白质变性会导致其空间结构破坏，溶解度降低，但分子量和氨基酸组成不变。5.C解析：Km是底物浓度达到最大反应速率一半时的浓度，反映酶与底物的亲和力。6.A解析：DNA探针是核酸杂交中最常用的探针，通过与目标序列互补结合，检测目标核酸的存在。7.A解析：TBA法（硫代巴比妥酸法）检测脂质过氧化产物丙二醛（MDA），通过显色反应定量MDA。8.A解析：葡萄糖氧化酶法是临床常用的尿糖检测方法，基于葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，再通过显色反应检测。9.A解析：Bradford法基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料结合后吸光度变化，与蛋白质浓度成正比。10.D解析：细胞色素C氧化酶活性测定时，氧气（O₂）是最终的电子受体，通过测定氧气消耗速率反映酶活性。二、填空题答案与解析1.离子交换解析：离子交换色谱通过蛋白质与离子交换树脂上的带电基团相互作用，实现初步分离。2.Vmax解析：Vmax是酶促反应速率达到最大时的速率，此时底物浓度远高于酶浓度。3.磷酸甘油酸激酶解析：糖酵解途径中，磷酸甘油酸激酶催化1,3-二磷酸甘油酸生成3-磷酸甘油酸，并产生ATP。4.核酸杂交解析：核酸杂交是检测目标序列的常用方法，通过探针与目标序列互补结合，检测杂交信号。5.丙二醛（MDA）解析：脂质过氧化主要产物是MDA，其检测可反映细胞氧化应激水平。6.生物学活性解析：蛋白质变性后，其空间结构破坏，导致生物学功能丧失。7.非酶法解析：邻甲苯胺法属于非酶法血糖检测，无需酶催化，操作简便。8.TBE或TGE解析：TBE（Tris-Borate-EDTA）或TGE（Tris-Glycine-EDTA）是核酸电泳常用的缓冲液系统。9.蛋白质与染料结合后吸光度变化解析：Bradford法基于蛋白质与考马斯亮蓝染料结合后吸光度变化，定量蛋白质浓度。10.氧气（O₂）解析：细胞色素C氧化酶将电子传递给氧气，氧气是最终的电子受体，生成水。三、简答题答案与解析1.凝胶过滤色谱的分离原理及其应用解析：凝胶过滤色谱（Gelfiltrationchromatography）基于分子大小分离蛋白质，大分子难以进入凝胶孔隙，先流出；小分子进入孔隙，后流出。应用：分离纯化蛋白质、测定分子量、去除小分子杂质。2.酶动力学参数Km和Vmax的物理意义解析：Km是底物浓度达到最大反应速率一半时的浓度，反映酶与底物的亲和力；Vmax是酶促反应速率达到最大时的速率，反映酶的催化效率。3.邻甲苯胺法测定血糖的原理解析：葡萄糖在酸性条件下与邻甲苯胺反应生成绿色产物，吸光度与血糖浓度成正比，通过比色法定量血糖。4.核酸杂交实验的基本步骤解析：①制备探针（标记放射性或荧光）；②变性模板核酸和探针；③杂交（温控条件下结合）；④洗涤（去除未结合探针）；⑤检测（显影或荧光成像）。5.脂质过氧化的检测方法及意义解析：检测方法：TBA法（检测MDA）、硫代巴比妥酸法（比色法）；意义：反映细胞氧化应激水平，与多种疾病相关（如动脉粥样硬化、阿尔茨海默病）。6.蛋白质变性的原因及其对生物学活性的影响解析：原因：高温、强酸碱、有机溶剂破坏蛋白质空间结构；影响：变性后蛋白质失去生物学活性（如酶失活、抗原性丧失）。四、论述题答案与解析1.蛋白质分离纯化的基本步骤及其注意事项解析：①粗提：细胞裂解，提取总蛋白；②初步分离：盐析、有机溶剂沉淀；③精制：离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱；④纯度鉴定：SDS、WesternBl